不同來(lái)源白英乙醇提取物抗腫瘤活性比較

宋 敏，王翔林，孫立新

白英系茄科植物白英(Solanum lyratum Thunb.)的干燥全草，性味苦、辛、微寒，歸肝、膽經(jīng)，多產(chǎn)于江蘇、浙江、江西，有清熱解毒、祛風(fēng)化痰、利濕退黃、抗癌的功能。前期研究結(jié)果表明［1-2］，白英乙醇提取物對(duì) Hela、SGC-7901、Bel-7402等多種腫瘤細(xì)胞有增殖抑制作用，并對(duì)提取工藝進(jìn)行了優(yōu)化［3］。有關(guān)不同來(lái)源白英藥材抗腫瘤活性比較尚未見(jiàn)報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)在前期工作的基礎(chǔ)上，用優(yōu)化提取工藝對(duì)不同來(lái)源白英藥材進(jìn)行提取，并對(duì)其乙醇提取物進(jìn)行抗腫瘤活性比較，為白英藥材的應(yīng)用提供一定依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)儀器和材料

1.1 儀器與試劑 MCO-18AIC型二氧化碳培養(yǎng)箱(日本三洋);BCN-1360B型生物潔凈工作臺(tái)(北京東聯(lián)哈爾儀器制造有限公司);SPECTRA MAX plus型酶標(biāo)儀(Molecular Devices公司);RPMI1640(GIBCO invitregen corporation Lot.No.1285082);胎牛血清(天津TBD公司Lot.No.0701-3100);二甲基亞砜(天津市博迪化工有限公司);MTT［溴化-3-(4，5-二甲基-2-噻唑基)-2，5-二苯基四氮唑］(美國(guó)Sigma)。

1.2 藥材 24個(gè)來(lái)源白英飲片由沈陽(yáng)藥科大學(xué)孫啟時(shí)教授鑒定，見(jiàn)表1。

表1 白英飲片來(lái)源

1.3 細(xì)胞株 人宮頸癌Hela細(xì)胞為貼壁細(xì)胞，由本實(shí)驗(yàn)室傳代保種。

2 方法

2.1 白英藥材的提取及試藥的配制 分別稱取24個(gè)來(lái)源白英藥材各50 g，用75%乙醇按藥材溶劑比1∶8浸泡過(guò)夜，次日回流提取3次，每次1 h，過(guò)濾除去藥渣，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)得乙醇浸膏。

加藥前用PBS將浸膏配成相當(dāng)于原藥材1.2 g/mL藥液后，再用RPMI-1640培養(yǎng)液稀釋為所需濃度:48、24、12、6 mg/mL(即終濃度相當(dāng)于原藥材的量:24、12、6、3 mg/mL)。

2.2 Hela細(xì)胞系培養(yǎng) 以RPMI-1640培養(yǎng)基作為基礎(chǔ)，配制成內(nèi)含10%FBS、100 U/mL青霉素和100 μg/mL鏈霉素的細(xì)胞培養(yǎng)液。在濃度為5%CO2的37℃培養(yǎng)箱中傳代培養(yǎng)。待細(xì)胞生長(zhǎng)達(dá)到對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期即可用于實(shí)驗(yàn)。

2.3 體外增殖抑制實(shí)驗(yàn) 取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期Hela細(xì)胞，以4×104cells/mL密度接種于96孔培養(yǎng)板中，每孔100 μL。在濃度為5%CO2的37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h后加藥，給藥組設(shè) 24、12、6、3 mg/mL 4個(gè)劑量(廣西柳州產(chǎn)地給藥劑量為6、3、1.5、0.75 mg/mL)，陽(yáng)性對(duì)照藥 5-Fu 設(shè) 50、10、2、0.4 μg/mL 4個(gè)劑量，同時(shí)設(shè)空白組及陰性對(duì)照組，每組3復(fù)孔，每孔加藥100 μL。于37℃、5%CO2、飽濕條件下培養(yǎng)48 h，除去培養(yǎng)液及藥液，每孔加5 g/L MTT 10 μL 和培養(yǎng)液 100 μL，繼續(xù)培養(yǎng)4 h，除去培養(yǎng)液及MTT，每孔加DMSO 150 μL，微型振蕩器振蕩10 min，用酶標(biāo)儀在λ492nm下測(cè)OD值，計(jì)算抑制率、IC50值。

生長(zhǎng)抑制率%=〔(對(duì)照組平均OD值-用藥組平均OD值)/(對(duì)照組平均OD值-空白組平均OD值)〕×100%

3 結(jié)果

不同來(lái)源白英乙醇提取物出膏率及其對(duì)Hela細(xì)胞增殖抑制作用結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 不同來(lái)源白英乙醇提取物出膏率及其對(duì)Hela細(xì)胞增殖抑制率(±s，n=3)

表2 不同來(lái)源白英乙醇提取物出膏率及其對(duì)Hela細(xì)胞增殖抑制率(±s，n=3)

來(lái)源編號(hào) 出膏率(%)濃度(mg/mL)抑制率(%)IC50(mg/mL)1 15.66 6 90.05±4.79 1.91±0.16 3 80.28±1.99 1.5 26.13±5.21 0.75 16.02±4.77 2 10.54 24 93.39±1.13 4.51±0.16 12 92.79±1.06 6 61.42±4.02 3 27.72±2.84

來(lái)源編號(hào) 出膏率(%)濃度(mg/mL)抑制率(%)IC50(mg/mL)3 13.55 24 93.72±3.12 5.87±0.10 12 87.31±0.12 6 46.99±0.72 3 19.02±0.89 4 14.25 24 99.00±0.22 7.05±0.12 12 78.38±2.68 6 31.43±0.16 3 7.09±1.13 5 9.12 24 96.55±1.86 8.99±0.99 12 57.39±3.89 6 17.63±2.97 3 2.85±0.92 6 13.43 24 94.12±2.41 10.10±0.89 12 44.81±6.04 6 14.33±3.61 3 7.88±5.79 7 10.40 24 94.40±0.16 11.60±1.67 12 40.16±0.87 6 12.99±2.57 3 7.34±3.34 8 11.61 24 94.79±0.74 12.13±1.71 12 33.59±7.18 6 6.62±5.13 3 4.33±1.46 9 9.75 24 95.89±1.49 12.23±0.80 12 41.27±0.34 6 9.05±1.88 3 －0.65±0.55 10 7.20 24 82.01±6.28 13.33±0.70 12 55.82±9.78 6 20.11±2.89 3 －6.37±1.91 11 9.75 24 76.20±1.93 13.53±3.25 12 32.96±1.34 6 25.18±8.44 3 22.95±5.94 12 12.41 24 93.87±2.27 13.94±2.14 12 28.78±7.85 6 5.06±3.73 3 3.47±0.65 13 7.08 24 94.51±2.65 14.46±0.75 12 20.98±0.23 6 4.43±0.86 3 －1.72±0.11 14 13.77 24 92.94±1.05 14.75±2.24 12 23.46±3.66 6 4.84±2.79 3 －2.72±2.14

來(lái)源編號(hào) 出膏率(%)濃度(mg/mL)抑制率(%)IC50(mg/mL)15 13.12 24 73.40±0.42 14.83±0.20 12 40.55±0.42 6 12.23±0.42 3 0.85±0.82 16 11.22 24 79.96±4.32 15.64±2.05 12 33.47±4.25 6 6.43±4.58 3 －7.42±4.04 17 6.40 24 77.15±3.12 16.41±0.88 12 23.53±6.19 6 4.35±3.15 3 －1.30±0.03 18 15.60 24 94.44±0.34 17.28±0.81 12 5.50±4.94 6 0.61±2.02 3 －6.01±1.02 19 12.40 24 82.58±4.53 17.68±0.67 12 20.33±5.91 6 0.65±3.15 3 －4.02±0.21 20 9.60 24 74.65±6.60 17.87±0.67 12 32.36±3.97 6 1.09±0.10 3 －6.48±1.75 21 10.44 24 67.53±1.14 19.44±0.20 12 11.86±0.44 6 0.27±0.37 3 －3.26±0.62 22 7.22 24 51.00±1.20 22.02±0.69 12 5.94±2.81 6 0.07±4.35 3 －9.07±0.97 23 9.03 24 69.73±2.10 22.63±3.44 12 18.89±6.60 6 1.57±0.43 3 1.03±0.05

注:負(fù)值計(jì)算IC50時(shí)舍去

4 討論

4.1 實(shí)驗(yàn)所用24個(gè)來(lái)源白英藥材基本涵蓋了全國(guó)各產(chǎn)地，平均出膏率為10.81%，廣西柳州、浙江、內(nèi)蒙古產(chǎn)地出膏率較高，廣東佛山產(chǎn)地出膏率最低，北方產(chǎn)地與南方產(chǎn)地并無(wú)明顯差異。

4.2 不同產(chǎn)地白英乙醇提取物IC50值在1.91～24.26 mg/mL范圍內(nèi)，存在一定差異。廣西柳州產(chǎn)地抗腫瘤活性明顯比其他產(chǎn)地好，浙江寧波產(chǎn)地次之，廣東佛山產(chǎn)地最差。廣西兩個(gè)來(lái)源白英藥材出膏率、抗腫瘤活性差異較大，推測(cè)可能因采收季節(jié)、飲片制作工藝等原因所致。有報(bào)道江浙一帶白英為常用藥?？沙醪酵茰y(cè)出，江浙產(chǎn)地的白英抗腫瘤活性成分含量較高。

4.3 將出膏率與抗腫瘤活性結(jié)合看，廣西柳州、浙江寧波、內(nèi)蒙古、湖北武漢等產(chǎn)地白英藥材出膏率較高，抗腫瘤活性亦較好。安徽、山東青島等產(chǎn)地白英藥材出膏率雖高，但抗腫瘤活性偏低。因此，白英藥材出膏率的高低與抗腫瘤活性好壞無(wú)必然聯(lián)系。

［1］ 韋星，李朝敢，農(nóng)蒿，等.白英提取液對(duì)Hela細(xì)胞凋亡及P53和Bcl-2蛋白表達(dá)的影響［J］.右江民族醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2006(5):715-716.

［2］ 單長(zhǎng)民，胡娟娟，杜冠華.白英提取物誘導(dǎo)人肝癌BEL－7402細(xì)胞凋亡作用［J］.中國(guó)臨床藥理學(xué)與治療學(xué)，2001，6(3):200-203.

［3］ 韓重，黃霽，何珉，等.白英抗腫瘤成分提取工藝的研究［J］.中草藥，2006，37(10):1500-1501.