ER陽性乳腺癌中MUC1的強(qiáng)陽性表達(dá)及其與預(yù)后的關(guān)系

裔海鷹 謝軼群 李圓 黃雷

1.上海市黃浦區(qū)中心醫(yī)院乳腺外科，上海 200002；2.上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)教研室，上海 200025；

ER陽性乳腺癌中MUC1的強(qiáng)陽性表達(dá)及其與預(yù)后的關(guān)系

裔海鷹1謝軼群1李圓2黃雷2

1.上海市黃浦區(qū)中心醫(yī)院乳腺外科，上海 200002；2.上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)教研室，上海 200025；

背景與目的：黏蛋白1(mucin 1，MUC1)主要作為血清學(xué)分子標(biāo)記應(yīng)用于乳腺癌患者術(shù)后腫瘤復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的監(jiān)測(cè)，但其在乳腺癌患者術(shù)后早期檢測(cè)對(duì)預(yù)后的價(jià)值尚不明確。本研究旨在通過檢測(cè)乳腺癌組織中MUC1的強(qiáng)陽性表達(dá)，分析其與ER表達(dá)以及預(yù)后的關(guān)系，以探討MUC1強(qiáng)陽性表達(dá)在乳腺癌術(shù)后早期檢測(cè)對(duì)預(yù)后的作用。方法：采用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)134例乳腺癌組織中MUC1的強(qiáng)陽性表達(dá)情況，并分析其與ER表達(dá)以及預(yù)后的關(guān)系。結(jié)果：本組乳腺癌組織中MUC1強(qiáng)陽性表達(dá)率為47.0%，乳腺癌組織中MUC1強(qiáng)陽性表達(dá)與ER陽性表達(dá)存在著顯著的正相關(guān)關(guān)系(χ2=10.09，P＜0.01，r=0.27)。在ER陰性乳腺癌患者中尚不能認(rèn)為MUC1強(qiáng)陽性表達(dá)與預(yù)后相關(guān)(P=0.26)；經(jīng)單因素和多因素分析，在ER陽性并接受他莫昔芬治療的乳腺癌患者中，MUC1強(qiáng)陽性表達(dá)、Her-2強(qiáng)陽性表達(dá)和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀態(tài)均是獨(dú)立的預(yù)后因子(P＜0.05)。同時(shí)，多因素分析表明Her-2強(qiáng)陽性表達(dá)的優(yōu)勢(shì)比最大(OR=12.41)，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀態(tài)次之，MUC1強(qiáng)陽性表達(dá)最小。結(jié)論：在乳腺癌組織中MUC1強(qiáng)陽性表達(dá)與ER表達(dá)正相關(guān)，在ER陽性并接受他莫昔芬治療的乳腺癌患者中MUC1強(qiáng)陽性表達(dá)具有獨(dú)立的預(yù)后價(jià)值。

乳腺癌； 黏蛋白1； 雌激素受體； 預(yù)后； 免疫組織化學(xué)

黏蛋白1(mucin 1，MUC1)是一種高相對(duì)分子質(zhì)量糖蛋白，主要分布于呼吸道、乳腺、胃腸道等上皮組織［1］。臨床上，MUC1通常作為血清學(xué)分子標(biāo)記，應(yīng)用于乳腺癌患者術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的監(jiān)測(cè)。然而，乳腺癌術(shù)后早期血清MUC1變化較小，其臨床價(jià)值較為有限。相關(guān)研究表明在乳腺癌組織中MUC1的陽性表達(dá)率較高(約78%～90%)，與預(yù)后無明顯相關(guān)［2-4］，但也有研究顯示MUC1強(qiáng)陽性表達(dá)與預(yù)后可能相關(guān)［5］。因此，我們認(rèn)為在乳腺癌組織中測(cè)定MUC1的強(qiáng)陽性表達(dá)可能對(duì)乳腺癌術(shù)后早期更具價(jià)值。故 我們引入MUC1強(qiáng)陽性表達(dá)的概念，采 用免疫組織化學(xué)法測(cè)定乳腺癌組織中MUC1的強(qiáng)陽性表達(dá)情況。同時(shí)，由于國內(nèi)外相關(guān)研究表明MUC1表達(dá)與雌激素受體(estrogen receptor，ER)表達(dá)相關(guān)［6］。因此，本研究進(jìn)一步分析 了MUC1強(qiáng)陽性表達(dá)與ER表達(dá)的相關(guān)性，進(jìn)而 在ER陽性和ER陰性乳腺癌患者中對(duì)預(yù)后進(jìn)行分層分析。通過在ER陽性并接受他莫昔芬治療的乳腺癌患者中對(duì)預(yù)后的單因素和多因素分析，明確MUC1的強(qiáng)陽性表達(dá)在ER陽性并接受他莫昔芬治療的乳腺癌患者中是否為獨(dú)立的預(yù)后因子。

1 資料和方法

1.1 一般資料

所有標(biāo)本均為上海市黃浦區(qū)中心醫(yī)院乳腺外科2004年—2005年間 手術(shù)切除的乳腺癌組織標(biāo)本，共134例，并經(jīng)病理HE染色和本院兩位以上病理科醫(yī)師確診。各組織標(biāo)本均有完整的術(shù)后病理資料。其中浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌106例、浸潤(rùn)性小葉癌22例、浸潤(rùn)性神經(jīng)內(nèi)分泌癌2例、黏液腺癌4例。其中ER陽性95例(均接受他莫昔芬治療5年)，39例伴有腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況以術(shù)后病理檢查為準(zhǔn))。乳腺癌患者手術(shù)前均未經(jīng)過抗癌治療(包括放療、化療及內(nèi)分泌治療等)。乳腺癌患者均為女性，年齡26～83歲(平均55歲)。

1.2 主要試劑

MUC1單克隆抗體由上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院遺傳學(xué)教研室黃雷 教授提供；EnVision試劑購自上海藍(lán)創(chuàng)生物科技發(fā)展有限公司；對(duì)二甲胺基偶氮苯(DAB)顯色試劑盒購自福州邁新生物技術(shù)有限公司。

1.3 免疫組化染色

所有標(biāo)本均經(jīng)10%中性甲醛固定，經(jīng)常規(guī)脫水透明石蠟包埋，做4 μm厚連續(xù)切片，備常規(guī)HE染色及免疫組織化學(xué)染色，免疫組織化學(xué)染色采用EnVision法。根據(jù)一抗說明書要求進(jìn)行前處理。石蠟切片常規(guī)脫蠟至水后，以3%H2O2室溫下溫育10 min以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶的活性。石蠟切片浸入0.05 mol/L EDTA的緩沖液(pH=8.0)微波(98℃)加爐熱10 min，重復(fù)2次，自然冷卻20 min，進(jìn)行熱誘導(dǎo)抗原修復(fù)。為阻斷非特異性抗體結(jié)合，切片以10%羊血清PBS中室溫溫育30 min。滴加抗鼠MUC1單克隆抗體(1∶100)，4 ℃溫育過夜。滴加酶標(biāo)記的二抗(EnVision試劑)，室溫濕盒中溫育60 min。DAB顯色3 min，蘇木精襯染，常規(guī)酒精梯度脫水、二甲苯透明、中性樹膠封片、光鏡觀察實(shí)驗(yàn)結(jié)果。實(shí)驗(yàn)中以PBS代替一抗作陰性對(duì)照，以已知陽性片作陽性對(duì)照，以確保實(shí)驗(yàn)的特異性和靈敏性。

1.4 免疫組化染色結(jié)果判定

MUC1染色陽性結(jié)果的判定標(biāo)準(zhǔn)：乳腺癌細(xì)胞膜和(或)胞質(zhì)中出現(xiàn)棕褐色顆粒染色為MUC1陽性表達(dá)細(xì)胞。乳腺癌組織中 MUC1 表達(dá)強(qiáng)度分級(jí)，每張切片隨機(jī)選擇5個(gè)高倍視野，按陽性細(xì)胞數(shù)占同類細(xì)胞的百分率分4級(jí)：陽性細(xì)胞數(shù)＜10%為陰性表達(dá)(-)，10%～＜30%為中度表達(dá)(+)，30%～＜50%為高表達(dá)(++)，≥50%為強(qiáng)陽性表達(dá)(+++)［6］(圖1)。

ER、PR、Her-2均記為(+)和(-)。ER(+)為原術(shù)后病理資料ER(+～+++)；ER(-)為原術(shù)后病理資料ER(-)。PR(+)為原術(shù)后病理資料PR(+～+++)；PR(-)為原術(shù)后病理資料PR(-)。Her-2(+)為原術(shù)后病理資料Her-2(+++)；Her-2陰性為原術(shù)后病理資料Her-2(-、＋或++)。

1.5 隨訪

134例乳腺癌患者均從病理確診時(shí)開始計(jì)算生存時(shí)間，隨訪截止時(shí)間為2010年3月。失訪8例，隨訪率94%，中位隨訪時(shí)間5.3年。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 17 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。本組乳腺癌患者中MUC1的強(qiáng)陽性表達(dá)與ER的關(guān)系、ER陰性乳腺癌患者中MUC1的強(qiáng)陽性表達(dá)與預(yù)后的關(guān)系，采用χ2檢驗(yàn)、Fish確切概率法進(jìn)行分析，P＜0.05 為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。對(duì)影響ER陽性并接受他莫昔芬治療的乳腺癌患者預(yù)后的因素進(jìn)行單因素和多因素分析。單因素分析采用χ2檢驗(yàn)、Fisher’s確切概率法，P＜0.05 為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意 義。多因素分析變量篩選法為向前逐步法，采用Wald檢驗(yàn)，進(jìn)入方程的檢驗(yàn)水準(zhǔn)為0.05，變量保留在方程的水準(zhǔn)為0.10。

2 結(jié) 果

2.1 本組乳腺癌組織中MUC1強(qiáng)陽性表達(dá)與ER表達(dá)的關(guān)系

本組134例乳腺癌組織中ER陽性表達(dá)95例，陽性率70.9%；MUC1強(qiáng)陽性表達(dá)63例，強(qiáng)陽性率47.0%。MUC1呈強(qiáng)陽性表達(dá)的63例乳腺癌組織中53例ER呈陽性表達(dá)，陽性率為84.1%；MUC1呈非強(qiáng)陽性表達(dá)的71例乳腺癌組織中42例ER呈陽性表達(dá)，陽性率為59.2%。經(jīng)χ2檢驗(yàn)分析，本組乳腺癌中MUC1強(qiáng)陽性表達(dá)與ER陽性表達(dá)存在著顯著的正相關(guān)關(guān)系(χ2=10.09，P＜0.01，r=0.27)。

2.2 ER陰性乳腺癌患者中MUC1的強(qiáng)陽性表達(dá)與預(yù)后的關(guān)系

本組134例乳腺癌患者中ER陰性39例，獲得隨訪37例，失訪2例，5年總生存率為59.5%。MUC1強(qiáng)陽性表達(dá)組10例，死亡6例，5年總生存率為40.0%；MUC1非強(qiáng)陽性表達(dá)組27例，死亡9例，5年總生存率66.7%。本組ER陰性乳腺癌患者中MUC1強(qiáng)陽性表達(dá)患者生存率低于MUC1非強(qiáng)陽性表達(dá)者，經(jīng)Fish確切概率法分析，兩者差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.26)，提示在ER陰性乳腺癌患者中尚不能認(rèn)為MUC1強(qiáng)陽性表達(dá)與預(yù)后相關(guān)。

2.3 影響ER陽性并接受他莫昔芬治療的乳腺癌患者預(yù)后的因素

2.3.1 單因素分析 本組134例乳腺癌患者，ER陽性95例，獲得隨訪89例(均接受他莫昔芬治療5年)，失訪6例，5年總生存率為80.9%。其預(yù)后經(jīng)χ2檢驗(yàn)、Fisher’s確切概率法分析，MUC1強(qiáng)陽性表達(dá)、Her-2強(qiáng)陽性表達(dá)和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀態(tài)對(duì)預(yù)后的影響有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05，表1)。

2.3.2 多因素分析 將單因素分析中有意義的MUC1強(qiáng)陽性表達(dá)、Her-2強(qiáng)陽性表達(dá)和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀態(tài)共3個(gè)因素進(jìn)行Logistic回歸分析，結(jié)果顯示三者在ER陽性并接受他莫昔芬治療的乳腺癌患者中均是獨(dú)立的預(yù)后因子(表2)。同時(shí)，可以看出Her-2強(qiáng)陽性表達(dá)的優(yōu)勢(shì)比(OR)最大，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀態(tài)次之，MUC1強(qiáng)陽性表達(dá)最小，說明Her-2強(qiáng)陽性表達(dá)對(duì)預(yù)后的影響作用在三者中最大，而MUC1強(qiáng)陽性表達(dá)最小。

3 討 論

MUC1基因的編碼產(chǎn)物黏蛋白1是一種高相對(duì)分子質(zhì)量跨膜糖蛋白，主要分布于呼吸道、乳腺、胃腸道等上皮組織近管或腺腔面，呈頂端表達(dá)、極性分布，起潤(rùn)滑保護(hù)以及介導(dǎo)細(xì)胞間信號(hào)傳導(dǎo)的作用［1］。在乳腺癌組織中，MUC1常出現(xiàn)過度表達(dá)且頂端定位不清，呈非極性分布［7］。臨床上MUC1通常作為血清學(xué)分子標(biāo)記(即CA15-3，MUC1的一個(gè)抗原決定簇)應(yīng)用于乳腺癌患者術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的監(jiān)測(cè)。研究發(fā)現(xiàn)在出現(xiàn)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的乳腺癌患者中，有50%～80%伴有CA15-3水平升高［8］。然而，乳腺癌術(shù)后早期血清MUC1變化較小，其臨床價(jià)值較為有限。同時(shí)，相關(guān)研究表明MUC1在乳腺癌組織中的陽性表達(dá)率較高(約78%～90%)，與預(yù)后無明顯相關(guān)［2～4］。但MUC1強(qiáng)陽性表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀態(tài)、預(yù)后可能相關(guān)［5］。因此，我們認(rèn)為在乳腺癌組織中測(cè)定MUC1的強(qiáng)陽性表達(dá)可能對(duì)乳腺癌術(shù)后早期更具價(jià)值。故我們引入MUC1強(qiáng)陽性表達(dá)的概念并對(duì)其進(jìn)行了初步研究，結(jié)果顯示在本組134例乳腺癌患者中MUC1強(qiáng)陽性表達(dá)率為47%。

表 1 ER陽性并接受他莫昔芬治療的乳腺癌患者預(yù)后的單因素分析Tab. 1 Univariate analysis of prognostic factors in ER-positive breast carcinoma with tamoxifen therapy

表 2 ER陽性并接受他莫昔芬治療的乳腺癌患者預(yù)后的多因素分析Tab. 2 Multivariate analysis of prognostic factors in ER-positive breast carcinoma with tamoxifen therapy

相關(guān)研究表明MUC1表達(dá)與ER表達(dá)相關(guān)［9］，故本研究首先測(cè)定了乳腺癌組織中MUC1強(qiáng)陽性表達(dá)與ER表達(dá)的關(guān)系。結(jié)果顯示，本組134例乳腺癌組織中MUC1強(qiáng)陽性表達(dá)與ER陽性表達(dá)存在著顯著的正相關(guān)關(guān)系(χ2=10.09，P＜0.01，r=0.27)，兩者存在共線現(xiàn)象。盡管MUC1與ER在表達(dá)上存在一定相關(guān)，但相關(guān)性較低，且只能說明是表達(dá)上相關(guān)，而兩者對(duì)乳腺癌預(yù)后的影響機(jī)制可能并不相同。本研究結(jié)果顯示，MUC1強(qiáng)陽性表達(dá)在ER陰性乳腺癌患者中與預(yù)后不相關(guān)，在ER陽性并接受他莫昔芬治療的乳腺癌患者中與預(yù)后相關(guān)，我們推測(cè)MUC1對(duì)預(yù)后的負(fù)面影響機(jī)制可能通過ER相關(guān)通路來實(shí)現(xiàn)，致使兩者雖在表達(dá)上存在一定相關(guān)，但各自對(duì)預(yù)后的影響機(jī)制以及結(jié)果均不同。

本研究顯示在ER陽性并接受他莫昔芬治療的乳腺癌患者中MUC1強(qiáng)陽性表達(dá)提示預(yù)后較差，我們認(rèn)為可能與其促進(jìn)脂質(zhì)代謝通路活化，以及導(dǎo)致他莫昔芬治療失敗有關(guān)。Wei等［10］認(rèn)為MUC1癌蛋白能夠穩(wěn)定雌激素受體α，并激活其介導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄，進(jìn)而促使雌二醇介導(dǎo)的乳腺癌細(xì)胞生長(zhǎng)。Khodarev等［11］的研究表明MUC1能調(diào)節(jié)膽固醇和脂肪酸代謝，而在ER陽性的乳腺癌患者中存在這些通路的活化均預(yù)示他莫昔芬治療的失敗。因而，MUC1與ER陽性的乳腺癌的發(fā)展相關(guān)，并可能導(dǎo)致癌細(xì)胞出現(xiàn)對(duì)他莫昔芬的抗藥性，進(jìn)而致使預(yù)后較差。此外，Khodarev等［12］的另一項(xiàng)研究認(rèn)為在乳腺癌中MUC1可以誘導(dǎo)某些與腫瘤發(fā)生相關(guān)的轉(zhuǎn)錄過程而導(dǎo)致患者預(yù)后較差，其進(jìn)一步研究表明在大約15%的乳腺癌中MUC1可致使轉(zhuǎn)錄信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)子和活化子1(signal transducer and activator of transcription 1，STAT1)通路活化，導(dǎo)致患者預(yù)后較差［13］。

本研究引入MUC1強(qiáng)陽性表達(dá)的概念并探討其價(jià)值，我們認(rèn)為MUC1強(qiáng)陽性表達(dá)與ER在表達(dá)上存在一定相關(guān)，但兩者對(duì)預(yù)后的影響機(jī)制以及結(jié)果并不同。尚不能認(rèn)為MUC1強(qiáng)陽性表達(dá)在ER陰性乳腺癌患者中有預(yù)后價(jià)值；而在ER陽性并接受他莫昔芬治療的乳腺癌患者中MUC1強(qiáng)陽性表達(dá)具有獨(dú)立預(yù)后價(jià)值，MUC1強(qiáng)陽性表達(dá)提示預(yù)后較差。

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The strongly positive expression of MUC1 in ER-positive breast cancer tissues and the relationship between MUC1 prognosis of breast cancer

YI Hai-ying,XIE Yi-qun,LI Yuan,HUANG Lei(Department of Breast Surgery, Shanghai Huangpu Center Hospital, Shanghai 200002,China)

YI Hai-ying E-mail：yihaiying@163.com

Background and purpose：As a serum molecular marker, MUC1 was used to monitor recurrence and metastasis of breast cancer after surgery. But the value of MUC1 for prognosis of breast cancer in early postoperative patients was not clear. This study investigated the strongly positive expression of mucin 1(MUC1) in breast cancer tissue and analyzed the relationship between the strongly positive expression of MUC1 and expression of ER and prognosis of breast cancer, to explore clinical significance of MUC1 for prognosis in early postoperative patients.Methods：The strongly positive expression of MUC1 in 134 cases of breast cancer was detected by means of immunohistochemistry and the relationship between the strongly positive expression of MUC1 and expression of ER and prognosis of breast cancer was analyzed.Results：The strongly positive rate of MUC1 in 134 cases was 47.0 %.The strongly positive expression of MUC1 in breast cancer was significantly correlated with positive expression of ER(χ2=10.09,P＜0.01,r=0.27) and was not correlated with prognosis (P=0.26) in ER(-) breast cancer patients. The strongly positive expression of MUC1, Her-2 and lymph node metastasis were independent prognostic factors (P＜0.05) in ER(+)patients with tamoxifen therapy according to univariate and multivariate analysis. Multivariate analysis showed that the odds ratio of strong expression of Her-2 was the maximum (OR=12.41), followed by lymph node metastasis, MUC1 was the minimum.Conclusion：The strongly positive expression of MUC1 in breast cancer tissues was correlated with positive expression of ER and had independent prognostic value in ER(+) patients with tamoxifen therapy.

Breast neoplasms; Mucin 1; Estrogen receptor; Prognosis; Immunohistochemistry

10.3969/j.issn.1007-3969.2011.02.007

R737.9；R730.23

A

1007-3639(2011)02-0115-05

黃浦區(qū)衛(wèi)生事業(yè)發(fā)展獎(jiǎng)勵(lì)金項(xiàng)目（No：HWY-07156）。

裔海鷹 E-mail:yihaiying@163.com

2010-07-06

2010-10-23）