瘤胃灌注大豆小肽對(duì)肉牛瘤胃發(fā)酵的影響

王文娟 萬發(fā)春 楊維仁 宋恩亮 劉曉牧 譚秀文 劉桂芬

(1.山東農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，泰安 271018;2.山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所，濟(jì)南 250100;3.山東省畜禽疫病防治與繁育重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，濟(jì)南 250100)

瘤胃灌注大豆小肽對(duì)肉牛瘤胃發(fā)酵的影響

王文娟1，3萬發(fā)春2，3楊維仁1*宋恩亮2，3劉曉牧2，3譚秀文2，3劉桂芬2，3

(1.山東農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，泰安 271018;2.山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所，濟(jì)南 250100;3.山東省畜禽疫病防治與繁育重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，濟(jì)南 250100)

本試驗(yàn)旨在探討瘤胃灌注不同水平大豆小肽對(duì)肉牛瘤胃發(fā)酵指標(biāo)和瘤胃微生物的影響。選用4頭安裝永久性瘤胃瘺管的魯西黃牛閹牛，采用4×4拉丁方試驗(yàn)設(shè)計(jì)，分別瘤胃灌注0、100、200和300 g/d的大豆小肽。采集瘤胃液，測定瘤胃發(fā)酵指標(biāo)，實(shí)時(shí)定量PCR法測定瘤胃微生物相對(duì)含量。結(jié)果表明，灌注大豆小肽對(duì)瘤胃液pH平均值無顯著影響(P＞0.05)，顯著提高了瘤胃液氨態(tài)氮(NH3-N)與微生物蛋白(MCP)平均濃度(P＜0.05);灌注大豆小肽顯著提高了瘤胃液總揮發(fā)性脂肪酸(TVFA)的濃度(P＜0.05)，與0 g/d組相比，200 g/d組和300 g/d組丙酸百分含量顯著增加(P＜0.05)，100 g/d組和200 g/d組乙酸百分含量顯著降低(P＜0.05)，300 g/d組丁酸含量顯著降低(P＜0.05);灌注大豆小肽顯著降低了乙酸/丙酸(P＜0.05);灌注小肽顯著提高了瘤胃液中溶纖維丁酸弧菌含量(P＜0.05)。可見，瘤胃灌注大豆小肽可促進(jìn)MCP的合成、提高溶纖維丁酸弧菌的含量、改善瘤胃代謝。

大豆小肽;肉牛;瘤胃發(fā)酵;瘤胃微生物

小肽可被完整吸收［1］的觀點(diǎn)提出后，肽營養(yǎng)已成為蛋白質(zhì)代謝研究較為活躍的領(lǐng)域之一。近年來，小肽在畜禽特別是單胃動(dòng)物生產(chǎn)中已得到廣泛應(yīng)用。提供非蛋白氮(NPN)對(duì)反芻動(dòng)物的營養(yǎng)有著重要意義，其中銨鹽和尿素由于成本較低被廣泛應(yīng)用，但需要注意添加量、能氮平衡與氮硫平衡等問題。與銨鹽和尿素相比，小肽更有優(yōu)勢，研究表明，小肽能促進(jìn)氨基酸的吸收，加快蛋白質(zhì)的合成［2］，提高畜禽生產(chǎn)性能［3－6］，促進(jìn)礦物質(zhì)元素的吸收利用［5－6］，提高動(dòng)物免疫力。小肽是瘤胃微生物蛋白(MCP)合成的重要底物，對(duì)微生物區(qū)系的穩(wěn)定發(fā)揮著重要的作用［8］。國內(nèi)外，小肽對(duì)動(dòng)物代謝影響的體內(nèi)［6－8］和體外試驗(yàn)［8－11］研究已較多，但未見小肽對(duì)肉牛營養(yǎng)代謝研究的報(bào)道。本試驗(yàn)利用瘺管牛研究灌注不同數(shù)量的大豆小肽對(duì)肉牛瘤胃代謝的影響，旨在豐富肉牛特別是地方良種黃牛肽的營養(yǎng)理論。

1 材料和方法

1.1 試驗(yàn)材料

大豆小肽購自山東中食都慶生物技術(shù)有限公司，其總氨基酸和肽結(jié)合氨基酸組成見表1。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物

選用4頭體重(400±10)kg、30月齡安裝有永久性瘤胃瘺管體況良好的魯西黃牛為試驗(yàn)動(dòng)物。

1.3 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

采用4×4拉丁方設(shè)計(jì)，試驗(yàn)4個(gè)處理分別為灌注0、100、200、300 g/d大豆小肽。將小肽預(yù)先溶于1 000 m L 0.9%的生理鹽水中，用4 mol/L鹽酸調(diào)節(jié)pH至6.5。試驗(yàn)預(yù)試期10 d，正試期10 d，正試期開始每天07:00通過瘤胃瘺管勻速灌注小肽。

表1 大豆小肽總氨基酸和肽結(jié)合氨基酸組成Table 1 Composition of total am ino acids and peptide-bound am ino acids in soybean small peptides mg/g

1.4 基礎(chǔ)飼糧與飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)牛單槽飼養(yǎng)，試驗(yàn)采用定量飼喂，每日07:00和19:00飼喂2次，先精后粗，精粗比為4∶6，精飼料 1.6 kg/d，粗飼料為羊草 2.4 kg/d，喂后飲水?；A(chǔ)飼糧配制參照肉牛飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)(NY/T 815—2004)，其組成及營養(yǎng)水平見表2。

1.5 樣品采集

采樣時(shí)間:正試期第8天(07:00、13:00、19:00、01:00)、第 9 天(09:00、15:00、21:00、03:00)、第 10 天(11:00、17:00、23:00、05:00)，每時(shí)間點(diǎn)采集200 m L瘤胃液，待測瘤胃發(fā)酵指標(biāo)。第10天07:00采集采集瘤胃液，－80℃保存，待測瘤胃微生物。

1.6 樣品分析和檢測方法

1.6.1 瘤胃液 pH、氨態(tài)氮(NH3-N)、MCP 和揮發(fā)性脂肪酸(VFA)的測定

瘤胃液經(jīng)4層紗布過濾，立即采用便攜式PHB－10型酸度計(jì)測定 pH，而后將樣品分為3分:1分測NH3-N濃度，采用靛酚比色法［12］;1分10 000×g離心10 m in，取上清按4∶1(上清液∶酸)加入25%偏磷酸靜置30 min，然后20 000×g離心10 m in，取上清測定 VFA濃度，采用氣相色譜法［13］;1分 －20 ℃保存，備測 MCP濃度，采用嘌呤法［14］。

表2 基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))Table 2 Com position and nutrient levels of the basal diet(air-dry basis) %

1.6.2 瘤胃微生物的測定

1.6.2.1 瘤胃微生物總DNA的提取

采用反復(fù)凍融法提取瘤胃微生物DNA［15］。

1.6.2.2 實(shí) 時(shí) 定 量 PCR(real-time PCR，RTPCR)引物

引物設(shè)計(jì)參照 Khanfipour等［16］和 Denman等［17］的報(bào)道，由上海生物工程技術(shù)有限公司合成，序列及參數(shù)見表3。

表3 實(shí)時(shí)定量PCR引物序列及參數(shù)Table 3 Primer sequences and parameters for real-time PCR assay

1.6.2.3 反應(yīng)體系和條件

以SYBR Prem ix ExTaqTM試劑建立20μL反應(yīng)體系:預(yù)混合試劑(試劑盒中幾種試劑按說明混合)10μL、上游和下游引物各0.15μL、DNA 模板1μL和雙蒸去離子水8.7μL。采用 Roche 4500 real-time PCR systems(瑞士羅氏公司)進(jìn)行PCR，反應(yīng)條件為:1)95℃預(yù)變性30 s;2)95℃變性5 s，60℃退火和延伸20 s并采集熒光信號(hào)，40個(gè)循環(huán);3)熔解曲線分析，65℃升至95℃，65℃保溫20 s、95℃保溫2 m in，自動(dòng)采集熒光。

1.7 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

根據(jù)以下公式將目標(biāo)菌的量表示為相對(duì)于總細(xì)菌量的百分比:

目標(biāo)菌的量 =2－(Ct目標(biāo)菌－Ct總菌)×100。

式中:Ct為閾值循環(huán)。

數(shù)據(jù)采用SAS 9.2軟件包Mixed模型進(jìn)行分析，均值采用Duncan氏法多重比較，結(jié)果以平均值表示，顯著水平為P＜0.05。

2 結(jié)果

2.1 灌注小肽對(duì)瘤胃液pH的影響

由表4可知，灌注大豆小肽對(duì)瘤胃液pH平均值無顯著影響(P＞0.05)。由圖1可見，灌注不同水平小肽，各組瘤胃液pH變化趨勢基本一致，均為晨飼前達(dá)到最大值，而后逐漸降低，6 h(13:00)后到最小值，之后又逐漸上升，晚飼后再逐漸降低。

表4 大豆小肽水平對(duì)瘤胃發(fā)酵指標(biāo)的影響Table 4 Effects of soybean small peptides level on fermentation indices in the rumen

圖1 大豆小肽水平對(duì)瘤胃液pH的影響Fig.1 Effects of soybean small peptides level on rum inal pH

2.2 灌注小肽對(duì)瘤胃液NH 3-N濃度的影響

由表4可知，灌注小肽顯著增加瘤胃液NH3-N濃度(P＜0.05)，100 g/d組、200 g/d組和300 g/d組NH3-N濃度分別比0 g/d組增加了26.16%、35.43%和75.78%。由圖2可見，各組 NH3-N濃度變化趨勢相近，在晨飼后2 h(09:00)上升，之后開始下降，飼喂后6 h(13:00)達(dá)到最低，300 g/d組的峰值高于其他各組。

圖2 大豆小肽水平對(duì)瘤胃液氨態(tài)氮濃度的影響Fig.2 Effects of soybean small peptides level on rum inal NH3-N concentration

2.3 灌注小肽對(duì)瘤胃液MCP濃度的影響

由表4可知，灌注大豆小肽能夠顯著增加瘤胃液 MCP的含量(P＜0.05)，100 g/d組、200 g/d組和300 g/d組MCP濃度分別比未灌注組提高了27.10%、31.30% 和 42.38%。由圖 3 可見，瘤胃液MCP濃度在飼喂后0～4 h升高，在飼喂后6 h有轉(zhuǎn)折點(diǎn)，不同組變化趨勢不一致。

2.4 灌注小肽對(duì)瘤胃液VFA濃度及其組分的影響

由表5可知，灌注大豆小肽增加瘤胃液總揮發(fā)性脂肪酸(TVFA)濃度，且200 g/d組與300 g/d組顯著高于0 g/d組(P＜0.05);降低乙酸百分含量，100 g/d組與200 g/d組與0 g/d組差異顯著(P＜0.05);300 g/d組顯著降低了丁酸百分含量(P＜0.05)，100 g/d組顯著高于 0 g/d組(P＜0.05);隨著小肽灌注量的增加，乙酸/丙酸顯著降低(P＜0.05)。2.5 灌注小肽對(duì)瘤胃微生物的影響

圖3 大豆小肽水平對(duì)瘤胃液微生物蛋白濃度的影響Fig.3 Effects of soybean small peptides level on rum inal MCP concentration

表5 不同水平的大豆小肽對(duì)瘤胃液揮發(fā)性脂肪酸的影響Table 5 Effects of soybean small peptides level on VFA concentrations in rum inal liquid

由表6可知，灌注小肽增加了瘤胃液中溶纖維丁酸弧菌的相對(duì)含量，300 g/d組顯著高于0 g/d組(P＜0.05);對(duì)瘤胃普雷沃氏菌、瘤胃球菌、纖毛蟲與牛鏈球菌的含量無顯著影響(P＞0.05)。

表6 大豆小肽水平對(duì)瘤胃微生物相對(duì)含量的影響Table 6 Effects of soybean small peptides level on relative contents of rumen m icrobes

3 討論

3.1 大豆小肽對(duì)瘤胃液pH的影響

pH是衡量瘤胃發(fā)酵的重要指標(biāo)，可綜合反映瘤胃微生物、代謝產(chǎn)物、有機(jī)酸產(chǎn)生、吸收等狀況。pH過低會(huì)導(dǎo)致能量損耗增加、微生物合成效率和氮沉積效率降低，研究發(fā)現(xiàn)當(dāng)pH低于6.2，將會(huì)抑制瘤胃纖維素的消化［18］。本試驗(yàn)中各組試驗(yàn)牛瘤胃液pH在飼喂大豆小肽后8 h達(dá)到最低，之后逐漸上升，這與馬寧等［10］試驗(yàn)結(jié)果相一致。本試驗(yàn)各組牛瘤胃液pH在6.17～6.89，均在正常的范圍內(nèi)變動(dòng)，表明灌注小肽未影響瘤胃正常發(fā)酵。前人研究灌注試驗(yàn)較多采用連續(xù)飼喂方法［19－20］，以維持瘤胃穩(wěn)定性，但連續(xù)飼喂與正常飼養(yǎng)條件差異較大，且操作困難。本試驗(yàn)采用早晚飼喂，pH僅在灌注2 h后出現(xiàn)顯著變化。動(dòng)物采食飼料后，碳水化合物在瘤胃中發(fā)酵產(chǎn)生VFA的速度較快，數(shù)量較多，瘤胃中VFA濃度升高，導(dǎo)致pH下降，之后碳水化合物的發(fā)酵相對(duì)減慢，瘤胃上皮對(duì)VFA的吸收及流出的速度相對(duì)加快，因此雖然VFA增加，但pH不會(huì)出現(xiàn)顯著變化。試驗(yàn)結(jié)果表明在正常飼養(yǎng)條件下進(jìn)行，連續(xù)灌注試驗(yàn)是可行的。

3.2 大豆小肽對(duì)瘤胃液NH3-N濃度的影響

關(guān)于瘤胃微生物生長需要的NH3-N濃度的臨界量，不同研究結(jié)果差異較大。適宜的NH3-N濃度是MCP合成效率的首要條件，有研究提出為6 ～30 mg/dL［21］，也有研究認(rèn)為是14 ～16 mg/dL，適宜濃度內(nèi)微生物的效率最佳［22］，A llen 等［23］則認(rèn)為5 mg/dL就能足夠維持微生物的最高生長率。本試驗(yàn)NH3-N濃度為6～20 mg/dL，且隨灌注量的增加而增加。瘤胃內(nèi)NH3-N的來源主要有3條途徑:氨基酸的脫氨基作用;瘤胃內(nèi)NPN轉(zhuǎn)化而來;循環(huán)血液中的氨通過瘤胃壁滲入瘤胃液。馬寧等［10］研究表明，瘤胃液在添加不同濃度肽體外培養(yǎng)的初期，NH3-N產(chǎn)生率最高，6～10 h后減弱。本試驗(yàn)在初期變化趨勢與之相符，后期在減弱之后又有升高的趨勢，可能是由于飼喂初期瘤胃發(fā)酵產(chǎn)生的氨較多，到后期采食的飼糧降解基本結(jié)束，而主要由灌注的小肽水解成的氨基酸脫氨基生成氨，使得NH3-N的濃度升高。Ipharraguerre等［24］發(fā)現(xiàn)提高飼糧的蛋白質(zhì)含量會(huì)增加瘤胃液NH3-N的濃度，且與動(dòng)物源蛋白質(zhì)相比，大豆蛋白質(zhì)能顯著提高瘤胃液NH3-N濃度。李莉［18］體外試驗(yàn)也表明以大豆肽為氮源的培養(yǎng)液中NH3-N濃度高于其他試驗(yàn)組。本試驗(yàn)通過灌注大豆小肽取得類似的結(jié)果，提示灌注大豆小肽可提高肉牛瘤胃液的NH3-N濃度。

3.3 大豆小肽對(duì)瘤胃液MCP濃度的影響

反芻動(dòng)物蛋白質(zhì)需要量的60%～70%來自瘤胃MCP，而微生物的生長和合成效率受諸多因素的影響，如碳水化合物降解與瘤胃可降解蛋白質(zhì)發(fā)酵的同步性、瘤胃可利用氮源和能量、微生物菌群、pH 和瘤胃外流速度等［25］。李琍等［26］指出對(duì)以粗飼料為主要飼糧的反芻動(dòng)物，肽可能是瘤胃微生物生長的限制因子。Griswold等［27］利用體外試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，肽提供氨基氮能明顯提高M(jìn)CP的產(chǎn)量。王夢芝等［9］利用體外試驗(yàn)研究表明低聚肽對(duì)MCP的合成量顯著高于培養(yǎng)液為氯化銨時(shí)MCP合成量。本試驗(yàn)MCP濃度顯著提高，與上述研究結(jié)果相符合。大豆小肽在瘤胃中可被微生物直接利用合成MCP，使得瘤胃液MCP濃度增加，部分小肽水解為氨基酸，氨基酸經(jīng)過脫氨基作用生成酮酸和氨。MCP濃度的增加，減少了氮再循環(huán)過程中的損失，提高微生物對(duì)氮源的利用率。瘤胃微生物對(duì)肽的利用也有濃度的限制，F(xiàn)u等［25］研究提出，在體內(nèi)試驗(yàn)中，瘤胃微生物達(dá)到最佳的生長和合成效率所需的肽濃度等于或是少于6.4 mmol/L，在體外試驗(yàn)中肽的濃度為 1.8～7.1 mmol/L。Jones等［11］發(fā)現(xiàn)在體外持續(xù)培養(yǎng)中，當(dāng)肽替代尿素添加量為總氮的10%時(shí)，MCP的產(chǎn)量最高，但當(dāng)超過10%時(shí)，MCP產(chǎn)量降低。本試驗(yàn)中，隨著小肽灌注量的增加，MCP濃度增加，提示300 g/d的添加量沒有超出臨界范圍。

3.4 大豆小肽對(duì)瘤胃液VFA濃度與組分的影響

VFA是反芻動(dòng)物碳水化合物吸收的主要方式之一。試驗(yàn)中灌注小肽提高瘤胃碳水化合物的降解程度使得瘤胃液TVFA濃度增加，另外小肽水解產(chǎn)生的氨基酸脫氨基生成的碳架，經(jīng)過轉(zhuǎn)化形成的VFA，也可使VFA濃度增加，這也與瘤胃內(nèi)VFA濃度和NH3-N濃度增加是相一致的。Griswold等［27］體外試驗(yàn)得到氮源為肽時(shí)VFA的產(chǎn)量顯著高于氮源為尿素時(shí)。Jones等［11］體外試驗(yàn)表明，添加肽對(duì)TVFA的產(chǎn)量無顯著影響，且試驗(yàn)組與0 g/d組相比，乙酸、丙酸、丁酸的百分含量均有不同程度的降低。Cruz等［8］研究表明綿羊瘤胃內(nèi)灌注肽、氨基酸和尿素溶液，對(duì)瘤胃液VFA濃度無顯著影響。本試驗(yàn)結(jié)果與之相反，可能是體內(nèi)和體外試驗(yàn)差別所致。乙酸一般約占TVFA的70% ～75%，本試驗(yàn)結(jié)果在71% ～76%，與之相近。乙酸/丙酸與動(dòng)物飼糧的組成以及精粗比有關(guān)，精飼料在瘤胃中的發(fā)酵率較高，產(chǎn)生的TVFA也較多，乙酸/丙酸較低，本試驗(yàn)中乙酸/丙酸與夏楠等［28］試驗(yàn)結(jié)果(豆粕型飼糧乙酸/丙酸為4.58，棉粕型飼糧為5.26)相近。乙酸/丙酸與能量轉(zhuǎn)化效率相關(guān)，本試驗(yàn)乙酸/丙酸下降，表明丙酸的比例提高，能量的利用效率提高。

3.5 大豆小肽對(duì)瘤胃微生物的影響

瘤胃微生物的生長取決于以肽、氨基酸與氨形式存在的氮的可利用程度［29］。瘤胃球菌與溶纖維丁酸弧菌是瘤胃內(nèi)主要的纖維分解菌。溶纖維丁酸弧菌、棲瘤胃普雷沃氏菌具有蛋白分解活性。纖毛蟲是瘤胃內(nèi)個(gè)體最大、數(shù)量最多、最重要的原蟲。牛鏈球菌能降解淀粉，但不能降解纖維素，在瘤胃中的數(shù)量很少。

隨著溶纖維丁酸弧菌的數(shù)量降低，纖維降解率降低［30］。試驗(yàn)采用RT-PCR測得的纖維素分解菌相對(duì)含量與前人研究的結(jié)果相近［31］。灌注大豆小肽提高溶纖維丁酸弧菌的含量，這與體外培養(yǎng)中添加肽提高纖維素分解菌的活力，顯著提高纖維素的降解相一致［26－27］。肽的添加量會(huì)影響微生物的生長，適宜的肽添加量有利于纖維素的降解［11］。劉占英［32］研究不同氮源對(duì)瘤胃微生物的影響，結(jié)果表明肽能提高溶纖維丁酸弧菌的活性。Cruz等［8］研究表明綿羊瘤胃灌注肽有提高活菌數(shù)量的趨勢，對(duì)原蟲總數(shù)和纖維分解菌無明顯影響，但在體外培養(yǎng)中，以纖維二糖為培養(yǎng)基時(shí)，肽和氨基酸促進(jìn)了纖維分解菌的生長率，本試驗(yàn)中灌注肽對(duì)原蟲的數(shù)量無影響，與上述結(jié)果相一致。肽對(duì)纖維素分解菌的影響在不同的研究中還存在分歧，這可能與體內(nèi)試驗(yàn)與體外培養(yǎng)、培養(yǎng)的手段、培養(yǎng)時(shí)間、定量方法等有關(guān)，仍需進(jìn)一步探討。

4 結(jié)論

①瘤胃灌注300 g/d以內(nèi)的大豆小肽，對(duì)瘤胃液pH不會(huì)造成顯著性影響。

②瘤胃灌注大豆小肽提高了瘤胃液NH3-N濃度，增加MCP產(chǎn)量。

③瘤胃灌注大豆小肽增加了VFA產(chǎn)量，提高了能量利用效率。

④瘤胃灌注大豆小肽提高了瘤胃溶纖維丁酸弧菌的含量。

［1］NEWEY H，SMYTH D H.Intracellular hydrolysis of dipeptides during intestinal absorption［J］.Journal of Physiology，1960，152:367－374.

［2］王玲，劉輝，李勝利，等.十二指腸灌注大豆小肽對(duì)奶山羊小腸肽吸收的影響［J］.動(dòng)物營養(yǎng)學(xué)報(bào)，2010，22(2):318 －326.

［3］PUCHALA R，PIERZYNOWSKI S G，WULIJI T，et al.Effects of small peptides or am ino acids infused to a perfused area of the skin of Angora goats on mohair growth［J］.Journal of Animal Science，2002，80:1097－1104.

［4］曹志軍，李勝利，丁志明.日糧中添加小肽對(duì)奶牛產(chǎn)奶性能影響的研究［J］.飼料工業(yè)，2004(4):35－37.

［5］施用暉，樂國偉，左紹群，等.產(chǎn)蛋雞日糧中添加酪蛋白肽對(duì)產(chǎn)蛋雞性能及血漿肽和鐵、鋅含量的影響［J］.四川農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，1996，14:46 －50.

［6］李麗立，陳宇光，譚支良，等.小肽對(duì)山羊氮平衡和營養(yǎng)物質(zhì)消化率的影響［J］.草業(yè)學(xué)報(bào)，2004，13(2):73－78.

［7］郭春燕.羊血水解小肽的制備及其對(duì)綿羊瘤胃氮代謝的影響［D］.碩士學(xué)位論文.烏魯木齊:新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)，2006.

［8］CRUZ S R，SAM IRAH M A，NEWBOLD C J，et al.Influence of peptides，am ino acids and urea on m icrobial activity in the rumen of sheep receiving grass hay and on the growth of rumen bacteriain vitro［J］.Animal Feed Science and Technology，1994，49:151－161.

［9］王夢芝，喻禮懷，王洪榮，等.不同分子形式氮源對(duì)瘤胃微生物發(fā)酵及蛋白合成的影響［J］.中國畜牧雜志，2010，46(5):20 －24.

［10］馬寧，單安山，馬清泉，等.不同濃度肽對(duì)瘤胃發(fā)酵及微生物蛋白產(chǎn)量的影響［J］.中國畜牧雜志，2009，45(15):29 －32.

［11］JONES D F，HOOVER W H，M ILLER W T K.Effects of concentrations of peptides onm icrobialmetabolism in continuous culture［J］.Journal of Animal Science，1998，76:611－616.

［12］ALBERT L C，EDWARD P M.Modified reagents for determ ination of urea and ammonia［J］.Clinical Chem istry，1962，8(2):130－132.

［13］秦為琳.應(yīng)用氣相色譜法測定揮發(fā)性脂肪酸的研究改進(jìn)［J］.南京農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，1982(5):110－116.

［14］ZINN R A，OWENS F N.A rapid procedure for purinemeasurement and its use for estimating net rum inal protein synthesis［J］.Canadian Journal of Animal Science，1986，66:157－166.

［15］ZHOU JZ，BRUNSM A，JAMESM.DNA Recovery from soils of diverse composition［J］.Applied and environmental m icrobiology，1996(2):316－322.

［16］KHAFIPOUR E，LISC，PLAIZIER JC，et al.Rumen m icrobiome composition determ ined using two nutritionalmodels of subacute rum inal acidosis［J］.Applied and Environmental Microbiology，2009，75(22):7115－7124.

［17］DENMAN S E，MCSWEENEY C S.Development of a real-time PCR assay for monitoring anaerobic fungal and cellulolytic bacterial populations within the rumen［J］.Federation of European Microbiological Societies Microbiology Ecology，2006，58:572 －582.

［18］李莉.體外法研究肽對(duì)瘤胃液pH、氨氮濃度、菌體蛋白氮濃度、中性洗滌纖維降解率及其產(chǎn)氣量的影響［D］.博士學(xué)位論文.呼和浩特:內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)，2001.

［19］李海燕，徐鳳霞，王中華.酪蛋白灌注水平對(duì)瘤胃蛋白質(zhì)代謝的影響的研究［J］.山東農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)，2008，39(3):345 －349.

［20］PETERS JP，SHEN R Y，ROBINSON J A，et al.Disappearance and passage of propionic acid from the rumen of the beef steer［J］.Journal of Animal Science，1990，68:3373－3349.

［21］BOWMAN J G，ASPLUND JM.Nitrogen utilization，rum inal fermentation and abomasalnitrogen flow in sheep fed Caucasian Bluestem hay supplemented with lucerne or urea［J］.Animal Feed Science and Technology，1988，20(1):33－44.

［22］王加啟，馮仰廉.日糧精粗比對(duì)瘤胃微生物合成效率的影響［J］.畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào)，1995，26(4):301－307.

［23］ALLEN S A，M ILLER E L.Determ ination of N requirement form icrobial growth from the effect of urea supplementation of a low N diet on abomasal N flow and N recycling in wethers and lambs［J］.British Journal of Nutrition，1976，36:353.

［24］IPHARRAGUERRE R，CLARK JH，F(xiàn)REEMAN D E.Varying protein and starch in the diet of dairy cow s.I.Effects on rum inal fermentation and intestinal supply of nutrients［J］.Journal of Dairy Science，2005，88:2537－2555.

［25］FU C J，F(xiàn)ELTON E E，LEHMKUHLER JW，et al.Rum inal peptide concentration required to optim ize m icrobial growth and efficiency［J］.Journal of Animal Science，2001，79:1305－1312.

［26］李琍，丁角力.肽對(duì)體外混合培養(yǎng)瘤胃微生物發(fā)酵和生長影響的研究［J］.畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2000(2):113－119.

［27］GRISWOLD K E，M ILLER T K，HOOVER W H，et al.Effect of form of nitrogen on growth of rum inal m icrobes in continuous culture［J］.Journal of Animal Science，1996，74:483－491.

［28］夏楠，趙國琦.不同蛋白質(zhì)組成的日糧對(duì)瘤胃發(fā)酵及微生物蛋白質(zhì)合成的影響［J］.中國畜牧獸醫(yī)，2009，36(7):11 －14.

［29］RUSSELL JB，O＇CONNOR JD，F(xiàn)OX D G，et al.Net carbohydrate and protein system for evaluating cattle diets:I.Rum inal fermentation［J］.Journal of Animal Science，1992，70(11):3551－3561.

［30］鄧茂昌，胡代澤，朗家文，等.生態(tài)條件和瘤胃叢密度與纖維分解的關(guān)系［J］.資源開發(fā)與市場，1997，13(2):55－57.

［31］王海榮.不同日糧精粗比及氮源對(duì)綿羊瘤胃纖維素降解菌群和纖維物質(zhì)降解的影響［D］.博士學(xué)位論文.呼和浩特:內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)，2007.

［32］劉占英.綿羊瘤胃主要纖維素降解細(xì)菌的分離鑒定及不同氮源對(duì)其纖維降解能力的影響［D］.博士學(xué)位論文.呼和浩特:內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)，2008.

*Corresponding author，professor，E-mail:w ryang211@163.com

(編輯 王智航)

Infusion of Soybean Sm all Peptides into Rum en:Effects on Rum en Fermentation of Beef Cattle

WANG Wenjuan1，3WAN Fachun2，3YANGWeiren1*SONG Enliang2，3LIU Xiaomu2，3TAN Xiuwen2，3LIU Guifen2，3
(1.Department of Animal Science and Technology，Shandong Agricultral University，Taian271018，China;2.Insititute of Animal Science Veterinary Medicine，Shandong Academy of Agricultural Sciences，Jinan250100，China;3.Shandong Key Laboratory of Animal Disease Control and Breeding，Jinan250100，China)

The experiment was conducted to investigate the effects of infusion of different levels of soybean small peptides(SSP)on rumen fermentation and rumenm icrobes inLuxicattle.Four heads ofLuxicattle fixed with permanent rum inal cannula were used in a 4×4 Latin square design.Cattle were infused SSP by 0，100，200 and 300 g/d，respectively.Rum inal fluid was collected for the analysis of rumen fermentation indices，as well as the relative content of rumen m icrobes by real-time PCR.The results showed as follows:themean of rum inal pH was not significantly affected by SSP infusion(P＞0.05)，themeans of NH3-N and MCP concentrations were significantly increased(P＜0.05);the concentration of total volatile fatty acid(TVFA)was significantly increased by SSP infusion(P＞0.05)，compared with those in 0 g/d group，the proportions of propionate in 200 g/d group and 300 g/d group were increased significantly(P＜0.05)，while the proportions of acetate in 100 g/d group and 200 g/d group，aswell as the proportions of butyrate in 300 g/d group were decreased significantly(P＜0.05);the ratio of acetate to propionatewas significantly decreased by SSP infusion(P＜0.05);the relative content ofButyrivibriofibrisolvenswas significantly increased by SSP infusion(P＜0.05).In conclusion，infusion of SSP can promotem icrobial protein synthesis，increaseButyrivibriofibrisolvenscontent and improve rumen metabolism.［Chinese Journal of Animal Nutrition，2011，23(8):1324-1331］

soybean small peptides;beef cattle;rumen fermentation;rumen m icrobe

S 823;S816.4

A

1006-267X(2011)08-1324-08

10.3969/j.issn.1006-267x.2011.08.011

2011－03－07

項(xiàng)目來源:現(xiàn)代農(nóng)業(yè)(肉牛)產(chǎn)業(yè)體系專項(xiàng)經(jīng)費(fèi)(MATS-Beef Cattle System)、公益性行業(yè)農(nóng)業(yè)科研專項(xiàng)經(jīng)費(fèi)課題(nyhyzx07-036-01，nyhyzx07-036-05)

王文娟(1982—)，女，山東東阿人，碩士研究生，從事動(dòng)物營養(yǎng)研究。E-mail:wenjuan0705@163.com

*通訊作者:楊維仁，教授，碩士生導(dǎo)師，E-mail:w ryang@sdau.edu.cn