電化學(xué)發(fā)光法測定乙肝表面抗原的方法學(xué)性能評價

張建榮 席向紅 郭小龍 崔 潔

(寧夏醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院醫(yī)學(xué)實驗中心 寧夏銀川 750004)

乙肝五項檢測是檢驗科常見的檢測項目，目前國內(nèi)大多應(yīng)用酶免疫(EIA)測定，然而其方法固有的缺點在一定程度上給臨床診治帶來了困難[1]。隨著近年來檢測技術(shù)的不斷發(fā)展，電化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)以其快速、簡便、無污染、自動化程度高等特點得以廣泛應(yīng)用。由于乙肝表面抗原(HBsAg)屬于定性檢測項目，因此，我們在申報 ISO15189 認可時，參照相關(guān)文獻[2，3]對Roche E－170檢測系統(tǒng)測定HBsAg進行了批內(nèi)重復(fù)性、批間重復(fù)性、臨界值驗證、陽性符合率、陰性符合率的性能驗證及評價，現(xiàn)報告如下。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來源 收集本院臨床新鮮血清標(biāo)本低、高兩個濃度水平用于批內(nèi)重復(fù)性測定，另取低、高兩個濃度水平控制品用于批間重復(fù)性測定。準(zhǔn)備臨界值+20%濃度樣本、臨界值－20%濃度樣本，用于臨界值驗證。選取本院患者血清標(biāo)本乙肝表面抗原陽性31人份;另選取本院患者，乙肝表面抗原陰性血清標(biāo)本20人份，衛(wèi)生部臨床檢驗中心的室間質(zhì)量評價(EQA)回報結(jié)果，用于陽性符合率、陰性符合率驗證。

1.2 試劑與儀器 德國Roche170全自動免疫分析儀(電化學(xué)發(fā)光法，ECLIA)及配套試劑盒、質(zhì)控品、耗材等。

1.3 結(jié)果計算 臨界值(cutoff)由陰性和陽性定標(biāo)品測定光信號值(RLU)計算得出，標(biāo)本結(jié)果用標(biāo)本光信號值 /cutoff光信號值進行報告。結(jié)果報告≥1.00 COI(cutoffindex)為陽性，＜1.00 COI為陰性(儀器自動計算以上結(jié)果)。

1.4 方法

1.4.1 批內(nèi)重復(fù)性試驗。取低、高2個濃度血清標(biāo)本進行評價試驗，連續(xù)重復(fù)測定20次，計算變異系數(shù)(CV)，結(jié)果與廠商說明書給定的參數(shù)比較，若在給定的允許范圍內(nèi)，批內(nèi)重復(fù)性性能符合要求。

1.4.2 批間重復(fù)性試驗。取低、高2個濃度水平控制品連續(xù)重復(fù)測定20天，每天1次，計算變異系數(shù)(CV)。結(jié)果與給定的允許總誤差比較，若在給定的允許范圍內(nèi)，批間重復(fù)性性能符合要求。

1.4.3 臨界值驗證。準(zhǔn)備臨界值+20%濃度樣本、臨界值－20%濃度樣本，分別重復(fù)測定20次，計算陰、陽性率。臨界值+20%濃度的標(biāo)本檢測結(jié)果陽性率≥95%，同時，臨界值－20%濃度標(biāo)本檢測結(jié)果陰性率≥95%則符合要求。

1.4.4 陽性符合率、陰性符合率評價。選取HBsAg檢測陽性和陰性的血清標(biāo)本進行檢測，檢測結(jié)果與原結(jié)果進行比較，分別計算符合率，若符合率≥95%則符合要求。

1.4.5 以2010年衛(wèi)生部臨床檢驗中心的3次感染性疾病血清標(biāo)志物A類室間質(zhì)評為標(biāo)準(zhǔn)，對每次5個標(biāo)本的HBsAg回報結(jié)果與預(yù)期結(jié)果進行符合性統(tǒng)計，計算符合率，若EQA結(jié)果符合率≥80%則符合要求。

2 結(jié)果

2.1 批內(nèi)重復(fù)性試驗 批內(nèi)CV應(yīng)≤廠商說明書給定的參數(shù)。檢測項目的CV分別為7.3%和0.6%，均小于給定的允許范圍，表明驗證的檢測系統(tǒng)批內(nèi)重復(fù)性符合要求，重復(fù)性好。結(jié)果見表1。

2.2 批間重復(fù)性試驗 批間CV應(yīng)≤1/3允許總誤差，兩個水平控制品的CV分別為9.6%和4.9%，均小于給定的允許范圍，表明驗證的檢測系統(tǒng)批間重復(fù)性符合要求，重復(fù)性好。結(jié)果見表1。

表1 乙肝HBsAg檢測的批內(nèi)重復(fù)性和批間重復(fù)性結(jié)果

2.3 臨界值驗證 臨界值+20%濃度的標(biāo)本檢測結(jié)果陽性率為100%，臨界值－20%濃度標(biāo)本檢測結(jié)果陰性率為100%，均大于判斷標(biāo)準(zhǔn)(≥95%)，檢測結(jié)果符合要求。說明試劑生產(chǎn)廠家提供的檢測項目臨界值基本可靠，在此區(qū)間內(nèi)標(biāo)本能得到穩(wěn)定的檢測結(jié)果。

2.4 陽性符合率、陰性符合率評價 HBsAg陽性符合率為100%，陰性符合率為100%，均大于判斷標(biāo)準(zhǔn)(≥95%)，檢測結(jié)果符合要求。結(jié)果見表2。

2.5 對衛(wèi)生部臨檢中心2010年的3次質(zhì)評回報結(jié)果進行統(tǒng)計，符合率為100%。結(jié)果見表2。

表2 乙肝HBsAg陽性符合率、陰性符合率的檢測結(jié)果

3 討論

HBsAg是乙肝病毒感染后最早出現(xiàn)的血清標(biāo)志物之一，因此HBsAg的檢測是診斷肝炎病毒感染的重要依據(jù)。診斷中最重要的就是高靈敏度與高特異性相結(jié)合，故檢測系統(tǒng)的性能指標(biāo)能否滿足臨床檢測的要求會影響臨床診療的效果。定性檢測性能的評估主要通過重復(fù)性研究和方法間比較來評估檢測方法的性能[3]。而Roche E－170檢測系統(tǒng)具有卓越的分析靈敏、高臨床靈敏度和特異性[4]。

定性檢測的重復(fù)性研究能夠評估檢測方法的精密度，而精密度是檢驗項目測定中最基本的性能指標(biāo)，我們檢測的批內(nèi)重復(fù)性和批間重復(fù)性的CV值均小于規(guī)定的允許范圍，性能符合要求。

定性試驗用陰、陽性符合率來評價結(jié)果的準(zhǔn)確度，我們使用2010年衛(wèi)生部臨檢中心的3次感染性疾病血清標(biāo)志物A類室間質(zhì)評回報結(jié)果進行統(tǒng)計，符合率為100%。同時我們對選取的HBsAg陽性(包括臨界弱陽性標(biāo)本)和陰性血清標(biāo)本進行檢測，陽性、陰性符合率均為100%，檢測性能符合要求，說明該檢測方法的準(zhǔn)確性較好，能夠滿足臨床診療的需求。

臨界值是指實驗結(jié)果處于陰、陽性分界點時的樣本中分析物濃度值，低于該值判斷為陰性結(jié)果，高于該值判斷為陽性結(jié)果，對于定性試驗，臨界值是一個醫(yī)學(xué)決定水平。定性試驗的臨界值直接決定了實驗結(jié)果的檢出率，因此必須對廠家提供的臨界值進行驗證。本實驗室HBsAg±20%濃度水平的樣本位于臨界值95%區(qū)間內(nèi)，結(jié)果說明試劑生產(chǎn)廠家提供的檢測項目臨界值基本準(zhǔn)確。

綜上所述，通過對HBsAg的批內(nèi)重復(fù)性、批間重復(fù)性、臨界值驗證、陽性符合率、陰性符合率的評價和分析，證實該檢測系統(tǒng)的性能卓越，具有高靈敏度和高特異性，能夠滿足臨床檢測的要求。

[1]周迎春，陳 輝，關(guān) 平，等.3種方法測定低濃度乙型肝炎病毒表面抗原效果評價[J].檢驗醫(yī)學(xué)與臨床，2007，11(4):1070 －1071

[2]魏 昊，叢玉隆.醫(yī)學(xué)實驗室質(zhì)量管理與認可指南[M].北京:中國計量出版社，2004.59 －75

[3]楊有業(yè)，張秀明.臨床檢驗方法學(xué)評價[M].北京:人民衛(wèi)生出版社，2008.296 －312

[4]Weber B.Recent developments in the diagnosis and monitoring of HBV infection and role of genetic variability of the S gene[J].Expert Rev Mol Diagn2005，5:75