E2F-1和survivin蛋白在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及其與HPV感染的相關(guān)性研究

孔令慧 吳翠環(huán) 李瑩 張明 張玉慧

1.河北省涿州市醫(yī)院病理科，河北 涿州 072750；2.華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院病理學(xué)系，湖北 武漢 430030；3.河南省濮陽(yáng)市人民醫(yī)院病理科，河南 濮陽(yáng) 457000；4.山東省煙臺(tái)市煙臺(tái)山醫(yī)院病理科，山東 煙臺(tái) 264001;5.華中科技大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院， 湖北 武漢 430074

E2F-1和survivin蛋白在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及其與HPV感染的相關(guān)性研究

孔令慧1吳翠環(huán)2李瑩3張明4張玉慧5

1.河北省涿州市醫(yī)院病理科，河北 涿州 072750；2.華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院病理學(xué)系，湖北 武漢 430030；3.河南省濮陽(yáng)市人民醫(yī)院病理科，河南 濮陽(yáng) 457000；4.山東省煙臺(tái)市煙臺(tái)山醫(yī)院病理科，山東 煙臺(tái) 264001;5.華中科技大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院， 湖北 武漢 430074

背景與目的：人乳頭狀瘤病毒(human papillomavirus，HPV)與人類多種惡性腫瘤密切相關(guān)，而肺癌中亦有HPV的檢出引起了眾多學(xué)者的關(guān)注。本實(shí)驗(yàn)旨在研究非小細(xì)胞肺癌(non-small cell lung cancer，NSCLC)中高危HPV感染情況及其與E2F-1和survivin蛋白表達(dá)的關(guān)系，初步探討HPV感染可能導(dǎo)致NSCLC發(fā)生、發(fā)展的分子機(jī)制。方法：特異型PCR檢測(cè)47例NSCLC和13例肺良性病變組織中是否有HPV16、18DNA存在；免疫組化SP法檢測(cè)E2F-1和survivin蛋白在肺病變組織中的表達(dá)。結(jié)果：NSCLC組HPV16、18DNA檢出率為42.55%(20/47)，明顯高于肺良性病變組的7.69%(1/13，P＜0.05)。NSCLC組中HPV的感染率與患者的吸煙史、組織學(xué)類型及分化程度有關(guān)(P＜0.05)，而與患者的年齡、性別及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無(wú)關(guān)(P＞0.05)。NSCLC組中E2F-1蛋白表達(dá)陽(yáng)性率為59.57%(28/47)，其中64.29%(18/28)呈高表達(dá)，顯著高于肺良性病變組23.08%(3/13，P＜0.025)。NSCLC中survivin蛋白表達(dá)陽(yáng)性率為61.70%(29/47)，而肺良性病變組無(wú)表達(dá)。NSCLC組中E2F-1、survivin蛋白表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.3151，P＜0.05)，且兩者在HPV陽(yáng)性組的陽(yáng)性表達(dá)率分別為85.00%(17/20)和80.00%(16/20)，均顯著高于HPV陰性組的40.74%(11/27)和48.15%(13/27)，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。結(jié)論：HPV16、18感染在NSCLC的發(fā)生中可能有病因?qū)W意義，其致癌機(jī)制可能與E2F-1和survivin蛋白表達(dá)上調(diào)有關(guān)。

非小細(xì)胞肺癌； 人乳頭狀瘤病毒16、18； E2F-1； survivin； 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)；免疫組織化學(xué)

肺癌的發(fā)病率和死亡率已居惡性腫瘤的第1或2位，而肺癌中以非小細(xì)胞肺癌(non-small cell lung cancer，NSCLC)居多。近20多年來(lái)，國(guó)內(nèi)外臨床和實(shí)驗(yàn)室的研究檢出肺癌患者攜有人乳頭瘤病毒(humanpapillomavirus，HPV)［1-2］，尤其是與人類惡性腫瘤密切相關(guān)的HPV16、18的檢出，引起學(xué)者們對(duì)肺癌病毒學(xué)起因的探究。

目前普遍認(rèn)為高危HPV致癌的中心環(huán)節(jié)是其編碼的E6、E7蛋白與細(xì)胞癌基因和抑癌基因的相互作用［3］，尤其是E6、E7蛋白分別與腫瘤抑制基因產(chǎn)物p53、pRB的相互作用使細(xì)胞周期紊亂，誘導(dǎo)細(xì)胞增殖、永生化及惡性轉(zhuǎn)化。本實(shí)驗(yàn)采用靈敏度較高的特異型PCR技術(shù)和免疫組化分別檢測(cè)病變肺組織中HPV16、18的感染情況及與p53、pRB關(guān)系密切的E2F-1、survivin蛋白的表達(dá)，研究HPV感染對(duì)E2F-1、survivin蛋白表達(dá)的影響，以探討HPV感染在NSCLC發(fā)生、發(fā)展中的病因?qū)W意義和致癌的分子機(jī)制。

1 資料和方法

1.1 標(biāo)本及處理

收集華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬同濟(jì)醫(yī)院2007—2008年手術(shù)切除的病變肺組織60例，每例標(biāo)本同時(shí)取病變組織2塊，一塊立即置于-80℃冰箱保存，備用于PCR，提取組織DNA；另一塊中性甲醛固定，石蠟包埋連續(xù)切片，片厚4 μm，分別用于做病理診斷的HE染色和免疫組化檢測(cè)。NSCLC 47例(鱗癌29例，腺癌18例；高分化12例，中分化18例，低分化17例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移28例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移19例；男性35例、女性12例；吸煙33例，不吸煙14例)及肺良性病變13例(肺結(jié)核4例，炎性假瘤5例，肺大皰4例)?；颊咝g(shù)前均未接受化療或放療。

1.2 主要試劑及抗體

引物HPV16E6正義鏈：5’-CTGCAAGCAACAGTTACTGCGACG-3’，反義鏈：5’-CATACATCGACCGGTCCACC-3’產(chǎn)物長(zhǎng)度 316 bp；HPV18E7正義鏈：5’-GAGCCGAACCACAACGTCAC-3’，反義鏈：5’-GGATGCACACCACGGACACA-3’產(chǎn)物長(zhǎng)度152 bp；β-actin正義鏈：5’-CAACTCCATCATGAAGTGTGAC-3’，反義鏈：5’-CCACACGGAGTACTTGCGCGCTC-3’，產(chǎn)物長(zhǎng)度184 bp，均由上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司合成；TaqDNA聚合酶及survivin兔抗人多克隆抗體均購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司；E2F-1兔抗人多克隆抗體和免疫組化試劑盒及DAB顯色劑均購(gòu)自武漢博士德生物工程有限公司。

1.3 PCR檢測(cè)及結(jié)果判定

蛋白酶K消化，常規(guī)酚-氯仿-異戊醇抽提法提取新鮮病變肺組織DNA。每例組織的DNA分別用HPV16E6、HPV18E7和β-actin 3種引物進(jìn)行擴(kuò)增：取DNA提取液1 μL加入PCR反應(yīng)體系(25 μL)內(nèi)，94 ℃預(yù)變性5 min，94 ℃變性1 min，55 ℃退火45 s，72 ℃延伸1 min，循環(huán)30次，72 ℃終延伸7 min；1.5%瓊脂糖凝膠電泳后紫外透射儀檢測(cè)結(jié)果，拍照。在184 bp處出現(xiàn)DNA條帶則認(rèn)為組織DNA提取成功，316 bp處為HPV16陽(yáng)性，152 bp處為HPV18陽(yáng)性。

1.4 免疫組化SP法檢測(cè)及結(jié)果判定

切片脫蠟至水，微波抗原修復(fù)，3%的新鮮過(guò)氧化物-甲醇阻斷，正常山羊血清封閉，依據(jù)試劑說(shuō)明書滴加一抗(陰性對(duì)照用PBS代替一抗)、二抗、三抗，DAB顯色，蘇木精復(fù)染。陽(yáng)性切片由試劑公司提供。E2F-1和survivin蛋白染色以胞核或胞質(zhì)出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽(yáng)性。選取5個(gè)高倍鏡視野計(jì)算100個(gè)腫瘤細(xì)胞中E2F-1和survivin蛋白表達(dá)的陽(yáng)性細(xì)胞百分比，＜5%：0分；5%～＜25%：1分；25%～＜50%：2分；51%～＜75%：3分；≥75%：4分。染色強(qiáng)度，無(wú)色：0分；淡黃色：1分；棕黃色：2分；棕褐色：3分。2項(xiàng)評(píng)分相乘為每例標(biāo)本蛋白表達(dá)的積分：0～1分，陰性(-)；2～3分，弱陽(yáng)性(+)；4～5分，中度陽(yáng)性(++)；6～7分，強(qiáng)陽(yáng)性(+++)。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 13.0軟件包對(duì)相關(guān)數(shù)據(jù)進(jìn)行χ2檢驗(yàn)和計(jì)數(shù)資料相關(guān)分析，并給出Pearson列聯(lián)系數(shù)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 PCR檢測(cè)HPV16、18DNA

HPV16E6和HPV18E7 DNA陽(yáng)性標(biāo)本分別在316 bp和152 bp處出現(xiàn)陽(yáng)性條帶(圖1)。NSCLC中HPV DNA的陽(yáng)性檢出率為42.55%(20/47)，顯著高于肺良性病變組的7.69%(1/13)，兩者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=4.02，P＜0.05)。

2.2 60例肺病變組織中E2F-1和survivin蛋白的表達(dá)

E 2 F-1蛋白在N S C L C組中表達(dá)(圖2A、B)的陽(yáng)性率為59.57%(28/47)，其中64.29%(18/28)呈高表達(dá)，顯著高于肺良性病變組的23.08%(3/13)，兩者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=5.43，P＜0.025)。47例NSCLC組中29例survivin蛋白陽(yáng)性表達(dá)(圖2C、D)，陽(yáng)性率為61.70%，而肺良性病變組中未檢測(cè)到survivin蛋白表達(dá)。

2.3 NSCLC中E2F-1和 survivin蛋白表達(dá)

47例NSCLC中28例E2F-1蛋白陽(yáng)性表達(dá)，29例survivin蛋白陽(yáng)性表達(dá)，兩者同時(shí)陽(yáng)性為21例，同時(shí)陰性為11例。計(jì)數(shù)資料相關(guān)分析得出兩者表達(dá)呈正相關(guān)(χ2=5.183，r=0.3151，P＜0.05)。

NSCLC中，E2F-1蛋白HPV陽(yáng)性組的陽(yáng)性表達(dá)率為85.00%(17/20)，顯著高于HPV陰性組的40.74%(11/27)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=9.345，P＜0.005)；HPV陽(yáng)性組的survivin蛋白陽(yáng)性表達(dá)率為80.00%(16/20)，顯著高于HPV陰性組的48.15%(13/27)(χ2= 4.93，P＜0.05)。

2.4 HPV感染、E2F-1、survivin蛋白表達(dá)與NSCLC臨床病理特征的關(guān)系

H P V感染與患者的吸煙史、組織學(xué)類型和分化程度有關(guān)，而與年齡、性別及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無(wú)關(guān)。吸煙者H P V感染率為54.55%(18/33)，顯著高于不吸煙者的14.29%(2/14)(χ2=6.52，P＜0.05)。HPV感染率在肺鱗癌中為55.17%(16/29)，顯著高于肺腺癌的22.22%(4/18)(χ2=4.93，P＜0.05)。中分化組HPV的檢出率為66.67%(12/18)，明顯高于高分化組的16.67%(2/12)和低分化組的35.29%(6/17)(χ2=6.86，P＜0.05)。E2F-1蛋白表達(dá)與以上臨床病理參數(shù)均無(wú)關(guān)。survivin 蛋白表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(χ2=5.18，P＜0.05)，而與其他病理參數(shù)無(wú)關(guān)(表1)。

表 1 HPV感染、E2F-1、survivin蛋白表達(dá)與NSCLC臨床病理特征的關(guān)系Tab. 1 Correlation of HPV infection, E2F-1 and survivin expression with clinicopathological data in NSCLC[n (%)]

3 討 論

HPV是一種具有嗜上皮性的小DNA病毒，屬于乳多空病毒科。至今已發(fā)現(xiàn)130余種，研究證實(shí)其某些特定基因型尤其是HPV16、18兩型的持續(xù)感染與人類多種惡性腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)，如宮頸癌、肛門生殖器的鱗狀細(xì)胞癌及口腔癌和頭頸癌等。本實(shí)驗(yàn)47例NSCLC中HPV16 E6/18 E7檢出率為42.55%，明顯高于肺良性病變組，且有吸煙史的患者居多。吸煙可刺激支氣管黏膜發(fā)生鱗狀上皮化生，化生的細(xì)胞更具鱗狀細(xì)胞特征而易感HPV［1］。HPV這一親鱗狀上皮特性可能是導(dǎo)致本實(shí)驗(yàn)鱗癌中HPV的陽(yáng)性檢出率明顯高于腺癌的原因。Arcavi等［4］報(bào)道吸煙不僅可致細(xì)支氣管發(fā)生炎癥，黏液纖毛清除病原體和異物的能力下降，而且亦可減低循環(huán)系統(tǒng)的免疫球蛋白水平，抑制抗原-抗體反應(yīng)，減少NK細(xì)胞、CD4+細(xì)胞數(shù)量，抑制肺泡巨噬細(xì)胞功能等從而改變局部體液和細(xì)胞免疫功能，并使感染得以持續(xù)存在。由此推測(cè)吸煙可能通過(guò)破壞呼吸道的防御屏障和免疫防御機(jī)制使HPV更易通過(guò)呼吸道的微小損傷而致感染，并逃避宿主免疫而持續(xù)存在，最終協(xié)同HPV感染促進(jìn)NSCLC的發(fā)生、發(fā)展。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)在中分化NSCLC中HPV感染更常見，其原因可能是：由調(diào)節(jié)病毒復(fù)制和其他基因轉(zhuǎn)錄的E1和E2基因編碼的E1和E2蛋白為HPV DNA復(fù)制所必需［5-6］。在未分化細(xì)胞中E2通過(guò)負(fù)反饋調(diào)節(jié)使每個(gè)感染細(xì)胞中的病毒拷貝數(shù)控制在50～100個(gè)，而在細(xì)胞分化過(guò)程中不受E2調(diào)控的晚期啟動(dòng)子被激活，上調(diào)的E1、E2轉(zhuǎn)錄使病毒得以大量復(fù)制和表達(dá)；而分化成熟的細(xì)胞退出細(xì)胞周期，僅含有少量或沒有病毒復(fù)制所需的復(fù)制酶，細(xì)胞中的病毒亦呈低水平。可見，開發(fā)應(yīng)用針對(duì)早期病毒感染的疫苗可能是防治HPV相關(guān)的NSCLC的重要途徑之一。

E2F-1是轉(zhuǎn)錄因子的重要成員之一，通過(guò)與控制細(xì)胞周期的重要基因的啟動(dòng)子結(jié)合而參與細(xì)胞增殖、分化和凋亡的調(diào)節(jié)。其轉(zhuǎn)錄活性由RB蛋白的磷酸化水平來(lái)調(diào)控，游離的E2F-1作為G1/S期轉(zhuǎn)換的終極效應(yīng)因子發(fā)揮作用。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，NSCLC中E2F-1蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于肺良性病變組；在HPV陽(yáng)性組的NSCLC中E2F-1蛋白過(guò)表達(dá)比HPV陰性組更多見。Imai等［7］研究發(fā)現(xiàn)在，NSCLC中E2F-1的過(guò)表達(dá)與RB基因座雜合性缺失和pRB的高度磷酸化有關(guān)。而Kaye等［8］報(bào)道RB基因和蛋白異常在NSCLC中的發(fā)生率較小細(xì)胞肺癌低，且認(rèn)為RB的功能主要受RB蛋白的磷酸化水平調(diào)控。由此推測(cè)HPV陽(yáng)性的NSCLC中E2F-1 表達(dá)上調(diào)可能與E7蛋白使pRB磷酸化失活有關(guān)。然而Vorburger等［9］通過(guò)腺病毒載體轉(zhuǎn)染發(fā)現(xiàn)在人的腸癌中，E2F-1蛋白過(guò)表達(dá)可誘導(dǎo)癌細(xì)胞凋亡而發(fā)揮抑癌作用。那么NSCLC中E2F-1的過(guò)表達(dá)是促凋亡還是促癌發(fā)生呢？目前研究報(bào)道過(guò)表達(dá)的E2F-1通過(guò)p53依賴和非p53依賴兩種機(jī)制誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡；pRB失活或E2F-1過(guò)表達(dá)可誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，但此凋亡作用可因p53缺失或失活而被減弱或抑制［10］。本課題組先前的研究發(fā)現(xiàn)，HPV陽(yáng)性組的細(xì)胞凋亡明顯比HPV陰性組少(P＜0.05)，且HPV陽(yáng)性組p53基因的突變失活率明顯高于HPV陰性組［11］。由此推測(cè)：在高危HPV感染的NSCLC中，E6蛋白通過(guò)使p53失活阻斷過(guò)表達(dá)的E2F-1蛋白誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡，使腫瘤細(xì)胞凋亡減少而持續(xù)增殖。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，E2F-1 過(guò)表達(dá)與NSCLC的臨床病理特征無(wú)關(guān)，推測(cè)E2F-1過(guò)表達(dá)可能是NSCLC發(fā)生、發(fā)展中的早期關(guān)鍵步驟，而與癌組織的惡性程度無(wú)關(guān)。

survivin是目前發(fā)現(xiàn)的最強(qiáng)的凋亡抑制因子(IAP)，主要表達(dá)于增殖發(fā)育中的細(xì)胞，雖在多數(shù)成人分化成熟的正常組織中檢測(cè)不到，但在某些惡性腫瘤中survivin蛋白明顯表達(dá)?；谠诎┙M織和相應(yīng)的正常組織中表達(dá)水平的差別，survivin蛋白目前被看作是一種腫瘤標(biāo)志物和抗癌治療的靶點(diǎn)。本實(shí)驗(yàn)中13例肺良性病變組織中未檢測(cè)到survivin表達(dá)，而47例NSCLC中survivin表達(dá)陽(yáng)性率為61.70%。Lo Muzio等［12］發(fā)現(xiàn)在HPV陽(yáng)性的鱗狀細(xì)胞癌survivin亦呈高表達(dá)。可見，NSCLC中survivin蛋白表達(dá)上調(diào)可能與HPV感染有關(guān)。Jiang等［13］研究發(fā)現(xiàn)人和鼠的survivin啟動(dòng)子含有E2F-1結(jié)合位點(diǎn)，并采用染色體免疫共沉淀技術(shù)發(fā)現(xiàn)E2F-1、E2F-3可直接與survivin啟動(dòng)子結(jié)合而誘導(dǎo)其轉(zhuǎn)錄，且這種作用可因survivin的E2F-1結(jié)合位點(diǎn)的突變而被廢除?？梢?，survivin的表達(dá)與E2F-1的蛋白水平和活性狀態(tài)密切相關(guān)。本實(shí)驗(yàn)對(duì)NSCLC中E2F-1、survivin蛋白表達(dá)的相關(guān)性進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析發(fā)現(xiàn)，兩者表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.3151，P＜0.05)，提示survivin可能是E2F-1調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖、凋亡和分化的靶基因之一，NSCLC中兩者表達(dá)協(xié)同抑制腫瘤細(xì)胞凋亡。本實(shí)驗(yàn)中survivin蛋白主要表達(dá)于腫瘤細(xì)胞胞質(zhì)，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者survivin蛋白表達(dá)陽(yáng)性率明顯高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者。目前對(duì)于腫瘤細(xì)胞中survivin蛋白的亞細(xì)胞定位有不同解釋。有研究報(bào)道survivin胞核表達(dá)與細(xì)胞增殖有關(guān)，而胞質(zhì)表達(dá)與細(xì)胞生存期延長(zhǎng)有關(guān)［14］。可見，NSCLC中survivin蛋白表達(dá)與腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移有關(guān)，可作為腫瘤診斷標(biāo)志物及預(yù)測(cè)腫瘤轉(zhuǎn)移、預(yù)后的參數(shù)。

NSCLC的病因和發(fā)生機(jī)制復(fù)雜，已知各種致癌因素主要作用于基因，如上所述可能是HPV感染導(dǎo)致NSCLC發(fā)生、發(fā)展的分子機(jī)制之一。這為臨床探索肺癌的病因及開展有效療法如選用HPV疫苗預(yù)防高危HPV感染、促進(jìn)E2F-1的非p53依賴促凋亡機(jī)制或阻斷survivin的表達(dá)提供了理論上的支持。

［1］Syrj?nen KJ. HPV infections and lung cancer［J］. J Clin Pathol, 2002, 55(12): 885-891.

［2］Wang Y, Wang A, Jiang R, et a1. Human papillomavirus type 16 and 18 infection is associated with lung cancer patients from the central part of China ［J］. Oncol Res, 2008, 20(2):333-339.

［3］Wise-Draper TM, Wells SI. Papillomavirus E6 and E7 proteins and their cellular targets ［J］. Front Biosci, 2008,13: 1003-1017.

［4］Arcavi L, Benowitz NL. Cigarette Smoking and Infection ［J］.Arch intern Med, 2004, 164(20): 2206-2216.

［5］Longworth MS, Laimins LA. Pathogenesis of human papillomaviruses in differentiating epithelia ［J］. Microbiol Mol Biol Rev, 2004, 68(2): 362-372.

［6］McMurray HR, Nguyen D, Westbrook TF, et al. Biology of human papillomaviruses ［J］. Int J Exp Pathol, 2001, 82(1):15-33.

［7］Imai MA, Oda Y, Oda M, et al. Overexpression of E2F1 associated with LOH at RB locus and hyperphosphorylation of RB in non-small cell lung carcinoma ［J］. J Cancer Res Clin Oncol, 2004, 130(6): 320-326.

［8］Kaye FJ. RB and cyclin dependent kinase pathways: defining a distinction between RB and p16 loss in lung cancer ［J］.Oncogene, 2002, 21(45): 6908-6914.

［9］Vorburger SA, Pataer A, Yoshida K, et a1. The mitochondrial apoptosis-inducing factor plays a role in E2F-1-induced apoptosis in human colon cancer cells ［J］. Ann Surg Oncol,2003, 10(3): 314-322.

［10］王毓平, 劉文演, 王西明. E2F-1誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡研究進(jìn)展［J］. 基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床, 2006, 26(4): 437-440.

［11］汪永平, 吳翠環(huán), 吳人亮, 等. HPV感染與非小細(xì)胞肺癌的相關(guān)性 ［J］. 中國(guó)癌癥雜志, 2006, 16(4): 246-248.

［12］Lo Muzio L, Campisi G, Giovannelli L, et a1. HPV DNA and survivin expression in epithelial oral carcinogenesis: a relationship? ［J］. Oral Oncol, 2004, 40(7): 736-741.

［13］Jiang Y, Saavedra HI, Holloway MP, et a1. Aberrant regulation of survivin by the RB/E2F family of proteins ［J］. Biol Chem, 2004, 279(39): 40511-40520.

［14］Suzuki A, Hayashida M, Ito T, et a1. Survivin initiates cell cycle entry by the competitive interaction with Cdk4/p16(INK4a) and Cdk2/cyclin E complex activation ［J］.Oncogene, 2000, 19(29): 3225-3234.

Expression of E2F-1, survivin in non-small cell lung cancer and their relationship with HPV infection

KONG Ling-hui,WU Cui-huan,LI Ying,ZHANG Ming,ZHANG Yu-hui(Department of Pathology,Zhuozhou Hospital, Zhuozhou Hebei 072750, China)

WU Cui-huan E-mail：wuch-tj@163.com

Background and purpose：Research has showed that HPV is closely related with many malignant tumors including lung cancer. This study aimed to investigate HPV 16 and 18 infections, the expression of E2F-1 and survivin protein in NSCLC as well as the correlation among them, and to elucidate the possible molecular mechanisms that HPV infection induced carcinogenesis of NSCLC.Methods：Forty-seven NSCLC cases and 13 benign lung cases were examined by type-specific PCR for the purpose of detecting HPV DNA positive rate and by IHC for the expression level of E2F-1 and survivin protein, respectively.Results：The positive rates of HPV16 and 18 DNA in NSCLC was 42.55%(20/47) and were significantly higher than that in benign lung cases (7.69%, 1/13)(P＜0.05). No correlation was found between HPV infection, age, sex and lymph node metastasis, but there was a significant correlation between HPV infection rate and patients with a history of smoking, histological type and degree of differentiation of patients with NSCLC (P＜0.05). Expression rate of E2F-1 protein in NSCLC was 59.57%(28/47) and was significantly higher than that in benign lung cases(23.08%, 3/13)(P＜0.025). Overexpression rate of E2F-1 was 64.29%(18/28) in NSCLC.Expression rate of survivin protein was 61.70%(29/47) in NSCLC but there was no expression in the benign lung cases. Expression of the two proteins was positively correlated in NSCLC(r=0.3151,P＜0.05). Expression rate of E2F-1and survivin protein were 85.00%(17/20) and 80.00%(16/20), respectively, in HPV DNA positive group, compared to 40.74%(11/27) and 48.15%(13/27) in HPV DNA negative groups, there was significant difference between the groups (P＜0.05).Conclusion：HPV16 and 18 infections may have etiologic significance for NSCLC; the possible mechanisms may be associated with the up-regulated expression of E2F-1 and survivin protein.

Non-small cell lung cancer; Human papillomavirus 16 and 18; E2F-1; Survivin; PCR;Immunohistochemistry

10.3969/j.issn.1007-3969.2011.02.001

R734.2；R730.23

A

1007-3639(2011)02-0081-05

國(guó)家高技術(shù)研究發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目（863計(jì)劃）（No:2008AA02Z107）。

吳翠環(huán) E-mail:wuch-tj@163.com

2010-11-02

2011-01-12）