復(fù)方羅紅霉素片多劑量給藥在健康志愿者體內(nèi)的藥動學(xué)

任秀華，申玲玲，向道春，劉宇，陳倩，張冬林，方淑賢，劉東，杜光

(華中科技大學(xué)同濟醫(yī)學(xué)院附屬同濟醫(yī)院藥學(xué)部，武漢 430030)

羅紅霉素是半合成、長效、對酸穩(wěn)定的大環(huán)內(nèi)酯類抗菌藥物，可有效殺死引起呼吸道感染的各種致病菌;氨溴索為黏痰溶解藥，是目前臨床上最有效、安全的鎮(zhèn)咳祛痰藥，能使黏液溶解、促進肺表面活性物質(zhì)合成及激活黏液纖毛痰凈化等功能，尚有降低痰液與纖毛的黏著力，使痰液易于咳出的作用，可有效緩解呼吸道疾病的臨床癥狀，還可增加抗菌藥物在肺組織及其分泌物中的濃度，提高抗菌療效。臨床上常將兩種藥物合用。復(fù)方羅紅霉素片為羅紅霉素和氨溴索組成的復(fù)方制劑。筆者曾研究了單劑量給予復(fù)方羅紅霉素片體內(nèi)藥動學(xué)特征，分析復(fù)方羅紅霉素片與羅紅霉素合用氨溴索片相比，主要藥動學(xué)參數(shù)無明顯差異。為進一步了解多劑量給予復(fù)方羅紅霉素片后兩主藥的藥動學(xué)性質(zhì)，筆者在本試驗中采用隨機對照平行試驗的方法，測定健康受試者分別多次口服試驗藥復(fù)方羅紅霉素片與市售對照藥羅紅霉素片加氨溴索片后不同時間血漿羅紅霉素與氨溴索的濃度，分別評價羅紅霉素與氨溴索藥動學(xué)參數(shù)的差異，為臨床應(yīng)用復(fù)方羅紅霉素片提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 受試者 24例健康受試者，男女各半。年齡20～26歲，平均(22.00±1.44)歲;身高155～176 cm，平均(167.00±6.68)cm;體質(zhì)量 48～70 kg，平均(59.00±6.15)kg。受試者肝腎功能和血、尿常規(guī)及心電圖均正常，皮膚變態(tài)反應(yīng)試驗陰性。試驗前3個月未獻血或作為受試者被采樣，近2周內(nèi)未服用過任何藥物，無藥物致變態(tài)反應(yīng)史和煙酒嗜好。簽署知情同意書，并經(jīng)倫理委員會批準后進行試驗。

1.2 試藥與儀器

1.2.1 試藥 復(fù)方羅紅霉素片(每片含羅紅霉素150 mg、氨溴索30 mg，揚子江藥業(yè)集團有限公司生產(chǎn)，批號:08103001)，對照藥羅紅霉素片(賽諾菲安萬特公司生產(chǎn)，含羅紅霉素150 mg，批號:8D29A)，鹽酸氨溴索片(勃林格殷格翰公司生產(chǎn)，含鹽酸氨溴索30 mg，批號:884291)，羅紅霉素對照品(中國藥品生物制品檢定所提供，批號:130557-200502，純度:94.1%)，克拉霉素對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號:130558-200501，純度:97.5%)，氨溴索對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號:100599-200502)，西替利嗪對照品(中國藥品生物制品檢定所提供，批號:100266-200101)，甲醇、乙腈均為色譜純(購自Tedia公司)，實驗用水均為雙蒸水，其余試劑均為分析純。

1.2.2 儀器 液相色譜系統(tǒng):島津LC-20AD型高效液相色譜儀，SIL-20ACHT自動進樣器，CTO-20AC柱溫箱;MS/MS系統(tǒng):美國API3200型質(zhì)譜儀，配電噴霧離子化源(electrospray ionization，ESI);數(shù)據(jù)采集:API3200 Analysis軟件(美國AB公司);分析天平:AB-265S型精密天平(日本梅特勒公司);混合器:WH-1微型漩渦混合儀(上海滬西分析儀器廠);TL80-2型醫(yī)用離心機，姜堰市天力醫(yī)療器械有限公司。

1.3 試驗方法 受試者24例，男女各半，隨機分為兩組。一組受試者服用試驗藥復(fù)方羅紅霉素片，另一組受試者服用羅紅霉素片和氨溴索片。一次服用羅紅霉素150 mg+氨溴索30 mg，每日服藥2次，每隔12 h服藥一次，連續(xù)4 d，于第7～9次服藥前采血5 mL作為穩(wěn)態(tài)濃度，第5天晨間服藥(即第9次服藥)后20，40 min，1，1.5，2，3，4，6，8，10，12，24，36，48 h 肘靜脈采血5 mL。血樣置于肝素化試管中，離心分離血漿，-80℃冷凍貯存待分析。試驗期間忌煙酒，禁飲含咖啡和碳酸的飲料，避免劇烈運動，亦不得長時間臥床。

整個試驗過程中，依照試驗方案進行樣品采集，醫(yī)生、護士對受試者進行各項監(jiān)護，觀察和記錄受試者各項生命體征及可能發(fā)生的任何不良反應(yīng)，并及時處理。

1.4 色譜/質(zhì)譜條件 羅紅霉素:色譜柱為Waters ODS C18柱(2.1 mm×50 mm，3.5 μm);流動相為甲醇∶5 mmol·L-1乙酸銨(含0.03%甲酸)=55∶45;流速:0.2 mL·min-1;自動進樣器溫度:15℃;柱溫:40℃;進樣量:5 μL。采用 ESI+多反應(yīng)離子監(jiān)測(multiple reaction monitoring，MRM)方式監(jiān)測;毛細管電壓:5.5 kV;源溫度:450℃;錐孔氣體流速:25 L·h-1;去溶劑氣體流速25 L·h-1;氣簾氣流速25 L·h-1;入口電壓(entrance potential，EP)5.0 eV。羅紅霉素質(zhì)譜條件:檢測離子對837.6/679.5;DP 57;CE 30;CXP 11;克拉霉素質(zhì)譜條件:檢測離子對748.6/590.4;DP 56;CE 30;CXP 11。

氨溴索:色譜柱為 Waters ODS C18柱(2.1 mm×50 mm，3.5 μm);流動相為甲醇∶5 mmol·L-1乙酸銨=14.5∶5.5;流速:0.2 mL·min-1;自動進樣器溫度:15℃;柱溫:40℃;進樣量:10 μL。采用ESI+MRM方式監(jiān)測;毛細管電壓:5.5 kV;源溫度:450℃;錐孔氣體流速:20 L·h-1;去溶劑氣體流速15 L·h-1;氣簾氣流速30 L·h-1;EP 5.0 eV。氨溴索質(zhì)譜條件:檢測離子對379.2/263.9;DP46;CE 28;CXP 3.0;西替利嗪條件:檢測離子對389.2/201.1;DP 38;CE 26;CXP 4.0。

1.5 血漿樣品的處理 羅紅霉素:取1.5 mL EP管，加入血漿樣品 200 μL，加入 9.3 μg·mL-1內(nèi)標克拉霉素 20 μL，混勻，加入乙腈 600 μL，渦旋震蕩 1 min，16 600 r·min-1離心 10 min，上清液 5 μL 進樣。氨溴索:取 1.5 mL EP 管，加入血漿樣品 200 μL，加入414 ng·mL-1內(nèi)標西替利嗪 20 μL，混勻，加入乙腈400 μL，渦旋震蕩 1 min，16 600 r·min-1離心 10 min，上清液10 μL進樣。

1.6 統(tǒng)計學(xué)方法 采用DAS2.1程序分別計算各受試者的有關(guān)藥動學(xué)參數(shù)。峰濃度(Cmax)和達峰時間(tmax)均為實測值，血藥濃度-時間曲線下面積(area under the curve，AUC)按梯形面積法計算。用 SPSS 11.5對主要藥動學(xué)參數(shù)進行t檢驗，對試驗藥與兩對照藥合用的藥動學(xué)作出評價。

2 結(jié)果

2.1 方法學(xué)評價

2.1.1 血漿中羅紅霉素濃度的LC/MS/MS測定方法

方法學(xué)研究線性回歸方程為As/Ai=0.748×10-3C+3.03×10-3，r=0.999 0;線性范圍為 20.25～13 500 ng·mL-1，最低定量下限為20.25 ng·mL-1;低、中、高濃度日內(nèi)、日間相對標準差＜5%;絕對回收率分別為(113.46±7.61)%，(107.56±1.14)% 和(105.30±1.03)%，內(nèi)標絕對回收率為(111.92±6.56)%;基質(zhì)效應(yīng)分別為85.02%，85.02%和85.02%，內(nèi)標基質(zhì)效應(yīng)為86.04%;穩(wěn)定性考察試驗表明血漿樣品在預(yù)處理后室溫放置24 h穩(wěn)定，未處理血漿樣品室溫放置24 h穩(wěn)定，經(jīng)歷4和6次冷凍-解凍循環(huán)穩(wěn)定、在-80℃冷凍放置4個月穩(wěn)定。

2.1.2 血漿中氨溴索濃度的LC/MS/MS測定方法方法學(xué)研究線性回歸方程為As/Ai=0.013 2C+0.019 1，r=0.994 5;線性范圍為1.99 ～398 ng·mL-1，定量下限為1.99 ng·mL-1;低、中、高濃度日內(nèi)、日間相對標準差＜10%;絕對回收率分別為(83.20±5.11)%，(90.66±4.84)%和(89.06±1.68)%，內(nèi)標絕對回收率為(103.65±6.35)%;基質(zhì)效應(yīng)分別為88.98%，82.09%和77.50%，內(nèi)標基質(zhì)效應(yīng)為88.51%;穩(wěn)定性考察試驗表明樣品在-80℃冷凍24 h室溫放置4 h、處理后血漿樣本在LC/MS中放置24 h、經(jīng)歷4次冷凍-解凍循環(huán)穩(wěn)定、在-80℃冷凍放置3個月穩(wěn)定。

2.2 復(fù)方羅紅霉素片多劑量給藥后羅紅霉素的藥動學(xué)

2.2.1 羅紅霉素血藥濃度-時間曲線 24例健康受試者分別多次口服復(fù)方羅紅霉素片、羅紅霉素與鹽酸氨溴索片合用后的平均血藥濃度-時間曲線見圖1。

2.2.2 羅紅霉素藥動學(xué)參數(shù) 用DAS 2.1藥動學(xué)軟件中的藥動學(xué)模塊計算程序?qū)?shù)據(jù)進行處理，計算受試者用藥后的藥動學(xué)參數(shù)，其中Cmax、tmax以實測值計算，AUC按梯形面積法計算，得到羅紅霉素各主要藥動學(xué)參數(shù)分別見表1。結(jié)果表明，復(fù)方羅紅霉素片組與兩單藥合用組相比，羅紅霉素的人體藥動學(xué)參數(shù)差異無統(tǒng)計學(xué)意義。

表1 羅紅霉素藥動學(xué)參數(shù)Tab．1 The pharmacokinetic parameters of roxithromycin ±s

表1 羅紅霉素藥動學(xué)參數(shù)Tab．1 The pharmacokinetic parameters of roxithromycin ±s

制劑AUCss AUC(0-t) AUC(0-∞)μg·L-1·h MRT(0-t) MRT(0-∞) t 1/2z h受試制劑 47 767.15±16 097.92 96 055.25±38 428.39 110 516.76±53 249.06 14.17±3.04 20.43±9.61 14.70±8.91參比制劑 53 976.14±16 884.55 106 172.64±30 887.39 117 745.23±36 263.59 14.52±1.38 19.68±4.18 14.64±3.79制劑tmax/h CLz/F/(L·h-1)Vz/F/L Cmax Cmin Cav μg·L-1 DF受試制劑 2.71±1.45 1.84±1.30 30.96±12.17 6 261.67±2 111.12 3 435.00±1 328.93 3 980.60±1 341.49 0.71±0.35參比制劑 2.33±1.12 1.48±0.84 29.46±11.58 7 645.83±2 662.46 3 647.50±1 319.83 4 498.01±1 407.05 0.86±0.27

2.3 復(fù)方羅紅霉素片多劑量給藥后氨溴索藥動學(xué)

2.3.1 氨溴索血藥濃度-時間曲線 24例健康受試者分別單次口服復(fù)方羅紅霉素片、羅紅霉素與鹽酸氨溴索片合用后的平均穩(wěn)態(tài)血藥濃度-時間曲線見圖2。

2.3.2 氨溴索藥動學(xué)參數(shù) 用DAS 2.1藥動學(xué)軟件中的藥動學(xué)模塊計算程序?qū)?shù)據(jù)進行處理，計算受試者用藥后的藥動學(xué)參數(shù)，其中Cmax、tmax以實測值計算，AUC按梯形面積法計算，得到氨溴索各主要藥動學(xué)參數(shù)分別見表2。復(fù)方羅紅霉素片組與兩單藥合用組相比，氨溴索的人體藥動學(xué)參數(shù)差異無統(tǒng)計學(xué)意義。

3 討論

羅紅霉素血藥濃度測定方法有微生物法、液相色譜法或液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法［1-2］。鹽酸氨溴索的體內(nèi)分析方法有薄層色譜法、毛細管電泳法、氣相色譜法及氣相色譜聯(lián)合質(zhì)譜法、高效液相色譜法及高效液相聯(lián)合質(zhì)譜法［3］。有文獻報道采用液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法同時測定羅紅霉素和氨溴索的血藥濃度［4］。筆者曾嘗試用等度洗脫法甲醇-醋酸銨系統(tǒng)分離羅紅霉素和氨溴索，但羅紅霉素的峰形較寬，需加0.03%甲酸峰形才變銳，而氨溴索的峰形加甲酸后變差。也曾嘗試用梯度洗脫法分離羅紅霉素和氨溴索，但血漿樣本中羅紅霉素濃度較高，而氨溴索濃度較低，同時分析時，在羅紅霉素出峰處偶爾有干擾。因此，最終選擇等度洗脫法分別分析羅紅霉素和氨溴索的血藥濃度。

表2 氨溴索藥動學(xué)參數(shù)Tab．2 The pharmacokinetic parameters of ambroxol ±s

表2 氨溴索藥動學(xué)參數(shù)Tab．2 The pharmacokinetic parameters of ambroxol ±s

制劑AUCss AUC(0-t) AUC(0-∞)μg·L-1·h MRT(0-t) MRT(0-∞) t 1/2z h受試制劑 372.53±119.18 679.86±183.90 725.34±190.2412.38±1.67 15.18±2.49 10.19±1.94參比制劑 469.23±207.69 814.25±365.98 922.00±515.6212.03±1.83 16.99±6.86 12.64±6.38制劑tmax/h CLz/F/(L·h-1)Vz/F/L Cmax Cmin Cav μg·L-1 DF受試制劑 2.83±1.51 88.84±26.02 1 327.17±558.50 51.42±19.83 28.66±8.44 31.04±9.93 0.66±0.55參比制劑 1.90±1.18 77.20±27.26 1 241.59±324.79 67.37±26.66 28.26±11.56 39.10±17.31 1.00±0.25

24例健康受試者在服用復(fù)方羅紅霉素片試驗各組后的生命體征均未出現(xiàn)異常，未見主訴不適癥狀。文獻報道氨溴索和羅紅霉素體內(nèi)可能沒有相互作用［4-5］。本試驗研究表明，多劑量給予復(fù)方羅紅霉素片后，其羅紅霉素和氨溴索的藥動學(xué)參數(shù)與對照藥羅紅霉素片合用氨溴索片的兩主藥的藥動學(xué)參數(shù)相比，羅紅霉素和氨溴索的藥動學(xué)參數(shù)均無明顯差異，因此在臨床上應(yīng)用復(fù)方羅紅霉素片可替代兩單藥合用，以簡化給藥方案，提高患者的順應(yīng)性。

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