痰標(biāo)本采集、儲存及運輸過程對培養(yǎng)結(jié)果影響的分析

宋紅煥 孟爾旺 時金艷 彭紅 許衛(wèi)國

(1.江蘇省疾病預(yù)防控制中心 南京 210009;2.江蘇省連云港第四人民醫(yī)院 連云港 222000)

痰標(biāo)本采集、儲存及運輸過程對培養(yǎng)結(jié)果影響的分析

宋紅煥1孟爾旺2時金艷2彭紅1許衛(wèi)國1

(1.江蘇省疾病預(yù)防控制中心 南京 210009;2.江蘇省連云港第四人民醫(yī)院 連云港 222000)

目的通過分析某市級結(jié)核病實驗室痰培養(yǎng)數(shù)據(jù),總結(jié)縣級運送陽性痰標(biāo)本至市級進行痰培養(yǎng)工作模式對痰培養(yǎng)結(jié)果的影響因素>。方法對江蘇省某市級結(jié)核病實驗室2010年4月—10月痰培養(yǎng)數(shù)據(jù)進行分析>。結(jié)果該實驗室初診涂陽病人痰培養(yǎng)共計475例,對痰標(biāo)本采集、儲存、運輸、培養(yǎng)等各個環(huán)節(jié)進行分析,得出：不同送樣縣區(qū)(P=0.007),不同痰標(biāo)本數(shù)量(P=0.008),不同送樣時間間隔(P=0.037),不同痰標(biāo)本陽性級別(P=0.001)的痰培養(yǎng)結(jié)果均有統(tǒng)計學(xué)意義>。結(jié)論由縣級運送痰標(biāo)本至市級進行痰培養(yǎng),應(yīng)在采集標(biāo)本時嚴格按照《中國結(jié)核病防治規(guī)劃實施工作指南》(以下簡稱《指南》)要求采集即夜晨3份痰標(biāo)本,提高送檢痰標(biāo)本質(zhì)量,盡快送檢,并加強對不同縣區(qū)樣品采集運送人員的培訓(xùn)。

分枝桿菌,結(jié)核;痰;細菌學(xué)技術(shù)

近年來全球基金結(jié)核病項目、中國衛(wèi)生部-蓋茨基金會耐多藥結(jié)核項目依次在江蘇省啟動,按照項目設(shè)計要求,由縣級結(jié)核病實驗室收集涂陽患者痰標(biāo)本送至市級結(jié)核病實驗室進行痰培養(yǎng),并由市或省級實驗室進行藥物敏感性試驗,以便進一步的診斷和治療。江蘇省中蓋結(jié)核病項目某項目市采用縣級運送初診涂陽病人痰標(biāo)本至市級的工作模式開展相關(guān)實驗室檢查。本文探討該工作模式可行性,并分析在這種模式下,影響痰培養(yǎng)結(jié)果的主要因素,旨在總結(jié)經(jīng)驗,找出存在的問題和困難,明確今后該模式下痰培養(yǎng)工作的重點,提出改進意見。

1 資料和方法

1.1 資料來源

1.1.1 標(biāo)本收集 2010年4—10月,江蘇省某市所轄6個縣區(qū)475例初診病人陽性痰標(biāo)本656份。

1.1.2 標(biāo)本運輸 該市級所轄6縣區(qū)將初診涂陽痰標(biāo)本運至市級,項目要求縣級標(biāo)本收集后儲存于4℃冰箱,并在3d內(nèi)送至市級結(jié)核病實驗室進行結(jié)核分枝桿菌分離。運輸過程采用合格的包裝并要求冷藏。

1.1.3 實驗室痰培養(yǎng) 根據(jù)項目要求及《指南》[1]選擇涂片檢查陽性的標(biāo)本進行培養(yǎng),患者用于涂片的3份痰標(biāo)本中選取2份做培養(yǎng)：(1)3份痰標(biāo)本均為陽性：選取陽性級別高的2份痰標(biāo)本進行培養(yǎng);(2)3份痰標(biāo)本2份陽性：選取2份陽性痰標(biāo)本進行培養(yǎng);(3)3份痰標(biāo)本1份陽性：選取陽性標(biāo)本和1份質(zhì)量好的陰性標(biāo)本進行培養(yǎng)。

該市級實驗室按照規(guī)定選取痰標(biāo)本,采用中性離心處理法[2],前處理完成后,以無菌吸管吸取前處理液0.1 ml,均勻接種在2支酸性羅氏培養(yǎng)基斜面上。保持斜面水平向上37℃培養(yǎng)24 h后,直立放置37℃繼續(xù)培養(yǎng)。接種后第3和7 d觀察培養(yǎng)情況,此后每周觀察1次,并在分離培養(yǎng)結(jié)果記錄本上記錄生長結(jié)果。如第8周末培養(yǎng)基無菌落生長報告培養(yǎng)陰性。

1.1.4 實驗室質(zhì)量要求 (1)涂陽培陰率(以病例計算)：對于未治療的患者,一般涂陽培陰率不超過10%。(2)污染率(以培養(yǎng)管數(shù)計算)：污染率以接種的培養(yǎng)管為計算單位,不以標(biāo)本為計算單位,一般實驗室污染率在3%～5%之間。

1.2 方法 采用 excel 2003進行數(shù)據(jù)錄入,SPSS13.0進行數(shù)據(jù)分析,統(tǒng)計方法采用行×列 χ2檢驗

2 結(jié)果

2.1 市級實驗室痰培養(yǎng)檢測結(jié)果 2010年4—10月該市級實驗室共收集來自6個縣區(qū)的初診涂陽結(jié)核病人475例(痰標(biāo)本656份,其中有652份痰標(biāo)本進行了培養(yǎng)),其中培養(yǎng)成功385例(即在病人的痰標(biāo)本中成功分離出結(jié)核分枝桿菌),培養(yǎng)失敗90例(培養(yǎng)失敗即在病人的痰標(biāo)本中未分離出結(jié)核分枝桿菌,包括培養(yǎng)陰性及污染,污染指選取培養(yǎng)的病人痰標(biāo)本所有培養(yǎng)管在生長過程中全部出現(xiàn)污染)。該市級結(jié)核病實驗室痰培養(yǎng)污染率為5.1%(67/1 304)。不同縣區(qū)痰標(biāo)本培養(yǎng)結(jié)果比較分析見表1。6個縣區(qū)培養(yǎng)成功率的差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.007),其中F縣培養(yǎng)成功率最高(89.4%),E縣培養(yǎng)成功率最低(67.7%),表明在標(biāo)本采集、儲存、運輸?shù)裙ぷ鳝h(huán)節(jié)有待進一步加強。

2.2 不同季度培養(yǎng)結(jié)果比較分析 比較分析不同季度的培養(yǎng)結(jié)果,無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.065),即不同氣溫下的培養(yǎng)結(jié)果無統(tǒng)計學(xué)意義,表明6縣區(qū)在收集、儲存、運送痰標(biāo)本時對儲存溫度的控制不是影響培養(yǎng)結(jié)果的主要因素(表2)。

2.3 不同送樣間隔培養(yǎng)結(jié)果比較分析 送樣間隔(自縣級實驗室收集痰標(biāo)本至運送到市級實驗室的時間(d)間隔),由表3可知不同的送樣間隔培養(yǎng)結(jié)果有統(tǒng)計學(xué)差異(P=0.037),且≥7 d的培養(yǎng)成功率最低(65.6%),比較0～3 d的培養(yǎng)成功率(81.2%)與4～6 d的培養(yǎng)成功率(86.6%)差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.27),不能認為2個送樣間隔有差別。

表1 不同縣區(qū)培養(yǎng)結(jié)果比較分析

表2 不同季度培養(yǎng)結(jié)果比較分析

表3 不同送樣間隔培養(yǎng)結(jié)果比較分析

表4 不同接種時間間隔培養(yǎng)結(jié)果比較分析

表5 不同送樣間隔+培養(yǎng)間隔培養(yǎng)結(jié)果比較分析

2.4 不同接種時間間隔培養(yǎng)結(jié)果比較分析 接種時間間隔為市級實驗室在接收痰標(biāo)本到接種的時間間隔,由表4可知不同接種時間間隔培養(yǎng)結(jié)果無統(tǒng)計學(xué)差異(P=0.0572)。且市級在接收到痰標(biāo)本后大部分(96%,456/475)均在3 d以內(nèi)完成接種。僅有4%病例(19/475)間隔時間在3 d以上。通過分析不同接種時間間隔可間接了解該市級實驗室的工作質(zhì)量。

2.5 不同送樣間隔+接種間隔培養(yǎng)結(jié)果比較分析表3、表4分別分析了不同送樣間隔與不同接種間隔培養(yǎng)結(jié)果,旨在從一個側(cè)面了解痰標(biāo)本運輸以及市級實驗室培養(yǎng)工作質(zhì)量,表5分析了不同送樣間隔+培養(yǎng)間隔培養(yǎng)結(jié)果,即痰標(biāo)本收集至接種的時間間隔,旨在了解2個時間環(huán)節(jié)對培養(yǎng)結(jié)果的總體影響,由表5可知,不同送樣間隔+培養(yǎng)間隔的培養(yǎng)結(jié)果差異無統(tǒng)計學(xué)意義,但由表5可知,在痰培養(yǎng)日常工作中從樣品采集到接種在7 d內(nèi)完成較優(yōu)。

2.6 不同陽性級別培養(yǎng)結(jié)果比較分析(以標(biāo)本計算) 對不同陽性級別痰標(biāo)本培養(yǎng)結(jié)果進行分析,由表6可知,有統(tǒng)計學(xué)差異,且與理論相符,陽性級別越高,培養(yǎng)成功率越高。

表6 不同陽性級別培養(yǎng)結(jié)果比較分析(以標(biāo)本計算)

表7 不同標(biāo)本數(shù)量培養(yǎng)結(jié)果比較分析

2.7 不同標(biāo)本數(shù)量培養(yǎng)結(jié)果比較分析 由表7可知,不同標(biāo)本數(shù)量培養(yǎng)結(jié)果有統(tǒng)計學(xué)差異(P=0.008)。

3 討論

結(jié)核分枝桿菌分離培養(yǎng)是結(jié)核病細菌學(xué)檢查的主要部分,隨著我國結(jié)核病耐藥工作的開展,傳統(tǒng)的涂片已遠遠不能滿足日常工作的需求,新型的耐藥診斷技術(shù)在推廣過程中亦需傳統(tǒng)的藥敏方法進行驗證,故結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)工作逐步提上日程,而目前在大部分縣級實驗室一時難以達到生物安全二級的要求,本文通過分析江蘇某市級實驗室2010年4月—10月7個月的實驗室初診病人培養(yǎng)登記本及縣區(qū)標(biāo)本運輸?shù)怯洷?總結(jié)縣級運送陽性痰標(biāo)本至市級進行結(jié)核分枝桿菌分離工作模式對痰培養(yǎng)結(jié)果的影響因素?，F(xiàn)從以下幾個方面進行探討。

3.1 標(biāo)本數(shù)量及質(zhì)量保證 《指南》對痰標(biāo)本收集有明確的要求,由本文可知,收集的痰標(biāo)本份數(shù)與培養(yǎng)結(jié)果之間差異有統(tǒng)計學(xué)意義,收集3份痰標(biāo)本培養(yǎng)成功率為 93.3%,2份為 88.1%,1份僅為77.0%,另外,還要保證痰標(biāo)本質(zhì)量及標(biāo)本量(一般在3～5ml),在日常工作中應(yīng)嚴格按照《指南》要求,對醫(yī)務(wù)人員加強培訓(xùn),對就診者進行充分宣教,使其充分了解痰標(biāo)本收集份數(shù)對實驗室診斷結(jié)果的影響。具體措施可采用醫(yī)務(wù)人員示范或者印制宣傳畫、無痰患者采用霧化引痰的方式,保證標(biāo)本的數(shù)量及質(zhì)量。

3.2 低溫儲存,盡快送檢 本文數(shù)據(jù)顯示不同的送樣時間間隔有統(tǒng)計學(xué)意義,7 d內(nèi)培養(yǎng)成功率為82.2%,7 d及以上為65.6%,原則上痰標(biāo)本在采集后應(yīng)立即運送至培養(yǎng)實驗室進行培養(yǎng),若不能立即送檢則應(yīng)將標(biāo)本置于4℃短時冰箱冷藏,并從留取痰標(biāo)本至接種不應(yīng)超過7 d,在運輸過程中應(yīng)注意冷藏,另外本文通過分析得出不同接種間隔,不同送樣間隔+接種間隔的培養(yǎng)結(jié)果比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義,國外有研究表明,痰標(biāo)本收集在合格的容器里,冷藏不加防腐劑,即使短時間無冷藏運送到痰培養(yǎng)實驗室亦可有較高的陽性培養(yǎng)率[3],與本次研究結(jié)果一致,在3個時間間隔的比較分析中,只有不同的送樣時間間隔差異有統(tǒng)計學(xué)意義,由此可見,在整個標(biāo)本儲存和運輸?shù)倪^程中,縣級運送標(biāo)本時間間隔較實驗室接種時間間隔更難以控制,加強痰標(biāo)本運輸環(huán)節(jié)管理及質(zhì)量保證是該工作模式中重要組成部分。

3.3 嚴格按照操作流程,保證實驗室質(zhì)量 痰培養(yǎng)實驗室在接收到痰標(biāo)本后應(yīng)立即進行處理,若不能立即處理則應(yīng)置于4℃冰箱短時儲存,本文有5例病人標(biāo)本因各種原因不能盡快送檢,工作人員將標(biāo)本置于-20℃冰箱保存,從標(biāo)本留取到接種時間間隔在15～20 d,5例病人標(biāo)本全部培養(yǎng)成功,故若因各種原因近期不能送檢或者完成標(biāo)本處理,應(yīng)置于-20℃冰箱保存。實驗室痰培養(yǎng)檢測應(yīng)嚴格按照操作程序進行,并每天檢測培養(yǎng)箱溫度,避免因培養(yǎng)溫度過高或者過低引起假陰性。

3.4 污染率分析 該市級實驗室,痰培養(yǎng)污染率為5.1%,現(xiàn)場督導(dǎo)未發(fā)現(xiàn)實驗室人員在操作中存在的問題,故污染率偏高的主要原因出現(xiàn)在標(biāo)本儲存和運輸環(huán)節(jié)的可能性更大。在該工作模式下,加強標(biāo)本收集、儲存、運輸質(zhì)量管理,是實驗室成功檢出結(jié)核分枝桿菌的關(guān)鍵。

[1]衛(wèi)生部疾病預(yù)防控制局,衛(wèi)生部醫(yī)政司,中國疾病預(yù)防控制中心.中國結(jié)核病防治規(guī)劃實施工作指南[S].北京：中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)出版社,2009：12-13.

[2]中國防癆協(xié)會基礎(chǔ)專業(yè)委員會.結(jié)核病診斷實驗室檢驗規(guī)程[M].北京：中國教育文化出版社,2006：30-37.

[3]Lumb R,Ardian M,Waramori G,Syahrial H,Tjitra E,Maguire GP,Anstey NM,Kelly PM.An alternative method for sputum storage and transport formycobacterium tuberculosisdrug resistance survey s[J].Int J T uberc Lung Dis,2006,10(2)：172-177.

Analysis of influencing factors for culture results during sputum collection,storage and transport

Song Honghuan1,Meng Erwang2,Shi Jinyan2,Peng Hong1,Xu Weiguo1
(1.Jiangsu Center for Disease Control and Prevention,Nanjing210009,China;2.the Fourth Hospital of Lianyungang,Lianyungang222000,China)

ObjectiveTo analyze the influencing factors for sputum culture during sputum collection,storage and transport.MethodsThe data of sputum culture from a municipal TB lab in Jiangsu province from April to October in 2010 were analyzed.ResultsThe process including sputum specimen collection,storage,transportation and culture in 475 smear-positive patients were analyzed,and found that the sputum specimens from different counties(P=0.007),different specimen quantity(P=0.008),different specimen storage time(P=0.037)and different positive class(P=0.001)all had statistic significance for culture quality.ConclusionsThe procedure of specimen collection,storage,transportation and culture influence the result of culture.Their standard procedure required by the NTP should be strictly followed,and the training for health workers in county laboratory should be strengthened to improve sputum culture quality.

Mycobacterium tuberculosis;sputum;bacteriological techniques

Xu Weiguo(jsjkmck@163.com)

許衛(wèi)國(jsjkmck@163.com)

2011-04-08)

(本文編輯：張曉進)