自備質(zhì)控品對不規(guī)則抗體篩查試驗中篩選細(xì)胞的質(zhì)量監(jiān)控

周桂艷

在輸血前對受者血清進(jìn)行抗體篩查的目的是及時發(fā)現(xiàn)臨床意義的不規(guī)則抗體，以便為受血者準(zhǔn)備不含有相應(yīng)抗原的血液，確保受血者輸血安全。用微膠凝注法做不規(guī)則抗體篩查試驗的關(guān)鍵之一是篩選細(xì)胞，有作者曾用各種方法對抗篩試驗監(jiān)測，但沒有監(jiān)測篩選細(xì)胞[1]。如何知道篩選細(xì)胞是否出現(xiàn)變化？本課題嘗試尋找一種可以觀察篩選細(xì)胞是否達(dá)到要求的質(zhì)控血清，并將在每次實驗中隨同質(zhì)控血清檢測，以觀察篩選細(xì)胞的穩(wěn)定性。

1 材料與方法

1.1 檢測對象

2010年1 月～2010年2月在本院住院需要輸血的患者30例，年齡1～78歲。

1.2 檢測儀器與試劑

微膠凝柱卡（LISS/Coombs），微膠凝柱孔內(nèi)為中性凝膠，并含有低離子介質(zhì)及抗人球蛋白試劑，專用卡GRIFOLS離心機(jī)和GRIFOLS37℃孵育器。O型抗體篩查細(xì)胞Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ號（批號：20105624，20105626）購自上海血液生物醫(yī)藥有限公司?？笵（IgM+IgG）血型定型試劑（批號NDMG05302），購自美國美德聲科學(xué)技術(shù)公司。普通冰凍AB型血漿購自廣州血液中心。以上試劑都在有效期內(nèi)使用。

1.3 檢測方法

1.3.1 采用微膠凝柱法對受者血清進(jìn)行抗體篩查 抽取受者血2～4mL，1500r/min離心5min，分離血清與紅細(xì)胞，在微膠凝柱卡上標(biāo)記受者姓名及抗體篩查細(xì)胞的編號，分別吸取抗體篩查細(xì)胞懸液50μL和受者血清25μL加入微膠凝柱管腔上端，陰性和陽性對照組只需加入相應(yīng)血清即可，置37℃孵育15min，1500r/min離心9min，肉眼觀察結(jié)果。結(jié)果判斷：-：100%的紅細(xì)胞沉在微管底部；+/-：100%的紅細(xì)胞沉在微管下端1/3以內(nèi)；+：80%的紅細(xì)胞沉在微管下端2/3以內(nèi)；++：80%的紅細(xì)胞沉在微管上端2/3以內(nèi)；+++：80%的紅細(xì)胞沉在微管1/3以內(nèi)；++++：凝集的紅細(xì)胞全部處于微管的頂部。

1.3.2 陰陽性對照血清的制備 陽性質(zhì)控血清的制備：用人抗D血清配制+++的濃度為初始濃度。陰性質(zhì)控血清的制備：取AB型血漿一袋，用無抗凝劑的小管分裝。陰陽性血清都置于4℃條件下保存。

2 結(jié)果

2.1 陰、陽性血清對照組的結(jié)果

用自備的陰性和陽性血清檢測不規(guī)則抗體篩查試驗中篩選細(xì)胞結(jié)果如表1。

表1 不規(guī)則抗體篩查試驗中陽性血清和陰性血清檢測結(jié)果

2.2 受者血清不規(guī)則抗體篩查結(jié)果

在30例受者血清中檢測出不規(guī)則抗體陽性有4例（占13.3%），見表2，以上4例自身抗體對照結(jié)果均為陰性。

表2 不規(guī)則抗體陽性結(jié)果及臨床資料

3 討論

微膠凝柱實驗是紅細(xì)胞抗原與相應(yīng)抗體在凝膠介質(zhì)中發(fā)生的凝集反應(yīng)，本實驗用抗D（IgM+IgG）血型定型試劑作為陽性對照，以+++的濃度作為初始觀察，AB血漿因不含有抗A抗B抗原，不會與篩選細(xì)胞（O型紅細(xì)胞）發(fā)生凝集反應(yīng)，所以作為陰性對照結(jié)果。此外，本試驗抗體抗原反應(yīng)過程中始終保持在37℃，可以排除冷凝集素反應(yīng)產(chǎn)生的影響。從陽性和陰性結(jié)果可以看出，如果使用新鮮的篩選細(xì)胞懸液，篩選細(xì)胞陽性結(jié)果都為+++，其穩(wěn)定性非常好，當(dāng)同一篩選細(xì)胞懸液加蓋放置24h，陽性對照組結(jié)果由+++下降到++，說明篩查細(xì)胞隨著時間久置，其質(zhì)量會下降，對不規(guī)則抗體的結(jié)果會產(chǎn)生影響，所以新配置的篩查細(xì)胞懸液應(yīng)盡快使用，加蓋放置不超過24h。

本次試驗用了兩個不同批號的篩查細(xì)胞，結(jié)果顯示不同批號會有不同結(jié)果。前9次都是用批號為（20105624）的篩選細(xì)胞，啟用新批號（20105626）做陽性對照組初始標(biāo)記濃度，結(jié)果在++～+++。質(zhì)量對不規(guī)則抗體篩查的試驗結(jié)果影響很大。

本試驗用自備的質(zhì)控品進(jìn)行了2個月的檢測，可認(rèn)為其穩(wěn)定性較好?？贵w篩選試驗不一定能檢出所有具有臨床意義的抗體，一些抗低頻率抗原的抗體或有劑量效應(yīng)的抗體可能被漏檢，此時需要抗原性更完全和特異性更強(qiáng)的篩選細(xì)胞做試驗或用更敏感的技術(shù)做檢測[2]。

本實驗用微膠凝注法對30例輸血患者進(jìn)行不規(guī)則抗體篩查，共檢測出不規(guī)則抗體陽性的有4例，以上4例已用自身血清和自身紅細(xì)胞做做試驗，結(jié)果均為陰性，可確認(rèn)待測血清中確實存在不規(guī)則抗體，4例中只有Ⅰ號篩選細(xì)胞陽性2例，根據(jù)抗體鑒定譜為P1型，只有Ⅰ、Ⅱ號篩選細(xì)胞陽性1例，為Kidd（M）型，只有Ⅱ、Ⅲ號篩選細(xì)胞陽性1例，可能為Rh-hrC或Rh-hrE型。4例中男的1例有輸血史，女的3例曾經(jīng)有輸血史或妊娠史，說明反復(fù)輸血或多次妊娠易使患者受到免疫刺激而產(chǎn)生不規(guī)則抗體。因此，臨床對有輸血史，妊娠史和RhD陰性患者輸血前進(jìn)行不規(guī)則抗體篩查非常有必要，通過檢測及時發(fā)現(xiàn)不規(guī)則抗體。但人種的差異，對輸血產(chǎn)生的影響的抗體也有所不同，Kell系統(tǒng)的抗-K抗體對白種人很重要，但中國漢族人群中K抗原幾乎全部陰性，而抗-Dia、抗-Mur抗體對黃種人相對重要[2]。

[1]楊世明，崔穎，張勇萍，等.微柱凝膠法在抗體篩查中的應(yīng)用及其影響因素的探討[J].現(xiàn)代檢驗醫(yī)學(xué)雜志，2006，21（4）:55-56.

[2]胡麗華.臨床輸血檢驗[M].2版.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：52-53.