李躍龍,馮學(xué)忠,黎華鵬,葉渭源,方炳虎,張魁華
(1.廣東省獸藥與飼料監(jiān)察總所,廣州 510230;2.廣東大華農(nóng)動物保健品股份有限公司,廣東新興 527400;3.華南農(nóng)業(yè)大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院,廣州 510642)
伊維菌素是新型的廣譜、高效、低毒抗生素類抗寄生蟲藥,屬大環(huán)內(nèi)酯類,主要含伊維菌素B1(B1a+B1b)[1-3],對體內(nèi)外寄生蟲特別是線蟲和節(jié)肢動物均有良好驅(qū)殺作用[4]。廣泛用于牛、羊、豬、馬的胃腸道線蟲、肺線蟲、牛皮蠅蛆、紋皮蠅蛆、羊鼻蠅蛆、羊癢螨和豬疥螨等,犬的腸道線蟲、耳螨、疥螨、心絲蟲和微絲蚴,以及家禽胃腸線蟲和體外寄生蟲[5-12]。伊維菌素預(yù)混劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)收載于《進(jìn)口獸藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》一九九九年版,采用薄層色譜法[13]進(jìn)行檢查。經(jīng)過反復(fù)實驗研究,發(fā)現(xiàn)該標(biāo)準(zhǔn)中【鑒別】(1)的檢查方法存在缺陷,需要修正。
1.1 材料 CP225D型電子天平,德國賽多利斯有限公司;UV-2450型紫外可見分光光度計;ZF-C型三用紫外分析儀。
伊維菌素對照品,批號為 K0190811,含量93.9%,中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所;伊維菌素,批號10050301,河北威遠(yuǎn)動物藥業(yè)有限公司;玉米芯細(xì)粉,批號20100705,濟(jì)南市長清區(qū)科農(nóng)玉米加工廠;伊維菌素預(yù)混劑,規(guī)格為100 g:0.2 g,批號為20100901、20100902、20100903,廣東大華農(nóng)動物保健品股份有限公司;硅膠 GF254薄層板,批號20100702,青島海洋化工廠;丙酮、醋酸乙酯、甲醇、二氯甲烷、三氯甲烷為分析純試劑。
1.2 方法
1.2.1 確定檢測波長 取伊維菌素對照品適量,加甲醇制成每1 mL中約含伊維菌素0.015 mg的溶液,搖勻,以甲醇為空白,照紫外分光光度法[13],在190~400 nm波長范圍內(nèi)進(jìn)行紫外吸收圖譜掃描。
1.2.2 伊維菌素對照品溶液的制備 精密稱取伊維菌素對照品25 mg于25 mL量瓶中,加丙酮溶解,并定容稀釋成1mg/mL,搖勻,作為伊維菌素對照品溶液。
1.2.3 供試品溶液的制備 取伊維菌素預(yù)混劑適量,加丙酮制成每1 mL中約含伊維菌素1 mg的溶液,置超聲浴中超聲15 min,過濾,取濾液,作為供試品溶液。
1.2.4 原料溶液的制備 取伊維菌素(原料)適量,按1.2.2項下方法稀釋,搖勻,作為原料溶液。
1.2.5 空白溶液的制備 按處方比例稱取輔料適量,制備不含伊維菌素的空白樣品,按1.2.3項下方法稀釋,取濾液,作為空白溶液。
1.2.6 薄層色譜法檢測 把 1.2.2、1.2.3、1.2.4、1.2.5項制備的溶液,按伊維菌素預(yù)混劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中【鑒別】(1)的方法進(jìn)行前處理,采用薄層色譜法進(jìn)行檢測,檢測波長為254 nm和365 nm。
2.1 檢測波長結(jié)果 結(jié)果如圖1所示。在波長254 nm處有紫外吸收,而在波長365 nm處沒有紫外吸收。因此,選擇254 nm為檢測波長。
圖1 伊維菌素紫外吸收圖譜
2.2 在波長為365 nm進(jìn)行檢查的結(jié)果 置紫外光燈(365 nm)下檢視,供試品、對照品、原料、空白溶液在硅膠GF254薄層板上都沒有主斑點顯示。
2.3 在波長為254 nm進(jìn)行檢查的結(jié)果 結(jié)果如圖2所示。置紫外光燈(254 nm)下檢視,供試品、原料在硅膠GF254薄層板上,所顯主斑點的顏色和位置與對照品溶液的主斑點相同;空白溶液在硅膠GF254薄層板上都沒有主斑點顯示。
圖2 薄層色譜圖(在254 nm紫外光燈下檢視)
3.1 取伊維菌素對照品溶液,照“紫外可見分光光度法”進(jìn)行掃描,結(jié)果在365 nm的波長處無紫外吸收,在254 nm的波長處有紫外吸收,而伊維菌素預(yù)混劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中的【鑒別】(1)要求在紫外光燈(365 nm)下進(jìn)行檢視。這是不能客觀反映出樣品的真實特性。
3.2 伊維菌素預(yù)混劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中【鑒別】(1)要求在硅膠GF254薄層板上點樣,然后在紫外光燈(365 nm)下進(jìn)行檢視,但實驗結(jié)果顯示,在紫外光燈(365 nm)下檢視無斑點,而置紫外光燈(254 nm)下檢視有清晰斑點,此結(jié)果與現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)不符。
3.3 為了使伊維菌素預(yù)混劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中【鑒別】(1)的方法具有可操作性,根據(jù)實驗情況,筆者建議把“置紫外光燈(365 nm)下檢視,供試品所顯主斑點的顏色和位置應(yīng)與對照品的主斑點相同?!备臑椤爸米贤夤鉄?254 nm)下檢視,供試品所顯主斑點的顏色和位置應(yīng)與對照品的主斑點相同?!?/p>
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