真菌對(duì) UF-1000i全自動(dòng)尿沉渣分析儀白細(xì)胞檢測(cè)的影響

莫 筠，陳玉蓮，譚洪揚(yáng)，黃碧紅

(臺(tái)山巿人民醫(yī)院，廣東臺(tái)山 529200)

全自動(dòng)尿沉渣分析儀因其操作簡(jiǎn)便、快捷、重復(fù)性好等優(yōu)點(diǎn)，在臨床檢驗(yàn)上廣泛應(yīng)用。但在實(shí)際工作發(fā)現(xiàn)，真菌可影響全自動(dòng)尿沉渣分析儀對(duì)尿中白細(xì)胞的檢測(cè)。2010年 1～12月，我們對(duì)此問題進(jìn)行了研究?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 材料 Sysmex-UF-1000i全自動(dòng)尿沉渣分析儀及其配套試劑(日本 Sysmex公司生產(chǎn)，含其質(zhì)控和校正試劑，校正及每日質(zhì)控在有效范圍內(nèi));CH-20雙目顯微鏡(日本 Olympus公司);改良牛鮑計(jì)數(shù)板。

1.2 方法

1.2.1 底液及各母液的制備 選擇 pH 5.5～7.0、尿液密度 1.010～1.025 kg/L，其余尿十項(xiàng)檢查均為陰性的尿標(biāo)本，用 4 000 r/min離心 10 min，取上清液作為底液 A。取 3份同血型正常血常規(guī)標(biāo)本各 1 ml混合，用生理鹽水離心洗滌 3次，3 000 r/min離心 3 min，去其上清，作為紅細(xì)胞母液BR。取 2份化膿性腦膜炎患者新鮮腦脊液標(biāo)本，用生理鹽水進(jìn)行離心，1 500 r/min離心 2 min，去上清，作為白細(xì)胞母液 BW。取白色念珠菌 ATCC90028作為標(biāo)準(zhǔn)菌株，經(jīng)培養(yǎng)后，取 10個(gè)以上菌落，用生理鹽水洗滌 3次，3 000 r/min離心 3 min去上清，作為真菌母液BY。

1.2.2 實(shí)驗(yàn)分組及檢測(cè)指標(biāo) 將上述 3種母液用底液 A重懸，使用牛鮑計(jì)數(shù)板進(jìn)行充池計(jì)數(shù) 5次，調(diào)整其中各成分，使 3種純母液中各自成分濃度接近 4 000個(gè) /μl，分別記為 BR、BW、BY。將實(shí)驗(yàn)組分為白細(xì)胞—紅細(xì)胞(WBC-RBC)混合尿組、白細(xì)胞—紅細(xì)胞—真菌(WBC-RBC-YLC)混合尿組。按實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)用不同量的底液 A和不同量的 BR、BW、BY進(jìn)行混合，使上述各組中 WBC、RBC、白色念珠菌含量理論值接近 50/μl、100/μl、200/μl、500/μl、1 000/μl、2 000/μl(WBC-RBC-YLC混合組為 1 333/μl)，總量為 5 ml。將各組中不同濃度的實(shí)驗(yàn)標(biāo)本輕輕混勻，用 UF-1000i對(duì)每份標(biāo)本進(jìn)行 5次平行檢測(cè)，記錄其 WBC、RBC、YLC(酵母樣菌 )、細(xì)菌 (BACT)檢測(cè)結(jié)果。整個(gè)實(shí)驗(yàn)在 3 h內(nèi)完成。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用 SPSS11.0統(tǒng)計(jì)軟件，結(jié)果以±s表示，兩樣本的比較采用t檢驗(yàn)，多個(gè)樣本均數(shù)比較用方差分析。P≤0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 WBC-RBC混合尿各有形成分的檢測(cè) UF-1000i對(duì)無真菌的 WBC-RBC混合尿中各細(xì)胞計(jì)數(shù)準(zhǔn)確可靠，儀器無報(bào)警提示，出現(xiàn) BACT不排除是上述 WBC母液中含有所致。結(jié)果見表1。

2.2 WBC-RBC-YLC混合尿的檢測(cè) 當(dāng)混合尿中各成分濃度較低時(shí)，真菌主要對(duì) RBC計(jì)數(shù)有干擾，在理論值≥500個(gè)/μl濃度組中，YLC對(duì) WBC計(jì)數(shù)有干擾，使 WBC計(jì)數(shù)假性升高，且在理論值1 000個(gè) /μl和 1 333個(gè) /μl(因各成分母液為 4 000個(gè)/μl，三者混合時(shí)最高濃度為 1 333個(gè) /μl)兩組中，均出現(xiàn)真菌計(jì)數(shù)為 0個(gè)/μl。結(jié)果見表2。

表1 WBC-RBC混合尿中各成分比較(個(gè) /μl，±s)

表1 WBC-RBC混合尿中各成分比較(個(gè) /μl，±s)

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表2 WBC-RBC-YLC混合尿標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果(個(gè) /μl，±s)

表2 WBC-RBC-YLC混合尿標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果(個(gè) /μl，±s)

理論值 WBC RBC YLC BACT 50 44.45±1.18 83.30±3.25 20.88±1.55 18.34±3.52 100 92.60±2.39 152.72±4.64 42.72±4.74 35.64±4.82 200 180.62±7.05 312.28±10.08 64.34± 3.37 52.64±8.65 500 528.70±5.38 743.38±15.98 154.48±11.24 121.02±10.88 1 000 1 054.36±15.64 1 470.18±20.82 0 227.32±18.56 1 333 1 336.46±19.60 1 835.34±29.02 0 269.65±20.45

3 討論

UF-1000i全自動(dòng)尿沉渣分析儀利用流式細(xì)胞和電阻抗分析的原理，對(duì)尿中各有形成分進(jìn)行熒光染色后，檢測(cè)其熒光強(qiáng)度信號(hào)，從而區(qū)分各有形成分并計(jì)數(shù)[1]。但尿中有形成分復(fù)雜多變，不同成分可有相似之處，故其計(jì)數(shù)可受干擾。真菌，特別是酵母樣菌，其體積大小和紅細(xì)胞相似，紅細(xì)胞無細(xì)胞核和線粒體呈低熒光強(qiáng)度，而真菌具有高熒光強(qiáng)度的RNA和 DNA，但散射光強(qiáng)度與紅、白細(xì)胞相似，故其散點(diǎn)分布在紅、白細(xì)胞之間的區(qū)域，常和紅細(xì)胞散點(diǎn)有交叉重疊。

本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，真菌對(duì)白細(xì)胞計(jì)數(shù)的干擾可分為 2方面:①當(dāng)尿液中只含有真菌時(shí)，儀器可將真菌誤計(jì)為“白細(xì)胞”和“紅細(xì)胞”，不同濃度的純真菌尿均可出現(xiàn)此現(xiàn)象，甚至將真菌誤計(jì)為“0個(gè) /μl”，造成真菌的假陰性和白細(xì)胞的假陽性出現(xiàn)。儀器的分類、計(jì)數(shù)明顯與標(biāo)本中的成分不符。②當(dāng)真菌尿液標(biāo)本中同時(shí)含有白細(xì)胞或紅、白細(xì)胞，在白、紅細(xì)胞≤200個(gè) /μl，即白細(xì)胞濃度較低時(shí)，儀器對(duì)白細(xì)胞的識(shí)別和計(jì)數(shù)準(zhǔn)確無誤，而且不隨著真菌濃度的升高而出現(xiàn)白細(xì)胞計(jì)數(shù)的假性升高，儀器此時(shí)主要是在對(duì)紅細(xì)胞的計(jì)數(shù)出現(xiàn)錯(cuò)誤。當(dāng)白細(xì)胞和真菌的濃度≥500個(gè)/μl，即白細(xì)胞濃度較高時(shí)，真菌對(duì)混合尿中白細(xì)胞計(jì)數(shù)有干擾，造成其假性升高，故尿中有形成分組成和濃度對(duì)白細(xì)胞造成的干擾是不同的。

無論是純真菌尿或含紅、白細(xì)胞的真菌混合尿，均可出現(xiàn)對(duì)真菌計(jì)數(shù)為 0個(gè)/μl，而只計(jì)數(shù)為“紅細(xì)胞”和“白細(xì)胞”的情況，且可隨著尿中成分濃度的升高出現(xiàn)次數(shù)增加，造成真菌計(jì)數(shù)的假陰性，這可能與儀器在檢測(cè)時(shí)真菌的熒光染色失敗或超出儀器的檢測(cè)范圍有關(guān)，確切原因有待進(jìn)一步探討。

本實(shí)驗(yàn)不采用靜脈血中的白細(xì)胞制備母液，是因?yàn)殪o脈血經(jīng)離心后取得的白細(xì)胞層中往往含多少不等的紅細(xì)胞和大量的血小板，且經(jīng)離心后尚具活性的白細(xì)胞相互黏附成團(tuán)，經(jīng)顯微鏡檢查，只有少數(shù)白細(xì)胞是單個(gè)存在，且其中大量的血小板也極可能對(duì)尿沉渣的檢測(cè)造成干擾。膿尿中雖然有大量的白細(xì)胞，但通常同時(shí)有大量的細(xì)菌存在，為避免其對(duì)紅細(xì)胞或白細(xì)胞造成干擾，本實(shí)驗(yàn)取化膿性腦膜炎患者新鮮腦脊液，鏡檢細(xì)胞以中性粒細(xì)胞為主，偶見革蘭陰性雙球菌，故經(jīng)低速離心洗滌，制備白細(xì)胞母液。雖然表1中細(xì)菌的計(jì)數(shù)與白細(xì)胞計(jì)數(shù)呈正的直線相關(guān)，但其數(shù)量極低，對(duì)儀器檢測(cè)紅、白細(xì)胞無影響[2，3]。

綜上所述，對(duì) UF-1000i尿沉渣分析儀的檢測(cè)結(jié)果，應(yīng)從其有形成分的測(cè)量值和散點(diǎn)圖、直方圖是否相對(duì)應(yīng)來綜合判斷其結(jié)果的可靠性。雖然UF-1000i提供白細(xì)胞相關(guān)檢測(cè)參數(shù)不多，但當(dāng)儀器出現(xiàn)報(bào)警提示，或雖無報(bào)警提示但散點(diǎn)圖上特定位置出現(xiàn)異常散點(diǎn)時(shí)，都要對(duì)標(biāo)本進(jìn)行人工鏡檢復(fù)查，確保尿沉渣結(jié)果的準(zhǔn)確性，避免對(duì)臨床的診治工作造成干擾。

[1]熊立凡，李樹仁.臨床檢驗(yàn)基礎(chǔ)[M].3版.北京:人民衛(wèi)生出版社，2005:191-193.

[2]黃松音，黃雪瓊，謝文鋒，等.菌尿?qū)煞N全自動(dòng)尿沉渣分析儀檢測(cè)尿紅細(xì)胞的影響[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2010，7(14):1440-1444.

[3]陳忠，鄒曉月，袁立新.UF-100尿沉渣分析儀和干化學(xué)檢測(cè)尿中紅細(xì)胞和白細(xì)胞及管型的干擾因素分析[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)，2008，12(4):534-537.