睪丸肉膜囊固定術(shù)在大鼠精索扭轉(zhuǎn)模型中的應(yīng)用*

文焰林，鄧顯忠，崔 曙，姜 果，鮮述彥，廖 波

(川北醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院泌尿外科，四川南充 637000)

目前，大鼠精索扭轉(zhuǎn)模型仍被廣泛運(yùn)用于精索扭轉(zhuǎn)及睪丸移植缺血再灌注損傷的實(shí)驗(yàn)研究。但以往該模型的建立往往利用縫線縫合睪丸白膜固定扭轉(zhuǎn)模型，或用線結(jié)扎精索血管。由于縫線縫合導(dǎo)致血睪屏障的破壞及睪丸炎癥性反應(yīng)，使得精索扭轉(zhuǎn)模型的建立相對(duì)后續(xù)研究有很大干擾，而用線結(jié)扎容易導(dǎo)致結(jié)扎處水腫，要求恢復(fù)血供時(shí)不易解除結(jié)扎線。本文就利用睪丸肉膜囊固定術(shù)來(lái)建立一種對(duì)睪丸無(wú)損傷、簡(jiǎn)便易行的大鼠精索扭轉(zhuǎn)模型，為臨床病理生理、形態(tài)學(xué)、缺血再灌注損傷及對(duì)健側(cè)睪丸功能影響的進(jìn)一步研究打下基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材 料

選用SD雄性大鼠42只，購(gòu)自川北醫(yī)學(xué)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心［scxn(川)2008－18］，體重(65－219)g，平均120g。手術(shù)在川北醫(yī)學(xué)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心動(dòng)物手術(shù)室進(jìn)行。

1.2 方 法

將大鼠稱重，利用隨機(jī)數(shù)字表分組編號(hào)。用2%戊巴比妥鈉50mg/kg腹腔注射麻醉后，固定與鼠板上，消毒。用手將左側(cè)睪丸由腹腔推送至左側(cè)陰囊內(nèi)，剪開陰囊皮膚，用齒躡提起左側(cè)陰囊皮膚，擴(kuò)大陰囊皮膚切口，暴露肉膜層，用止血鉗充分分離、擴(kuò)張左側(cè)陰囊皮膚與肉膜層之間的間隙，提起并打開肉膜層，通過肉膜層拉出睪丸、附睪(圖1 A)，分離睪丸引帶，按要求將精索順時(shí)針扭轉(zhuǎn)720°后維持精索位置不變(圖1B)，縫合縮小肉膜層切口，使僅容精索通過，將睪丸、附睪置于陰囊皮膚與肉膜層之間分離的肉膜囊內(nèi)，拉攏縫合陰囊切口。96小時(shí)后(按后續(xù)試驗(yàn)要求所選擇的時(shí)間)打開原切口進(jìn)入陰囊，見睪丸、附睪缺血壞死(圖1C)，以上所有手術(shù)操作均嚴(yán)格按照無(wú)菌原則進(jìn)行。

2 結(jié)果

手術(shù)時(shí)間為(3－5)分鐘，麻醉后死亡3只，都為體重相對(duì)輕的大鼠，其余39只大鼠于手術(shù)96小時(shí)后打開切口見睪丸、附睪缺血壞死提示建模成功。

3 討論

精索扭轉(zhuǎn)又稱睪丸扭轉(zhuǎn)，好發(fā)于青少年，每年25歲以下的青少年發(fā)病率為1/4000［1］，成人發(fā)病率相對(duì)較低，Witherington等［2］統(tǒng)計(jì)睪丸扭轉(zhuǎn)患者中成人患者所占比例為39%。目前研究證明一側(cè)睪丸扭轉(zhuǎn)可致同側(cè)睪丸的組織學(xué)損傷，對(duì)側(cè)睪丸是否受損在解剖和生理方面都有爭(zhēng)議，雖然Turner等［3］、Tarhan等［4］認(rèn)為一側(cè)睪丸扭轉(zhuǎn)對(duì)對(duì)側(cè)睪丸沒有影響。但絕大多數(shù)學(xué)者認(rèn)為會(huì)導(dǎo)致對(duì)側(cè)睪丸功能受損，關(guān)于對(duì)側(cè)睪丸損傷的發(fā)生也存在不同的學(xué)說:①交感神經(jīng)反射學(xué)說:部分學(xué)者認(rèn)為雙側(cè)睪丸之間的神經(jīng)反射導(dǎo)致對(duì)側(cè)損傷。Shiraishi等［5］通過實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)一側(cè)睪丸扭轉(zhuǎn)1小時(shí)后復(fù)位，對(duì)側(cè)睪丸組織的NO合成酶(NOS)表達(dá)增加，睪丸組織萎縮，生精細(xì)胞凋亡增加，認(rèn)為可能存在神經(jīng)血管舒縮反射導(dǎo)致對(duì)側(cè)的睪丸發(fā)生改變。Otcu等［6］觀察到一側(cè)睪丸扭轉(zhuǎn)導(dǎo)致健側(cè)生殖股神經(jīng)交感神經(jīng)沖動(dòng)釋放增加，推測(cè)存在一種自主反射機(jī)制，由傷害性刺激激活導(dǎo)致對(duì)側(cè)睪丸損傷。②自身免疫學(xué)說:由于血生精小管屏?障的破壞，導(dǎo)致激活了例如抗精子抗體、抗間質(zhì)細(xì)胞抗體等免疫反應(yīng)，引起對(duì)側(cè)和患側(cè)睪丸功能受損。Rodriguez等［7］通過實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)一側(cè)睪丸扭轉(zhuǎn)后復(fù)位導(dǎo)致對(duì)側(cè)睪丸曲精小管和生殖細(xì)胞凋亡，認(rèn)為由于體液和細(xì)胞免疫激活巨噬淋巴細(xì)胞系統(tǒng)和肥大細(xì)胞等引起腫瘤壞死因子、炎癥反應(yīng)作用導(dǎo)致對(duì)側(cè)睪丸生殖細(xì)胞凋亡。③缺血再灌注損傷:對(duì)側(cè)睪丸的缺血再灌注損傷導(dǎo)致ROS增加和氧自由基等致細(xì)胞線粒體等的脂質(zhì)過氧化反應(yīng)引起對(duì)側(cè)睪丸受損。

關(guān)于精索扭轉(zhuǎn)動(dòng)物模型的研究歷史較長(zhǎng)，但到目前為止尚無(wú)公認(rèn)的方案。Turner等［8］報(bào)道取下腹正中切口，拖出睪丸，切斷睪丸引帶，分離周圍筋膜至附睪頭，按要求旋轉(zhuǎn)睪丸制作扭轉(zhuǎn)模型后用6－0單絲線縫合睪丸和陰囊，Abasiyanik等［9］取左側(cè)腹股溝切口，拖出睪丸，按要求扭轉(zhuǎn)睪丸，用11－0無(wú)損傷縫合線縫合睪丸白膜和陰囊。Merimsky等［10］取腹部切口，拖出精索睪丸，將精索結(jié)扎，保證靜脈回流受阻，引起充血性壞死，但又不能完全阻斷睪丸血供，按要求保留結(jié)扎線到規(guī)定時(shí)間后去掉結(jié)扎線。以上三種是常見的建立精索扭轉(zhuǎn)模型的方法，但關(guān)于結(jié)扎精索后缺血致對(duì)側(cè)睪丸功能受損的報(bào)道不盡相同，Savas等［11］也認(rèn)為結(jié)扎引起的缺血導(dǎo)致對(duì)側(cè)睪丸功能受損，但Nagler等［12］認(rèn)為結(jié)扎后不會(huì)導(dǎo)致對(duì)側(cè)睪丸功能受損。關(guān)于利用縫線固定睪丸建立模型有很多弊端，Lotan等［13］利用流式細(xì)胞術(shù)分析利用縫線縫合睪丸固定的方法導(dǎo)致生精細(xì)胞萎縮的比例超過肉膜囊固定的方法，并且縫線穿過睪丸實(shí)質(zhì)易導(dǎo)致睪丸炎癥性損害，會(huì)明顯干擾精索扭轉(zhuǎn)的實(shí)驗(yàn)相關(guān)數(shù)據(jù)資料。雖然利用線結(jié)扎精索的方法沒有破壞血睪屏障，不會(huì)導(dǎo)致由于縫線破壞睪丸曲細(xì)精管引致精子等抗原溢出引起的免疫性反應(yīng)，但由于大鼠精索細(xì)小，結(jié)扎后組織水腫，不易拆除結(jié)扎線，結(jié)扎程度也不易掌握。鑒于一側(cè)精索扭轉(zhuǎn)導(dǎo)致健側(cè)睪丸生精功能受損的機(jī)制未明，現(xiàn)三種學(xué)說中明確提出了自身免疫學(xué)說，所以建立精索扭轉(zhuǎn)模型時(shí)必須避免人為的引起睪丸自身免疫反應(yīng)。Ritchey［14］等介紹利用睪丸肉膜囊固定術(shù)是無(wú)損傷的睪丸固定術(shù)，筆者采用睪丸肉膜囊固定術(shù)用于大鼠精索扭轉(zhuǎn)模型的建立，最大程度的模擬了該病的自然發(fā)病過程，該建模方法國(guó)內(nèi)外未見報(bào)道，此種方法建立大鼠精索扭轉(zhuǎn)模型成功，手術(shù)操作簡(jiǎn)單、出血少，沒有損傷睪丸實(shí)質(zhì)，對(duì)缺血再灌注損傷、免疫學(xué)研究等沒有干擾，是建立精索扭轉(zhuǎn)模型的良好方法，值得推廣。

［1］ 文焰林，鄧顯忠，廖 波.睪丸扭轉(zhuǎn)的診斷治療進(jìn)展［J］.中華臨床醫(yī)師雜志(電子版)，2011，5(4):1099 －1102

［2］ Witherington R，Jarrell TS.Torsion of the spermatic cord in adults［J］.JUrol，1990，143(1):62 －63

［3］ Turner TT.Acute experimental testicular torsion.No effect on the contralateral testis［J］.JAndrol，1985，6(1):65 －72

［4］ Tarhan F，Yildiz K，Kuyumcuoglu U.An enigma:Contralateral effects of experimental unilateral testicular torsion ［J］.Int Urol Nephrol，1996，28(3):359 －366

［5］ Shiraishi K，Yoshida K，Naito K.Activation of endothelial nitric oxide synthase in contralateral testis during unilateral testicular torsion in rats［J］.Arch Androl，2003，49(3):179 －190

［6］ Otcu S，Durakogugil M，Orer HS，et al.Contralateral genitofemoral sympathetic nerve discharge increases following ipsilateral testicular torsion［J］.Urol Res，2002，30(5):324 －328

［7］ Rodriguez MG，Rival C，Theas MS，et al.Immunohistopathology of the contralateral testis of rats undergoing experimental torsion of the spermatic cord［J］.Asian JAndrol，2006，8(5):576 －583

［8］ Turner TT，Lysiak JJ，Shannon JD，et al.Testicular torsion alters the presence of specific proteins in themouse testis as well as the phosphorylation status of specific proteins［J］.JAndrol，2006，27(2):285－293

［9］ Turner TT，Lysiak JJ，Shannon JD，et al.Testicular torsion alters the presence of specific proteins in themouse testis as well as the phosphorylation status of specific proteins［J］.JAndrol，2006，27(2):285－293

［10］ Abasiyanik A，Dagdonderen L.Beneficialeffectsofmelatonin compared with allopurinol in experimental testicular torsion［J］.JPediatr S urg，2004，39(8):1238 －1241

［11］ Savas C，Ozogul C，Karaoz E，et al.Ischemia，whether from ligation or torsion，causes ultrastructural changes on the contralateral testis［J］.Scand JUrol Nephrol，2002，36(4):302 －306

［12］ Filho DW，Torres MA，Bordin AL，et al.Spermatic cord torsion，reactive oxygen and nitrogen species and ischemia-reperfusion injury［J］.Mol Aspects Med，2004，25(1 －2):199 －210

［13］ Lotan G，Golan R，Efrati Y，et al.An experimental study of the effect of two distinct surgical techniquesoforchiopexy on spermatogenesis and testicular damage in cryptorchid testes［J］.Fertil Steril，2005，84(3):749 －755

［14］ Ritchey ML，Bloom DA.Modified dartos pouch orchiopexy［J］.U-rology，1995，45(1):136 －138