雞新城疫不同弱毒株毒力及免疫原性研究

肖長賞，凌紅麗，韓宏超，馬鳳燕，王 雷，曾群平

（1.青島寶依特生物制藥有限公司，山東 青島 266114；2.黑龍江省動物衛(wèi)生監(jiān)督所，黑龍江 哈爾濱 150069）

自1926年在爪哇發(fā)現(xiàn)新城疫以來[1-3]，Alexander[4]認(rèn)為出現(xiàn)三次大規(guī)模流行，給養(yǎng)禽業(yè)帶來了巨大的損失。目前多數(shù)國家采用弱毒疫苗和滅活疫苗[5]免疫預(yù)防作為防制新城疫的主要措施。隨著養(yǎng)殖水平和疫病防制技術(shù)的提高以及普及疫苗免疫接種，我國也少見有典型性新城疫暴發(fā)，代之以非典型性、溫和性新城疫[6-7]。由于疫苗的種類、免疫途徑、雞群的健康狀況等因素，免疫雞群常出現(xiàn)應(yīng)激等不良反應(yīng)，不僅降低飼料報酬，誘發(fā)侵害呼吸道的疾病，而且增加死淘率和藥物費(fèi)用。因此疫苗免疫的同時，加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，保持雞群健康，可減輕應(yīng)激，有效降低疾病的發(fā)生。選擇合適首免疫苗和日齡，亦可減輕不良反應(yīng)。傳統(tǒng)新城疫弱毒疫苗有Ⅱ系（Hitchner B1株）、Ⅲ系（F株）、Ⅳ系（La Sota株、Clone30株和N79株）等，雖然沒有致病力，但仍有殘留毒力，可致發(fā)輕微呼吸道癥狀等應(yīng)激反應(yīng)。如新城疫Ⅳ系噴霧免疫時，應(yīng)激較強(qiáng)，免疫雞群2～4天可能出現(xiàn)甩頭、流淚、打噴嚏、呼嚕等，有時出現(xiàn)精神不振、采食減少等現(xiàn)象。多年來，我公司密切關(guān)注市場，緊密結(jié)合國內(nèi)養(yǎng)禽業(yè)生產(chǎn)需要，研究新城疫不同弱毒株的毒力、免疫原性及免疫攻毒保護(hù)試驗，為生產(chǎn)提供借鑒。

1 材料和方法

1.1 雞新城疫弱毒B株、Queensland V4株、Ulster 2C 株、Hitchner B1株、F株、VG/GA株、La Sota株、Clone30株、N79株由青島寶依特生物制藥有限公司實驗室提供。

1.2 SPF種蛋購自北京梅里亞維通實驗動物技術(shù)有限公司，10日齡SPF雞胚及30日齡SPF雞青島寶依特生物制藥有限公司動物房提供。

1.3 1%雞紅細(xì)胞懸液由青島寶依特生物制藥有限公司實驗室配制。

1.4 病毒繁殖 取NDV B等9株分別接種10日齡SPF雞胚10枚，36～37℃孵育96 h，收獲胚液并檢測HA效價及EID50。

1.5 毒力試驗

1.5.1 對雞胚的毒力 按文獻(xiàn)方法[8]將NDV B等9株新鮮胚毒分別用滅菌生理鹽水作100倍稀釋，尿囊腔內(nèi)接種10日齡SPF雞胚10個，每胚0.1 mL，置36～37℃繼續(xù)孵育觀察120 h，記錄雞胚死亡情況。

1.5.2 對1日齡雛雞腦內(nèi)致病指數(shù)（ICPI） 按文獻(xiàn)方法[8]取NDV B等9株新鮮胚毒分別腦內(nèi)接種1日齡SPF雛雞，測定其1日齡腦內(nèi)致病指數(shù)。

1.5.3 對雞胚最小致死量的平均死亡時間（MDT/MLD）按文獻(xiàn)方法[8]取NDV B等9株新鮮胚毒分別接種10日齡SPF雞胚，測定NDV B等9株的雞胚最小致死量平均死亡時間。

1.5.4 對6周齡雞的靜脈致病指數(shù)（IVPI） 按文獻(xiàn)方法[8]取NDV B等9株的新鮮胚毒分別靜脈接種6周齡SPF雛雞，測定其的靜脈致病指數(shù)。

1.6 免疫原性 將NDV B等9株胚毒分別稀釋成病毒含量為 100 EID50、500 EID50、1000EID50，滴鼻 /點(diǎn)眼免疫30日齡SPF雞，每只0.03 mL，免疫10日后分別翅翼內(nèi)側(cè)肌肉注射攻擊新城疫強(qiáng)毒北京株1 mL（含 CVCC AV1611 株 105.0ELD50），飼養(yǎng)觀察 10日，記錄雞只發(fā)病死亡情況。

2 結(jié)果

2.1 病毒繁殖 不同新城疫弱毒株均可在SPF雞胚中很好的增殖，病毒含量均大于108.38EID50/0.1 mL，HA效價均在9log2以上（表1）。

表1 不同新城疫弱毒株增殖結(jié)果

2.2 對雞胚的毒力 NDV B株、V4株、Ulster 2C株對雞胚的毒力較低，基本不致死雞胚，120h活胚明顯萎縮48～120h；Hitchner B1株及F株致死的雞胚有明顯充血、出血病痕，120h活胚明顯萎縮；La Sota株、Clone30株、N79株及VG/GA株120h內(nèi)雞胚全部死亡，雞胚有明顯充血、出血病痕（表2）。

2.3 對1日齡雛雞腦內(nèi)致病指數(shù)（ICPI）結(jié)果顯示B株、V4株和Ulster 2C株的ICPI為0；Hitchner B1株和 F株的 ICPI為 0.213～0.238；LaSota株、Clone30 株、N79株、VG/GA株的 ICPI為0.3～0.4（表 2）。

2.4 對雞胚最小致死量的平均死亡時間（MDT/MLD）結(jié)果顯示B株、V4株和Ulster 2C株的MDT大于150h；Hitchner B1株、F 株、La Sota株、Clone30株、N79株和VG/GA株的MDT小于120h（表2）。

2.5 對6周齡雞的靜脈致病指數(shù)（IVPI） 結(jié)果顯示不同新城疫弱毒株IVPI均為0（表2）。

表2 新城疫弱毒不同毒株毒力試驗結(jié)果

2.6 免疫原性 結(jié)果顯示新城疫不同弱毒株不同免疫劑量的攻毒保護(hù)不同，其中NDV B株、La Sota株、Clone30株、N79株、Ulster 2C株和VG/GA株免疫劑量為1000 EID50的試驗組攻毒雞10/15以上保護(hù)；NDV B株免疫原性較好，全部保護(hù)；NDV F株免疫原性最弱，僅6/15保護(hù)（表3）。

表3 雞新城不同弱毒株免疫原性試驗結(jié)果

3 討論

3.1 不同新城疫弱毒株均較好適應(yīng)雞胚培養(yǎng)，增殖滴度較高。因雞胚來源充足，培養(yǎng)條件和設(shè)備簡單，選擇合適日齡的雞胚用于新城疫病毒增殖可為新城疫抗原生產(chǎn)提供可靠保證。

3.2 新城疫弱毒毒力較弱，有的毒株則完全沒有毒力，作為疫苗毒株對雞只均安全。但不同弱毒株毒力略有差異，其中NDV B株、V4株和Ulster 2C株適合用于低日齡雛雞首免，而 NDV La Sota株、Clone30株和N79株7日齡以內(nèi)的雛雞噴霧免疫時，免疫雞群2～4天可能出現(xiàn)甩頭、流淚、打噴嚏、呼嚕等應(yīng)激反應(yīng)，尤其是NDV Lasota株不建議用于10日齡以內(nèi)雞群的免疫。因此，新城疫首免時應(yīng)根據(jù)雛雞日齡選擇合適疫苗進(jìn)行免疫。

3.3 新城疫不同弱毒株免疫攻毒試驗結(jié)果表明，NDV B株免疫原性最好，免疫500EID50雞只11/15抵抗北京株強(qiáng)毒攻擊，1000EID50免疫雞只可以全部抵抗北京株強(qiáng)毒攻擊。Bebsink等[9]獲得的無毒新城疫毒株免疫雛雞產(chǎn)生高的抗體滴度一致。本試驗中NDV V4株免疫原性與Foster等[10]、姜新等[11]和江杰元等[12]報道不一致，可能是免疫劑量不一致，也可能NDV V4株的原因，蘇承宗等[13]免疫雞產(chǎn)生杭體較晚，在免疫后1.5～2個月才能達(dá)到高峰。

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