核酸雜交基因芯片法檢測人乳頭狀瘤病毒結(jié)果分析

白瑞

河南南陽油田總醫(yī)院檢驗科，河南南陽 473132

人乳頭狀瘤病毒（HPV）是誘發(fā)女性宮頸癌及生殖器病變的主要病源。臨床HPV檢測對于發(fā)現(xiàn)宮頸癌高?；颊?，早期防治具有重要意義?，F(xiàn)報道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取我院2010年4月～2011年1月的宮頸脫落細(xì)胞標(biāo)本395例。

1.2 采集方法

將宮頸刷置于宮頸口，輕輕搓動宮頸刷順時針旋轉(zhuǎn)5圈后，放入標(biāo)有患者編號的細(xì)胞保存液管中，送檢。

1.3 試驗方法

1.3.1 HPV-DNA分離提取 取保存有宮頸細(xì)胞的細(xì)胞保存液0.5 ml，以14 000 rpm離心10 min，棄上清液后，利用凱普生物化學(xué)科技公司提供的基因組抽提試劑提取DNA，嚴(yán)格按照說明書操作。

1.3.2 PCR擴增 擴增儀由上海宏石醫(yī)療科技有限公司生產(chǎn)的SLAN熒光定量PCR儀，試劑由潮州凱普生物化學(xué)有限公司提供。分別設(shè)陰性對照和陽性對照各1份。

1.3.3 雜交 試劑由凱普生物化學(xué)有限公司提供，HyBriMax醫(yī)用核酸分子快速雜交儀由凱普生物科技有限公司提供。

2 結(jié)果

2.1 患者年齡分布

2010年4月～2011年1月筆者檢測了395例HPV感染患者，其中，20～29歲 18例，占 4.8%；30～39 歲 185例，占 46.8%；40～49歲 175例，占 44.3%；50～59歲 16例，占 4.1%；60歲以上1例。以30～49歲為最多。

2.2 HPV-DNA分型情況

395例患者中，檢出HPV感染179例，陽性率為45.3%。單一類型感染145例，占總感染的81.0%；二種類型感染27例，占總感染的15.1%；三種類型及以上感染7例，占總感染的3.9%。 見表1、2。

3 討論

宮頸癌是最常見的婦科惡性腫瘤之一，全球范圍內(nèi)其發(fā)病率在女性惡性腫瘤中排第二位。據(jù)世界范圍內(nèi)統(tǒng)計，每年約有49.3萬的宮頸癌新發(fā)病例，其中，有27.4萬婦女死于該病，并且83%的宮頸癌發(fā)生在發(fā)展中國家[1-2]，而我國宮頸癌患病率和死亡率均占世界的1/3。同時也是我國婦女發(fā)病率最高的惡性腫瘤之一，嚴(yán)重威脅著廣大婦女的生殖及生命健康，我國的宮頸癌發(fā)病率呈總體下降趨勢但年輕患者發(fā)病率呈增加的趨勢。而高危型HPV持續(xù)感染是宮頸癌發(fā)生、發(fā)展的必要條件[3]，HPV感染與宮頸上皮肉瘤樣病變（CIN）和宮頸癌（ICC）的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，它影響著CIN和ICC的病理分類和臨床治療[4]。HPV含量與宮頸癌病變程度正相關(guān)[5]。宮頸癌亦因而成為目前唯一一種原因明確的可以預(yù)防和治愈的惡性腫瘤[6-7]。

表1 145例HPV-DNA單一型感染分布

表2 34例HPV-DNA二種類型感染及三種以上類型感染分布

及時正確的宮頸病變診斷和治療對宮頸病變的轉(zhuǎn)歸及預(yù)后有重要影響，選擇靈敏度高、特異性強的HPV的分型檢測方法，是實現(xiàn)早期篩查的保證。本實驗采用的實時熒光定量PCR技術(shù)，結(jié)合了PCR的高靈敏性和探針雜交的高特異性，利用雜交導(dǎo)流的原理，在已經(jīng)固定好核酸探針的低密度基因芯片膜上可快速準(zhǔn)確區(qū)分占中國人群HPV感染95%的21種類型，并在數(shù)小時內(nèi)獲得結(jié)果，是臨床診斷和普查的理想方法。在本實驗中，HPV16及HPV58感染率最高，分別占31.0%和19.3%，這與曾維英等[8]的報道相近，HPV 16/18型陽性率達28.1%，這可能與地區(qū)性分布有關(guān)。而在各年齡組中又以30～49歲感染率最高，占感染人群的91.1%，提示該年齡段人群應(yīng)密切關(guān)注HPV的感染情況，并定期篩查。

[1]余雷,楊建勇.宮頸癌的介入治療進展[J].微創(chuàng)醫(yī)學(xué),2010,(4):373-375.

[2]趙虎,張慶.局部晚期宮頸癌新輔助化療48例臨床分析[J].中國醫(yī)藥科學(xué),2011,1(5):55-56.

[3]李淑敏,章文華,吳令英.人乳頭癌病毒負(fù)荷量與子宮頸癌及癌前病變關(guān)系的初步研究[J].中華婦產(chǎn)科雜志,2004,34(6):400.

[4]張菊,高艷娥,趙錦榮.HPV檢測在宮頸癌預(yù)警和篩查中的研究[J].國外醫(yī)學(xué):婦產(chǎn)科學(xué)分冊,2003,30(5):319-322.

[5]梁彩虹,楊光.宮頸癌病理組織中HPV基因型別分析[J].江西醫(yī)學(xué)檢驗,2007,25(4):299-301.

[6]陶萍萍.女性生殖道人乳頭瘤病毒基因型研究進展[J].中國實用婦科與產(chǎn)科雜志,2005,21(8):507-509.

[7]梁雯.宮頸病變與人乳頭瘤病毒基因型的檢測[J].廣西醫(yī)學(xué),2007,29(2):265-266.

[8]曾維英,鄭和平,黃進梅.性病門診192例就診者宮頸拭子HPV檢測結(jié)果分析[J].嶺南皮膚性病雜志,2005,12(1):29-30.