HPLC法測(cè)定鹽酸二甲雙胍緩釋片中鹽酸二甲雙胍的含量

李 藝 ，王 紅 ，張良珂，趙春景，張景勍#.重慶醫(yī)科大學(xué)高校藥物工程研究中心和生物化學(xué)與分子藥理重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，重慶市 40006；.重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院，重慶市 40000）

鹽酸二甲雙胍為雙胍類降糖藥，具有提高2型糖尿病患者的血糖耐受性，降低基礎(chǔ)和餐后血糖的作用[1]，是飲食和運(yùn)動(dòng)不能控制的2型糖尿病患者的首選處方藥物，也是國家基本藥物目錄中收載的品種。鹽酸二甲雙胍除降低血糖外，還具有降低甘油三酯、膽固醇、極低密度脂蛋白，增加纖維蛋白溶解的作用，可預(yù)防及減少糖尿病的并發(fā)癥，利于糖尿病的長期治療[2]。2010年版《中國藥典》（二部）[3]中鹽酸二甲雙胍原料藥和片劑均采用紫外分光光度法測(cè)定其含量，筆者則嘗試采用高效液相色譜（HPLC）法測(cè)定鹽酸二甲雙胍緩釋片中二甲雙胍的含量。

1 儀器與試藥

LC-2010A HT HPLC儀（日本島津公司）；pHS-3C型pH測(cè)定儀（上海精科儀器有限公司）；AB204-E分析電子天秤（瑞士Mettler Toledo儀器公司）；KQ2200超聲清洗器（昆山市超聲波儀器有限公司）。

鹽酸二甲雙胍對(duì)照品（天津中新藥業(yè)有限公司）；二甲雙胍緩釋片（海南海力制藥有限公司，批號(hào)：090502、100801、100102）；乙腈、庚烷磺酸鈉為色譜純，試驗(yàn)用水為超純水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Hypersil ODS2（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：0.05%庚烷磺酸鈉溶液（用磷酸溶液調(diào)節(jié)pH至4.0）-乙腈（84∶16）；檢測(cè)波長：233 nm；流速：1.0 mL·min－1；進(jìn)樣量：20 μL；柱溫：30℃。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備 精密稱量干燥至恒重的鹽酸二甲雙胍對(duì)照品10.70 mg，加流動(dòng)相溶解后，轉(zhuǎn)移至10 mL容量瓶中，定容。精密量取上述溶液1.0 mL，置于100 mL容量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，即得濃度為10.70 μg·mL－1的貯備液，臨用時(shí)用流動(dòng)相稀釋。

2.2.2 樣品溶液的制備 取二甲雙胍緩釋片20片，精密稱定，研細(xì)，精密稱取細(xì)分適量（約含鹽酸二甲雙胍5.25 mg），加流動(dòng)相溶解后，轉(zhuǎn)移至1000 mL容量瓶中，定容，再用0.22 μm微孔濾膜過濾，即得。

2.2.3 空白溶液的制備 另按處方比例制備不含鹽酸二甲雙胍的空白樣品，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制成空白溶液。

2.3 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

分別精密吸取“2.2.1，2.2.2，2.2.3”項(xiàng)下溶液各20 μL，注入HPLC儀中，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析，記錄色譜圖。結(jié)果，樣品溶液在與對(duì)照品溶液相同位置有吸收峰，而輔料對(duì)被測(cè)成分無干擾。色譜見圖1。

2.4 線性關(guān)系考察

圖1 高效液相色譜圖A.空白 ；B.樣品 ；C.對(duì)照品；1.鹽酸二甲雙胍（tR＝7.6 min）Fig 1 HPLC chromatogramsA.blank；B.sample；C.reference substance；1.metformin hydrochloride（tR＝7.6 min）

精密量取“2.2.1”項(xiàng)下貯備液0.1、0.5、2.5、5.0 mL，置于10 mL容量瓶中，并用流動(dòng)相稀釋至刻度。取上述溶液和貯備液20 μL，注入HPLC儀中，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析，記錄峰面積。以峰面積（A）對(duì)濃度（C，μg·mL－1）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得線性回歸方程A＝94291C－35840（r＝0.9997）。結(jié)果表明，鹽酸二甲雙胍檢測(cè)濃度在0.11～10.70 μg·mL－1范圍內(nèi)與峰面積積分值線性關(guān)系良好。

2.5 精密度試驗(yàn)

取鹽酸二甲雙胍對(duì)照品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件分別連續(xù)進(jìn)樣5次，記錄峰面積。結(jié)果，RSD＝0.67%，表明儀器精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一批號(hào)樣品溶液，分別放置0、2、4、8、12、24 h后進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。結(jié)果，RSD＝1.50%，表明樣品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好，詳見表1。

表1 穩(wěn)定性試驗(yàn)（n＝3）Tab 1 Results of stability tests（n＝3）

2.7 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批號(hào)樣品溶液5份，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，記錄峰面積，計(jì)算含量。結(jié)果，RSD＝0.75%，說明重復(fù)性良好。

2.8 加樣回收率試驗(yàn)

精密稱取已知含量的同批樣品細(xì)粉適量，加入流動(dòng)相溶解后，轉(zhuǎn)移至100 mL容量瓶中，用流動(dòng)相稀釋并定容至刻度，用0.22 μm微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液作為樣品加樣回收率貯備液。取樣品加樣回收率貯備液1 mL，分別置于9個(gè)10 mL容量瓶中，并分別加入鹽酸二甲雙胍對(duì)照品溶液3、4、5 mL各3份，用流動(dòng)相稀釋并定容至刻度。按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積并計(jì)算回收率，結(jié)果見表2。

2.9 樣品含量測(cè)定

取3批樣品各20片，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備成樣品溶液，精密量取20 μL，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，并計(jì)算樣品中鹽酸二甲雙胍含量。測(cè)得3批樣品中主藥含量為每片524.83、524.96、524.76 mg，標(biāo)示含量為 99.95%、100.13%、99.87%，RSD分別為1.05%、0.37%、0.52%。

表2 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果（n＝9）Tab 2 Results of recovery tests（n＝9）

3 討論

取鹽酸二甲雙胍對(duì)照溶液在200～400 nm波長處掃描，發(fā)現(xiàn)在233 nm波長處有最大吸收，所以選233 nm為檢測(cè)波長。本試驗(yàn)考察了乙腈-庚烷磺酸鈉溶液、乙腈-磷酸系統(tǒng)、乙腈-磷酸鹽緩沖系統(tǒng)等不同流動(dòng)相，結(jié)果發(fā)現(xiàn)以0.05%庚烷磺酸鈉溶液（用磷酸溶液調(diào)節(jié)pH至4.0）-乙腈（84∶16）為最優(yōu)，柱效高，保留時(shí)間適中[4～8]。

綜上所述，本試驗(yàn)采用HPLC法測(cè)定鹽酸二甲雙胍緩釋片中鹽酸二甲雙胍的含量，與紫外分光光度法比較[9]，測(cè)定結(jié)果更準(zhǔn)確可靠，重復(fù)性好，可用于鹽酸二甲雙胍緩釋片的質(zhì)量控制。

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