HPLC法測定伸筋片中士的寧與馬錢子堿的含量

于建方，劉瑞清

(威海人生藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司，山東 威海 264205)

原標(biāo)準(zhǔn)采用薄層掃描法，測定士的寧的含量。本文參照《中國藥典》2010年版(一部)伸筋丹膠囊含量的測定方法［1］，用HPLC法測定伸筋片中士的寧的含量并增加了制劑中馬錢子堿的含量測定，對線性關(guān)系、精密度、穩(wěn)定性、重現(xiàn)性及加樣回收率等實(shí)驗(yàn)進(jìn)行了研究，分別測定了3批樣品，證明該方法準(zhǔn)確、簡便，重現(xiàn)性好。

1 儀器與試藥

日本島津SPD—10Avp型高效液相色譜儀;馬錢子堿對照品(中國藥品生物制品檢定所提供，供含量測定用，編號為110706－200505);士的寧對照品(中國藥品生物制品檢定所提供，供含量測定用，編號為110705－200306);三氯甲烷、甲醇等為色譜純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 色譜柱為Kromasil C18(4.6mm ×250mm，5μm)，流動(dòng)相為乙腈 －0.01 mol·L－1庚烷磺酸鈉與0.02 mol·L－1磷酸二氫鉀等量混合溶液(用10%磷酸調(diào)節(jié)pH值2.8)(21∶79)，檢測波長為260 nm。理論板數(shù)按士的寧峰計(jì)算應(yīng)不低于5000。

2.2 對照品溶液的制備 取馬錢子堿對照品約10mg、士的寧對照品約12mg，精密稱定，置50mL量瓶中，加三氯甲烷適量使溶解并稀釋至刻度，搖勻。精密量取上述溶液1mL，置10mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得(每1mL中含馬錢子堿 20 μg、士的寧 24 μg)。

2.3 供試品溶液的制備 取本品(除去糖衣)約2.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加氫氧化鈉試液6mL，混勻，使?jié)駶櫍胖?0min，精密加三氯甲烷50mL，密塞，稱定重量，置水浴(水溫61～62℃)中回流提取2 h，放冷，再稱定重量，用三氯甲烷補(bǔ)足減失的重量，搖勻，分取三氯甲烷提取液，用鋪有少量無水硫酸鈉的濾紙濾過，棄去初濾液，精密量取續(xù)濾液2mL，置10mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.4 線性關(guān)系的考察 精密稱取馬錢子堿對照品 14.00mg、士的寧對照品 16.00mg，置50mL量瓶中，加三氯甲烷適量使溶解并稀釋至刻度，搖勻。精密量取上述溶液1mL，置10mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。精密吸取上述對照品溶液 2.0、4.0、6.0、8.0、10.0μL，注入液相色譜儀，測得峰面積積分值。以馬錢子堿對照品的進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，峰面積積分值為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得回歸方程Y=633125X+10562，R2=0.9946;以士的寧對照品的進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，峰面積積分值為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得回歸方程 Y=1E+06X+6594.7，R2=0.9977，見表 1、表 2。

表1 馬錢子堿峰面積積分值

表2 士的寧峰面積積分值

結(jié)果表明馬錢子堿進(jìn)樣量在0.056～0.280 μg之間與峰面積積分值呈良好的線性關(guān)系;士的寧進(jìn)樣量在0.064～0.320 μg之間與峰面積積分值呈良好的線性關(guān)系。

2.5 儀器精密度實(shí)驗(yàn) 精密吸取2.2項(xiàng)下對照品溶液10μL，注入液相色譜儀，共進(jìn)樣6次，測定馬錢子堿和士的寧峰面積積分值，結(jié)果馬錢子堿峰面積RSD為0.58%，士的定峰面積RSD為0.38%，表明儀器精密度良好。

2.6 樣品穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 取批號為090102的樣品，按2.3所述方法和條件制備供試品溶液，取供試品溶液，每隔60min進(jìn)樣一次，共進(jìn)樣6次，測定馬錢子堿和士的寧峰面積積分值，RSD分別為0.65%、0.12%。表明樣品在5 h內(nèi)具有良好的穩(wěn)定性。

2.7 重現(xiàn)性考察 取本品(批號為090102)，除去糖衣，取約2.5 g，精密稱定，共取6份，按2.3所述方法和條件提取測定，結(jié)果見表3、表4。

表3 馬錢子堿重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)結(jié)果

表4 士的寧重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)結(jié)果

結(jié)果表明此方法的重現(xiàn)性良好。

2.8 加樣回收率實(shí)驗(yàn) 取本品(批號090102，含馬錢子堿0.27mg/片，士的寧 0.39mg/片)除去糖衣，取約 1.5 g，精密稱定，共取6份，分別置具塞錐形瓶中，各精密加入一定量的馬錢子堿對照品和士的寧對照品，加氫氧化鈉試液6mL，混勻，依2.3項(xiàng)所述方法和條件提取，測定，計(jì)算.結(jié)果見表5、表6。

表5 馬錢子堿加樣回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果

表6 士的寧加樣回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.9 樣品測定 取樣品，依2.3項(xiàng)所述方法和條件提取測定，分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μL，進(jìn)樣測定峰面積，計(jì)算含量。結(jié)果見圖1、圖2，表7。

圖1 對照品溶液HPLC圖譜

圖2 供試品溶液HPLC圖譜

表7 樣品測定結(jié)果(n=3)

原薄層掃描法的士的寧含量與高效液相色譜法進(jìn)行比較，結(jié)果見表8。

表8 薄層掃描法與高效液相色譜法含量測定結(jié)果比較

2.10 陰性對照 取除去馬錢子的制劑，照含量測定項(xiàng)下方法試驗(yàn)，高效液相色譜圖中，在與對照品峰相應(yīng)的位置上無色譜峰出現(xiàn)，說明陰性無干擾，見圖3。

3 討論

實(shí)驗(yàn)表明，兩種方法分別測定士的寧的含量，其結(jié)果差異不大，均在原標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定限度范圍內(nèi)，故仍按原標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定本品每片含制馬錢子以士的寧(C21H22N2O2)計(jì)，應(yīng)為0.37～0.65mg。

圖3 陰性對照品HPLC圖譜

考慮到實(shí)際生產(chǎn)中馬錢子用量及實(shí)驗(yàn)結(jié)果，本品每片含制馬錢子以馬錢子堿(C23H26NO2O4)計(jì)，應(yīng)不少于0.25mg。

［1］國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典2010年版(一部)［S］.北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:767.