高效液相色譜法測定草酸艾司西酞普蘭片的含量

代 亞，付 濤，俞麗君，陳立萍，王賢廣

(浙江海森藥業(yè)有限公司，浙江 杭州 322104)

自從1985年第1個5－羥色胺再吸收抑制劑(SSRIs)上市以來，其在臨床得到了廣泛應用。這類藥物不產(chǎn)生三環(huán)類抗抑郁藥的抗副交感神經(jīng)作用、低血壓、認知障礙或鎮(zhèn)靜等副作用，是一類性能優(yōu)良的抗抑郁藥。草酸艾司西酞普蘭(escitalopram oxalate)就是其中的一種，它是消旋體藥物西酞普蘭(由 R－西酞普蘭和 S－西酞普蘭按1∶1的比例組成)的 S－西酞普蘭，S－西酞普蘭藥效優(yōu)于R－西酞普蘭[1]。該藥是由丹麥的Lundbeck公司首先研究開發(fā)，2002年8月首次被美國食品與藥物管理局(FDA)批準，主要用于重型抑郁障礙的初始治療和維持治療。筆者采用高效液相色譜(HPLC)法測定草酸艾司西酞普蘭片的含量，按照2010年版《中國藥典(二部)》附錄中藥品質(zhì)量標準分析方法驗證指導原則[2]進行了方法學試驗，現(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

Waters 515型高效液相色譜儀;Waters 2487型紫外檢測器。草酸艾司西酞普蘭對照品(批號為070601R，含量100.38%，浙江海森藥業(yè)有限公司精制，浙江省食品藥品檢驗所標化);草酸艾司西酞普蘭片(浙江海森藥業(yè)有限公司，批號分別為081226，090104，090105);甲醇為色譜純，水為重蒸水，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱:Phenomenex Gemini C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);流動相:磷酸鹽緩沖液(取磷酸二氫鈉7.8 g，加水1 000 mL調(diào)磷酸溶液 pH 至 3.2 ±0.1)－ 甲醇(51∶49);流速:1.0 mL/min;檢測波長:238 nm;進樣量:20 μL;柱溫:30℃。以峰面積外標法定量。理論板數(shù)按艾司西酞普蘭峰計算應不低于1 800，分離度符合要求。

2.2 溶液制備

取草酸艾司西酞普蘭對照品13 mg，精密稱定，置100 mL量瓶中，加0.1 mol/L鹽酸溶液使溶解并用0.1 mol/L鹽酸溶液稀釋至刻度，搖勻，即得對照品溶液;取本品20片，精密稱定，研細，精密稱取細粉適量(約相當于艾司西酞普蘭10 mg)，置100 mL量瓶中，加0.1 mol/L鹽酸溶液適量，超聲使草酸艾司西酞普蘭溶解，加0.1 mol/L鹽酸溶液稀釋至刻度，搖勻，濾過，即得供試品溶液;取空白輔料0.13 g，精密稱定，照供試品溶液制備方法制成陰性對照品溶液。

2.3 方法學考察

系統(tǒng)適用性試驗:在2.1項色譜條件下，對照品溶液、供試品溶液及陰性對照品溶液色譜圖見圖1。

圖1 高效液相色譜圖

線性關(guān)系考察:精密稱取草酸艾司西酞普蘭對照品80.5 mg(相當于艾司西酞普蘭63.0 mg)，置100 mL容量瓶中，加0.1 mol鹽酸適量，超聲溶解，加0.1mol鹽酸定量稀釋至刻度，分別取1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0 mL 的溶液稀釋至 25 mL，搖勻。分取各質(zhì)量濃度的對照品溶液20 μL注入液相色譜儀，記錄各峰面積，得艾司西酞普蘭對照品質(zhì)量濃度(C)與峰面積(A)的線性回歸方程為A=40 531 C －25 478，r=0.999 9(n=6)。結(jié)果表明，艾司西酞普蘭質(zhì)量濃度在25～150 μg/mL范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

精密度試驗:取對照品溶液，連續(xù)進樣5次。結(jié)果峰面積的 RSD為0.2%(n=5)，表明儀器精密度良好。

重現(xiàn)性試驗:取同一批樣品(批號為081226)5份，依法測定。結(jié)果含量的 RSD為0.99%(n=5)，表明方法重現(xiàn)性良好。

穩(wěn)定性試驗:取批號為081226的供試品溶液，分別在0，3，5，7，24 h時進樣。結(jié)果峰面積的 RSD為0.3%(n=5)，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

加樣回收試驗:分別取草酸艾司西酞普蘭對照品9，13，17 mg(相當于艾司西酞普蘭7，10，13 mg)，各2份，精密稱定，分別配制成相當于標示量70%，100%，130% 的模擬溶液，共6份，搖勻。取20 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖。另取草酸艾司西酞普蘭對照品溶液，同法測定峰面積，按外標法以峰面積計算含量。結(jié)果見表1。

表1 草酸艾司西酞普蘭加樣回收試驗結(jié)果(n=6)

2.4 樣品含量測定

取本品20片，精密稱定，研細，精密稱取細粉適量(約相當于艾司西酞普蘭10 mg)，置100 mL量瓶中，加0.1 mol鹽酸適量，超聲使草酸艾司西酞普蘭溶解，加0.1 mol鹽酸稀釋至刻度，搖勻，濾過;精密量取20 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。另取草酸艾司西酞普蘭對照品適量，同法按上述色譜條件測定，按外標法以峰面積計算。結(jié)果批號為081226，090104，090105的樣品含量分別為97.7%，96.4% ，94.0% 。

3 討論

依據(jù)原料藥草酸艾司西酞普蘭在甲醇及弱酸性溶液中易溶的特點，選擇磷酸緩沖液(pH 3.2±0.1)－甲醇(51 ∶49)為流動相，結(jié)果艾司西酞普蘭的保留時間為13.8 min主峰與有關(guān)物質(zhì)很好分離，分離度大于1.5，故確定此流動相為樣品測定用流動相。

取草酸艾司西酞普蘭片流動相溶液，在200～400 nm波長范圍進行紫外掃描，結(jié)果在238 nm波長處為最大吸收峰，因此，選擇了在238 nm波長處作為檢測波長。

本品輔料比例較大，用流動相作溶劑，由于甲醇比例較高，過濾時產(chǎn)生揮發(fā)，造成偏差較大。而本品主要成分略溶于水，可溶于0.1 mol鹽酸。因而采取0.1 mol鹽酸作為含量測定的測定溶液，為保證溶解完全，用超聲溶解，超聲1 min即可達要求。由色譜圖1可以看出，陰性對照品溶液在艾司西酞普蘭出峰處未出峰，表明其對含量測定無干擾。

[1]司天梅，舒 良.關(guān)于新抗抑郁藥艾司西酞普蘭[J].臨床精神醫(yī)學雜志，2007，17(1):68 －69.

[2]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(二部)[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:附錄194－附錄195.