炮制對北五味子木脂素類成分的影響

逄世峰， 鄭培和， 許世泉， 孫成賀， 王英平

(中國農(nóng)業(yè)科學院特產(chǎn)研究所，吉林吉林 132109)

北五味子為木蘭科植物五味子Schisandra chinensis(Turcz)Baill的干燥成熟果實，具有收斂固澀，益氣生津，補腎寧心之功效［1］。中藥化學成分是其藥效發(fā)揮的物質(zhì)基礎(chǔ)，聯(lián)苯環(huán)辛烯型木脂素是五味子中主要生理活性成分［2］，其中包括五味子醇甲、五味子醇乙、五味子甲素和五味子乙素等［3］。中藥飲片是在中醫(yī)藥理論的指導(dǎo)下，對“中藥材”進行特殊加工炮制的制成品，以醋五味子、酒五味子、

蜜五味子為臨床常用［4］。炮制對飲片理化性質(zhì)的影響是必然存在的，本實驗采用高效液相色譜法對炮制前后五味子中木脂素類成分及其溶出率進行了研究，并以五味子種子進行同步比較，試圖從化學成分角度探討北五味子不同炮制品木脂素類成分的變化與藥效發(fā)揮之間的關(guān)系，為中藥炮制現(xiàn)代化奠定一定理論基礎(chǔ)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Agilent 1200高效液相色譜儀;超聲波清洗器(上?？茖?dǎo)超聲儀器有限公司);電子分析天平(梅特勒TOLEDO型)。

1.2 對照品 五味子醇甲、五味子醇乙對照品購自四川維克奇生物科技有限公司，五味子甲素(批號:0764-200107)、五味子乙素(批號:110765-200205)對照品購于中國藥品生物制品檢定所，供含量測定用。

1.3 試劑 甲醇為色譜純，水為超純水;其他試劑均為分析純。

1.4 藥材 北五味子:購自吉林省通化縣，經(jīng)中國農(nóng)業(yè)科學院特產(chǎn)研究所特作園藝研究室艾軍研究員鑒定為木蘭科植物五味子Schisandra chinensis(Turcz)Baill的干燥成熟果實。

2 方法

2.1 五味子炮制品的制備［5］

2.1.1 生五味子 取原藥材，除去雜質(zhì)及果柄，洗凈，干燥，均勻分成4等份，裝入自封袋保存，以防吸潮影響試驗結(jié)果。取出其中1份，另外3份用于五味子炮制品制備。

2.1.2 醋五味子 取凈五味子，用米醋拌勻，置保鮮盒內(nèi)，密閉，隔水加熱至黑色，取出干燥，稱重。醋的用量為每100 g藥材加20 g米醋。

2.1.3 酒五味子 取凈五味子，用黃酒拌勻，置適宜的容器內(nèi)，密閉，隔水加熱至表面呈紫黑色或黑褐色，取出干燥，稱重。黃酒的用量為每100 g藥材加20 g黃酒。

2.1.4 蜜炒五味子 取煉蜜加適量開水稀釋后，加入凈五味子中，拌勻，潤透，置炒制容器內(nèi)，用文火加熱，炒至不黏手為度，取出放涼。每100 g五味子，用煉蜜10 g。

2.1.5 生五味子種子 取原藥材種子，除去雜質(zhì)，干燥，均勻分成4等份，裝入自封袋保存，以防吸潮影響試驗結(jié)果。取出其中1份，另外3份用于五味子種子炮制品制備。

2.1.6 醋五味子種子 取五味子種子，用米醋拌勻，置保鮮盒內(nèi)，密閉，隔水加熱1.5 h，取出干燥，稱重。醋的用量為每100 g藥材加20 g米醋。

2.1.7 酒五味子種子 取五味子種子，加入黃酒，拌勻，置適宜的容器內(nèi)，密閉，隔水加熱1.5 h，取出干燥，稱重。黃酒的用量為每100 g藥材加20 g黃酒。

2.1.8 蜜炒五味子種子 取煉蜜加適量開水稀釋后，加入凈五味子種子中，拌勻，潤透，置炒制容器內(nèi)，用文火加熱，炒至不黏手為度，取出放涼。每100 g五味子種子，用煉蜜10 g。

2.2 供試品溶液制備 取生品及各炮制品若干，粉碎，過10目篩，精密稱取樣品粉末1 g，置于50 mL量瓶中，加甲醇40 mL，靜止過夜，超聲提取20 min 2次，定容至刻度，搖勻，0.45 μm濾膜過濾，即得供試品溶液。

2.3 色譜條件 色譜柱:hypersil ODS2色譜柱(4.6 mm ×250 mm，5 μm);流動相:(A)乙腈-(B)水;檢測波長:225 nm;流速:1 mL/min，柱溫:25℃;進樣量:20 μL。

表1 梯度洗脫條件Table 1 Gradient elution conditions

2.4 標準曲線的繪制 精密稱取1.0 mg五味子醇甲、醇乙、甲素、乙素對照品，用甲醇定容至10 mL量瓶中。進樣 2.5、5、7.5、10、15、20 μL，以對照品進樣量 (Y，μg)為縱坐標，相應(yīng)的色譜峰面積(X)為橫坐標進行回歸，得五味子木脂素醇甲、醇乙、甲素、乙素的回歸方程分別為:Y=0.004 374X+0.037 075，r:1;Y=0.004 755X－ 0.053 86，r:0.999 9;Y=0.003 922X+0.024 132，r:0.999 9;Y=0.004 725X+0.028 153，r:1。

2.5 樣品含量測定 分別精密吸取供試品溶液各20 μL，注入高效液相色譜儀，得相應(yīng)色譜峰面積，代入回歸方程，計算相應(yīng)木脂素含量。

2.6 炮制對五味子木脂素溶出率的影響［6］取各炮制方法制備五味子及生品12.5 g，加水250 mL，浸泡1 h，煎煮保持微沸1 h，取出殘渣，50℃烘干，稱重。按照上述方法測定殘渣中五味子醇甲、五味子醇乙、五味子甲素、五味子乙素含量。

3 結(jié)果與討論

4種木脂素對照品、北五味子果和種子生品及其炮制品的HPLC譜圖見圖1，主要木脂素類成分的含量和溶出率測定結(jié)果見表2。

表2 不同炮制品木脂素類成分含量及溶出率Table 2 The contents and solubility of lignan compounds in different processed products

圖1 北五味子不同炮制品高效液相色譜圖1.五味子醇甲 2.五味子醇乙 3.五味子甲素 4.五味子乙素Fig.1 The HPLC chromatograms of different processed products of Schisandra chinensis1.schizandrin 2.schisandrol B 3.deoxyschizandrin 4.γ-schizandrin

北五味子經(jīng)不同方法炮制后，并沒有新成分產(chǎn)生，只是木脂素類成分含量和溶出率有不同程度的變化:

各五味子種子炮制品木脂素類成分含量及溶出率均較生品中低。由此推論五味子在炮制過程中木質(zhì)素類成分有小量蒸出，后在蒸制水中檢測到相應(yīng)木質(zhì)素類成分證明這一點;此外，炮制不利于五味子種子中木脂素類成分溶出，與前人推測“五味子經(jīng)炮制后種皮變脆或破裂，易于五味子木脂素溶出”［7］不相一致。

蜜五味子和酒五味子木脂素類成分及溶出率有不同程度的提高，可能由于輔料的加入破壞了五味子果中易升華或易揮發(fā)成分組成，從而減少了木質(zhì)素蒸出動力，也可能五味子果中某類成分或其他木質(zhì)素類成分在蜜和酒的作用下向試驗測定木脂素轉(zhuǎn)化，其變化機制來源于加熱過程中輔料與果肉的作用，使傳統(tǒng)炮制理論“入補藥熟用”有了一定科學依據(jù)。

在醋五味子中，除五味子乙素含量稍有增加，其他木脂素類成分含量及溶出率均有減小，而不同炮制品中以醋五味子的抗脂質(zhì)過氧化及提高免疫作用最為明顯［8］，可能其功效體現(xiàn)在本試驗未測定木脂素類成分的變化［9］。

4 結(jié)論

中藥的化學成分是其發(fā)揮藥效作用的基礎(chǔ)，經(jīng)過炮制，由于受到加熱及輔料處理，使中藥的化學成分發(fā)生一系列變化，有的可能是量變，也可能是質(zhì)變，本研究中雖未發(fā)現(xiàn)新成分生成，但酒五味子、蜜五味子木脂素類成分含量及溶出率的增加，可能是炮制后五味子滋補作用增強的原因之一，為傳統(tǒng)中藥炮制理論提供了一定的科學依據(jù)。

［1］中國藥典［S］.一部.2005:105.

［2］陳業(yè)高.三種五味子科植物化學成分的研究［D］.中國科學院仁海藥物研究所，1988:5.

［3］鄧寒霜，李筱玲，王新軍，等.南五味子炮制標準研究［J］.甘肅科學學報，2008，20(1):65-68.

［4］張 虹，王春秋.五味子的炮制源流及演變［J］.河南中醫(yī)，2002，22(5):86.

［5］葉定江，張世臣.中藥炮制學［M］.北京:人民衛(wèi)生出版社，1999:528.

［6］李英華.生脈飲中5-HMF來源機制及炮制對五味子中化學成分影響的研究［D］.杭州:浙江大學，2006:107-108.

［7］葛會奇.五味子炮制工藝規(guī)范化及原理研究［D］.沈陽:遼寧中醫(yī)藥大學，2007:91.

［8］陸兔林，殷放宙，何箐旋，等.炮制對五味子藥理作用的影響［J］.中藥材，2005，28(10):933-935.

［9］彭修娟，楊新杰，馮改莉.五味子炮制研究進展［J］.亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥，2009，5(5):127.