愈瘍膠囊對(duì)乳腺增生大鼠雌激素影響的實(shí)驗(yàn)研究＊

羅倫才 ，黃蘭雅，季小平，李列平，邢晉苓 ，劉志康

(1.四川省涼山彝族自治州第二人民醫(yī)院，四川 涼山 615000;2.雅安職業(yè)技術(shù)學(xué)院藥學(xué)檢驗(yàn)系，四川 雅安 625000)

乳腺增生癥的發(fā)病原因尚不十分清楚，一般認(rèn)為與卵巢內(nèi)分泌功能紊亂有關(guān)。目前，西醫(yī)常采用雌激素類藥物和碘制劑等療法，但效果不甚理想且不良反應(yīng)較大，外科手術(shù)治療又常引起其他部位的復(fù)發(fā)，且患者較難接受。愈瘍膠囊為醫(yī)院自制制劑，是由山藥、蜂蠟等藥物組成，采用特殊炮制和制劑工藝制備而成的純中藥制劑，具有泄壅滯、逐痰積、消腫毒、排膿腐、生肌健脾等功效，臨床應(yīng)用數(shù)年來，證明其對(duì)乳腺增生有顯著療效。筆者通過實(shí)驗(yàn)研究觀察了愈瘍膠囊對(duì)乳腺增生大鼠內(nèi)分泌激素的影響并探討其作用機(jī)制，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 儀器、試藥與動(dòng)物

PowerWaveX2型紫外全波長(zhǎng)掃描儀(美國(guó)Gene有限公司)。大鼠孕酮酶聯(lián)檢測(cè)試劑盒(美國(guó)UNIONHONEST公司)、大鼠雌二醇受體酶聯(lián)檢測(cè)試劑盒(美國(guó)USCNLIFE公司)均由武漢中美科技有限公司提供。苯甲酸雌二醇注射液 (天津金耀氨基酸有限公司，批號(hào)為0807071，規(guī)格為1 mg∶1 mL);黃體酮注射液(浙江仙琚制藥股份有限公司，批號(hào)為081006，規(guī)格為1 mL∶20 mg)。愈瘍膠囊(涼山彝族自治州第二人民醫(yī)院制劑室自制，批號(hào)為090104，規(guī)格為0.45 g×42粒/瓶，用前加蒸餾水溶解配制成0.09 g/mL的藥液備用);乳癖消片(遼寧好護(hù)士藥業(yè)＜集團(tuán)＞有限責(zé)任公司生產(chǎn)，批號(hào)為090310，規(guī)格為0.32 g×100片/瓶，用前加蒸餾水溶解配制成0.192 g/mL的藥液備用)。SD大鼠，SPF級(jí)，雌性，體重200～230 g，購自四川大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，合格證號(hào)為SCXK川2008-24，于自然光線、自由飲水?dāng)z食條件下適應(yīng)性喂養(yǎng)1周備用。

1.2 方法

取成年雌性未孕大鼠，隨機(jī)分為空白對(duì)照組、模型對(duì)照組、陽性對(duì)照組和愈瘍膠囊組，每組8只。除空白對(duì)照組外，其余各組均肌肉注射苯甲酸雌二醇0.5 mg/kg，1次/d，連續(xù)注射23 d，第24天開始每天肌肉注射黃體酮5.0 mg/kg，連續(xù)注射3 d。從造模第1天開始，除模型對(duì)照組外，陽性對(duì)照組和愈瘍膠囊組分別灌胃配制好的乳癖消片或愈瘍膠囊藥液40 mL/kg，空白對(duì)照組灌胃等量生理鹽水，每天1次，直至試驗(yàn)結(jié)束。最后一次給藥后60 min，取股主動(dòng)脈血，離心，取血清，以酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)孕酮水平，于450 nm波長(zhǎng)處測(cè)定光密度(OD)值，求得孕酮含量。取大鼠第3對(duì)乳腺，剪碎，用磷酸鹽緩沖液洗滌，去除多余血液，勻漿化后放在20 mL磷酸鹽緩沖液中于-20℃放置過夜，反復(fù)凍融2次破膜，將勻漿物以5 000 r/min離心5 min，取上清液，采用酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)雌二醇受體水平，于450 nm波長(zhǎng)處測(cè)定 OD值，求得雌二醇受體含量。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

所有數(shù)據(jù)均應(yīng)用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件分析，區(qū)間變量以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，采用單因素方差分析進(jìn)行組間顯著性檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 血清孕酮與乳腺組織雌二醇受體含量

與正常對(duì)照組比較，模型對(duì)照組大鼠的血清孕酮含量降低而乳腺組織雌二醇受體水平升高，差異均有極顯著性(P＜0.01);與模型對(duì)照組比較，愈瘍膠囊組大鼠血清孕酮含量升高而乳腺組織雌二醇受體水平降低，差異均有顯著性或極顯著性(P＜0.05或 P＜0.01)。具體結(jié)果見表1。

表1 愈瘍膠囊對(duì)模型大鼠血清孕酮和乳腺組織雌二醇受體的影響(±s)

表1 愈瘍膠囊對(duì)模型大鼠血清孕酮和乳腺組織雌二醇受體的影響(±s)

注:與空白對(duì)照組比較，#P＜0.01;與模型對(duì)照組比較，△P＜0.05，▲P ＜0.01。

雌二醇受體(ng)8.69±3.42 16.85±3.51#12.51±2.57△9.45±3.41▲組別空白對(duì)照組(n=8)模型對(duì)照組(n=8)陽性對(duì)照組(n=8)愈瘍膠囊組(n=8)孕酮(ng/mL)20.33±3.81 14.07±2.66#18.79±5.58△17.81±3.86△

2.2 乳腺組織病理變化

模型對(duì)照組大鼠的乳腺小葉腺泡數(shù)明顯增多，腺泡腔和小葉導(dǎo)管腔明顯擴(kuò)張，腺泡和導(dǎo)管內(nèi)分泌物增多，表明造模成功。與模型對(duì)照組比較，愈瘍膠囊組大鼠乳腺導(dǎo)管上皮細(xì)胞排列比較整齊，小葉腺泡數(shù)、腺泡直徑、小葉導(dǎo)管直徑、分泌物均明顯減少。兩組大鼠乳腺組織的病理切片見圖1。

圖1 乳腺增生大鼠乳腺組織病理切片(×40)

3 討論

乳腺增生病是乳房的一種非炎癥性疾病，又稱乳腺小葉增生或慢性囊性乳腺病，臨床上是25～40歲女性的多發(fā)病與常見病，以乳房腫塊和乳房脹痛為主要臨床表現(xiàn)?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)多認(rèn)為激素內(nèi)分泌失調(diào)是本病的主要原因。雌激素主要由卵泡細(xì)胞產(chǎn)生，是直接刺激乳房生長(zhǎng)、發(fā)育的最重要激素。在雌激素的作用下，乳腺導(dǎo)管廣泛增生、延長(zhǎng)，乳腺間質(zhì)結(jié)締組織增生。孕激素主要由卵巢黃體細(xì)胞產(chǎn)生，在雌激素的作用下可使乳腺導(dǎo)管進(jìn)一步增生和延長(zhǎng)，并促進(jìn)腺泡和腺小葉的形成;另一方面，孕激素可以通過加速雌激素的代謝而降低雌激素水平[1-2]。生理?xiàng)l件下雌激素能對(duì)雌、孕激素受體產(chǎn)生正向調(diào)節(jié)作用，使其數(shù)量增多、親和力增強(qiáng)，但血中激素濃度激烈波動(dòng)時(shí)，機(jī)體自我調(diào)節(jié)使受體向激素改變的相反方向變化[1]。當(dāng)機(jī)體存在雌激素絕對(duì)或相對(duì)升高，而孕激素絕對(duì)或相對(duì)不足時(shí)，乳腺組織長(zhǎng)期處于雌激素刺激增生過度而復(fù)舊不全的狀態(tài)，久而久之就會(huì)發(fā)生乳腺增生病[3]。乳腺增生時(shí)存在的內(nèi)分泌失調(diào)，主要涉及孕酮、睪酮、垂體促乳素和雌二醇的平衡失調(diào)，進(jìn)而影響乳腺組織正常平衡性變化，雌激素的過度刺激使乳腺組織從正常到增生乃至腫瘤形成[4]。

中醫(yī)認(rèn)為，乳腺增生病屬“乳癖”病范疇，其最主要的臨床癥狀乳房包塊和腫痛的形成與痰瘀關(guān)系密切。痰瘀互結(jié)于乳絡(luò)，結(jié)而不散則腫塊形成;阻于絡(luò)道，氣機(jī)失調(diào)，經(jīng)脈不通則疼痛。愈瘍膠囊精選味甘性平的山藥，補(bǔ)氣健脾以絕生痰之源，兼治乳癖結(jié)塊以及諸痛日久[5]而為君藥;伍以祛風(fēng)、攻毒、鎮(zhèn)痛、破瘕積聚堅(jiān)結(jié)、消痰破血、開通閉塞、消腫毒的蜂蠟等藥味，標(biāo)本兼顧，可達(dá)化痰散結(jié)、消腫止痛的目的，是針對(duì)該病的病因病機(jī)選藥組方，故臨床能取得顯著療效。

本研究結(jié)果顯示，在造模過程中，長(zhǎng)期大量應(yīng)用外源性雌二醇啟動(dòng)了應(yīng)激系統(tǒng)對(duì)雌激素不良刺激的抵抗，阻止雌激素進(jìn)入細(xì)胞核與靶基因結(jié)合產(chǎn)生生物效應(yīng)。模型對(duì)照組大鼠雌二醇受體的明顯升高和孕酮明顯降低說明，雌激素的絕對(duì)升高和孕酮的相對(duì)不足是乳腺組織出現(xiàn)病理性增生的根本原因，HE染色病理學(xué)檢查結(jié)果進(jìn)一步證明了造模是成功的。造模成功大鼠灌胃愈瘍膠囊后，乳腺組織中雌二醇受體含量明顯降低，血清中孕酮含量升高;病理學(xué)檢查結(jié)果還顯示，愈瘍膠囊可抑制乳腺小葉和腺泡增多，抑制導(dǎo)管上皮增生。以上結(jié)果表明，對(duì)雌激素造模成功的大鼠灌胃具泄壅滯、逐痰積、消腫毒功能的愈瘍膠囊，減弱了大量雌激素造成的不良刺激，降低了乳腺組織對(duì)雌激素的敏感性，減弱了雌激素在靶細(xì)胞上的生物學(xué)效應(yīng)，從而抑制乳腺上皮細(xì)胞的增生，保護(hù)乳腺結(jié)構(gòu)，且促進(jìn)孕酮功能的正常發(fā)揮，最終產(chǎn)生抑制和治療乳腺增生的作用。

綜上所述，愈瘍膠囊能通過調(diào)節(jié)血清中孕激素、乳腺組織中雌激素受體水平來達(dá)到治療乳腺增生的作用。其作用機(jī)制可能是通過調(diào)節(jié)下丘腦-垂體-卵巢性腺軸的功能，改善機(jī)體內(nèi)分泌功能，糾正異常激素水平使之恢復(fù)正常平衡而實(shí)現(xiàn)的。但有關(guān)愈瘍膠囊如何影響下丘腦-垂體-卵巢性腺軸，尚有待進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)研究予以闡明和證實(shí)。

[1]Godschalk MF，Unice KA，Bergner D，et al.A trial study:the effect of low dose human chorionic gonadotropin on the symptoms of benign prostatic hyperplasia[J].J Urol，2003，170(4 Pt 1):1 264-1 269.

[2]Foster WG，Younglai EV，Boutross-Tadross O，et al.Mammary gland morphology in Sprague-Dawley rats following treatment with an organochlorine mixture in utero and neonatal genistein[J].Toxicol Sci，2004，77(1):91-100.

[3]林 毅，唐漢鈞.現(xiàn)代中醫(yī)乳房病學(xué)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社，2003:103.

[4]Henderson BE，Ross R，Bernstein L.Estrogens as a cause of human cancer:the Richard and Hinda Rosenthal，F(xiàn)oundation award lecture[J].Cancer Res，1988，48(2):246.

[5]江蘇新醫(yī)學(xué)院.中藥大辭典(上冊(cè))[M].上海:上海人民出版社，1977:167.