膠體金免疫層析法檢測(cè)心肌標(biāo)志物在診斷急性心肌梗死中的應(yīng)用

劉 宇，周榮斌

急性心肌梗死 (AMI)是嚴(yán)重危及生命的心血管常見(jiàn)急危重癥，臨床上通過(guò)檢測(cè)特異性心肌損傷標(biāo)志物來(lái)早期診斷AMI。我科采用血清肌鈣蛋白Ⅰ/肌酸激酶同工酶 (CKMB)/肌紅蛋白三合一診斷試劑盒，對(duì)140例AMI患者進(jìn)行檢測(cè)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2007年4月—2010年3月北京軍區(qū)總醫(yī)院急診科患者共140例。根據(jù)2007年ACC/AHA發(fā)布的急性ST段抬高性心肌梗死指南與不穩(wěn)定心絞痛與非ST段抬高性心肌梗死指南，所有研究對(duì)象均證實(shí)為AMI;且抽血時(shí)間選擇在發(fā)病4 h后 (因發(fā)病時(shí)間＜4 h心肌標(biāo)志物未在時(shí)間窗內(nèi)而導(dǎo)致假陰性，不在本研究范圍內(nèi));排除慢性腎功能不全、心肌炎、急性腦血管病者。

1.2 研究方法 本試驗(yàn)采用雙盲、自身對(duì)照方法。140例確診為AMI患者在發(fā)病4 h后抽取靜脈血，以北京科衛(wèi)臨床診斷試劑有限公司 (簡(jiǎn)稱科衛(wèi)公司)研制生產(chǎn)的肌鈣蛋白Ⅰ/肌酸激酶同工酶/肌紅蛋白三合一診斷試劑盒 (膠體金法，批號(hào):200808001)作為試驗(yàn)組，以杭州艾康生物技術(shù)有限公司 (簡(jiǎn)稱艾康公司)生產(chǎn)的肌鈣蛋白Ⅰ/肌酸激酶同工酶/肌紅蛋白診斷試劑盒(膠體金法，批號(hào):200809021)作為對(duì)照組，分別對(duì)血液標(biāo)本進(jìn)行測(cè)試并比較。

所有待檢測(cè)血液標(biāo)本嚴(yán)格按待考核試劑盒和對(duì)比試劑盒的使用說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。在操作時(shí)必須在說(shuō)明書(shū)規(guī)定的實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行比較，即在同一檢測(cè)室、同一儀器設(shè)備、同一檢測(cè)人員按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。對(duì)比試劑和待考核試劑分別按各自說(shuō)明書(shū)進(jìn)行平行檢測(cè)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 所有數(shù)據(jù)輸入到EXCEL表中，分別統(tǒng)計(jì)兩種試劑盒的陰性和陽(yáng)性樣本數(shù)，列成2×2列聯(lián)表，計(jì)算兩種試劑盒的敏感性、特異性、誤診率、漏診率。采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，采用χ2檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

2 結(jié)果

本組140例AMI患者中115例為ST段抬高性心肌梗死，25例為非ST段抬高性心肌梗死。試驗(yàn)組和對(duì)照組檢測(cè)的肌鈣蛋白Ⅰ、肌紅蛋白、CK－MB結(jié)果間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P＞0.05，見(jiàn)表1)。根據(jù)表2結(jié)果，試驗(yàn)試劑 (科衛(wèi)公司)三合一試劑盒與對(duì)比試劑 (艾康公司)肌鈣蛋白Ⅰ/CK－MB/肌紅蛋白三合一診斷試劑盒進(jìn)行標(biāo)本比對(duì)，試驗(yàn)試劑肌鈣蛋白Ⅰ、CK－MB、肌紅蛋白敏感度與特異性均大于90%(見(jiàn)表3)。

表1 兩種試劑檢測(cè)心肌標(biāo)志物結(jié)果比較Table 1 Comparison of cardiac markers between the two groups

表2 兩組試劑檢測(cè)肌紅蛋白、肌鈣蛋白Ⅰ、CK－MB結(jié)果Table 2 Results about Myo，TnI and CK－MB between two groups

表3 試驗(yàn)試劑敏感度與特異度 (%)Table 3 Sensitivity and specificity of trial group

3 討論

心肌肌鈣蛋白Ⅰ、CK－MB和肌紅蛋白是目前診斷和排除AMI應(yīng)用最多的血生化標(biāo)志物，在發(fā)生心肌梗死后，這3種標(biāo)志物的釋放時(shí)間和t1/2不同，因此可以檢測(cè)這三項(xiàng)互補(bǔ)的指標(biāo)來(lái)診斷AMI，現(xiàn)已成為診斷AMI的有效工具。

歐洲心臟學(xué)會(huì) (European Society of Cardiology，ESC)和美國(guó)心臟學(xué)會(huì) (American College of Cardiology，ACC)于2000年重新定義了AMI的標(biāo)準(zhǔn)［1］。修改以后的標(biāo)準(zhǔn)是:(1)心肌壞死的生物化學(xué)標(biāo)志物肌鈣蛋白，呈現(xiàn)典型的升高和逐漸的下降，或者CK－MB快速升高和下降，伴隨有:a心肌缺血的癥狀;b心電圖上出現(xiàn)了病理性Q波;c心電圖改變提示缺血(ST段升高或者下降);d冠狀動(dòng)脈介入，如冠狀動(dòng)脈成形術(shù)。(2)AMI的病理診斷標(biāo)準(zhǔn)。可見(jiàn)心肌標(biāo)志物在診斷AMI的核心地位。

國(guó)內(nèi)外已有檢測(cè)心肌標(biāo)志物的試劑盒上市，單項(xiàng)檢測(cè)產(chǎn)品較多，主要采用酶聯(lián)免疫法 (ELISA)、化學(xué)發(fā)光法、金標(biāo)層析法、生物芯片等，僅少數(shù)公司產(chǎn)品采用三合一檢測(cè)法，并獲美國(guó)食品藥品管理局 (FDA)注冊(cè)。雖然檢測(cè)的試劑、方法很多，但是臨床應(yīng)用研究中發(fā)現(xiàn)，各種方法測(cè)定結(jié)果之間差異很大［2］。例如心肌肌鈣蛋白是目前發(fā)現(xiàn)的診斷心肌損傷最特異、最敏感的標(biāo)志物之一［3］，1995年美國(guó)FDA批準(zhǔn)用于臨床AMI的診斷。不同檢測(cè)方法間測(cè)定值最大可差36倍［4］，原因包括各種檢測(cè)方法采用的抗體各不相同，肌鈣蛋白Ⅰ分子內(nèi)的不同片段和不同抗原決定簇受氧化－還原反應(yīng)、磷酸化反應(yīng)或蛋白水解酶作用等而降解的影響各不相同。各生產(chǎn)廠商的肌鈣蛋白Ⅰ校準(zhǔn)品各不相同，甚至使用同一份標(biāo)定肌鈣蛋白I值的人血清進(jìn)行校準(zhǔn)也未能完全消除不同測(cè)定系統(tǒng)之間測(cè)定值的差異。為加快檢測(cè)速度，許多檢測(cè)系統(tǒng)設(shè)計(jì)采用血漿或全血標(biāo)本，抗凝劑的選用是否得當(dāng)將直接影響檢測(cè)結(jié)果。

金標(biāo)層析法以其標(biāo)本用量少、簡(jiǎn)便快速、無(wú)污染等優(yōu)點(diǎn)，已被大量試驗(yàn)證實(shí)有效、可靠［5－7］。肌鈣蛋白Ⅰ/CK－MB/肌紅蛋白三合一診斷試劑盒采用膠體金免疫層析原理，通過(guò)雙抗體夾心法快速一步檢測(cè)血清、血漿、全血中肌鈣蛋白Ⅰ/CKMB/肌紅蛋白三項(xiàng)指標(biāo)，當(dāng)血樣被滴入點(diǎn)樣孔后，紅細(xì)胞在分離系統(tǒng)中被移除。樣品中含有的相應(yīng)的待檢物即與特異抗體－染料復(fù)合物結(jié)合，移至檢測(cè)區(qū)與固定的特異抗體或親合素顯色。沒(méi)有結(jié)合的染料復(fù)合體移出檢測(cè)區(qū)域最終被陽(yáng)性對(duì)照區(qū)捕獲。該方法可用于檢測(cè)人血清、血漿、全血中的肌鈣蛋白Ⅰ、肌紅蛋白和CK－MB，適用于AMI的輔助診斷。本研究結(jié)果顯示應(yīng)用膠體金免疫層析法測(cè)定的心肌標(biāo)志物，與艾康公司同類產(chǎn)品比較，科衛(wèi)公司的試驗(yàn)試劑檢測(cè)肌鈣蛋白Ⅰ、肌紅蛋白、CK－MB的相對(duì)敏感度分別為98.4%、99.2%及97.6%，特異度分別為94.4%、90.9%及94.1%，兩組產(chǎn)品的檢測(cè)結(jié)果無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，能較好地檢測(cè)患者血樣中的肌鈣蛋白Ⅰ/CK－MB/肌紅蛋白，且操作快捷、簡(jiǎn)便，適用于臨床特別是急診科對(duì)AMI的輔助診斷。

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