總有機(jī)碳法檢測(cè)設(shè)備清潔時(shí)烏苯美司的殘留量

蔡旭萍，吳彩萍，趙愛桔，葛孝忠

（1.浙江普洛康裕制藥有限公司，浙江 東陽 322118； 2.浙江省醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)發(fā)展中心，浙江 杭州 310012）

烏苯美司是化學(xué)藥物，可增強(qiáng)免疫功能，用于抗癌時(shí)化學(xué)治療、放射治療的輔助治療，老年性免疫功能缺陷等。根據(jù)《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》（GMP）要求，藥品生產(chǎn)的每道工序完成后，應(yīng)對(duì)設(shè)備進(jìn)行清洗，以防止藥品污染和交叉污染。設(shè)備清洗要求的烏苯美司殘留量，淋洗法取樣時(shí)為10×10－6以下，擦拭法取樣時(shí)為0.8 mg/棉簽（25 cm2）以下。此時(shí)紫外吸收峰吸光度小，不能用液相、紫外、容量法等進(jìn)行殘留檢測(cè)。筆者采用總有機(jī)碳（TOC）法測(cè)定烏苯美司的殘留量，能在低濃度下快速檢測(cè)分析，確保生產(chǎn)及產(chǎn)品一致性、安全性，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

TOC－VCPH檢測(cè)儀（日本島津）。蔗糖對(duì)照品（USP，批號(hào)為G1E317）；1，4－對(duì)苯醌對(duì)照品（USP，批號(hào)為H1G332）；水為超純水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)[1]

精密稱取1，4－苯醌對(duì)照品，溶解于超純水，制成質(zhì)量濃度為0.75 mg/L的溶液（含碳0.50 mg/L），即為1，4－苯醌對(duì)照品溶液。精密量取蔗糖對(duì)照品，溶解于超純水中，制成含1.19mg/L的溶液（含碳0.50mg/L），即為蔗糖對(duì)照品溶液。取超純水、1，4－苯醌對(duì)照品溶液、蔗糖對(duì)照品溶液，各進(jìn)樣0.5mL，響應(yīng)效率符合規(guī)定。

2.2 溶液配制

取烏苯美司原料藥10 mg，精密稱定，置100 mL量瓶中，用0.1 mol/L鹽酸溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成質(zhì)量濃度為100μg/mL的溶液，精密量取上述溶液10 mL，置100 mL量瓶中，用0.1 mol/L鹽酸溶液稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液（10μg/mL）。將擦拭棉簽（25 cm2）放入干凈的具塞玻璃瓶中，精密加入0.1mol/L鹽酸溶液100mL，充分振搖，取上層液作為供試品溶液。將預(yù)先用0.1mol/L鹽酸溶液浸泡24h的空白擦拭棉簽，擠干溶劑后放入具塞玻璃瓶中，精密加入0.1mol/L鹽酸溶液100mL，充分振搖，取上層液作為空白溶液。

2.3 烏苯美司殘留量測(cè)定法

取空白溶液、對(duì)照品溶液、供試品溶液，用總有機(jī)碳法測(cè)定其峰面積，供試品溶液的峰面積應(yīng)不大于對(duì)照品溶液峰面積的4/5，即≤0.8mg/棉簽（25 cm2）。

2.4 最小檢出限和最小定量限確定

先取空白溶液測(cè)定6次。以0.1 mol/L鹽酸溶液為溶劑，配制一系列低質(zhì)量濃度的烏苯美司對(duì)照品溶液，測(cè)定對(duì)照品溶液的峰面積 S。在S/N=2～3時(shí)，檢出限為0.16μg/mL；在S/N≈10時(shí)，定量限為0.67μg/mL。

2.5 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察：精密量取質(zhì)量濃度為100μg/mL的對(duì)照品溶液各1，3，5，7，10，12mL，置100mL量瓶中，用0.1mol/L鹽酸溶液稀釋至刻度，搖勻，分別得質(zhì)量濃度為1，3，5，7，10，12μg/mL的對(duì)照品溶液，測(cè)定峰面積，以峰面積 A對(duì)烏苯美司質(zhì)量濃度 C（μg/mL）進(jìn)行線性回歸，得回歸方程 A=31.91 C－0.603 7，r=0.999 9（n=6）。

精密度試驗(yàn)：取質(zhì)量濃度為1μg/mL的對(duì)照品溶液，重復(fù)測(cè)定6次，以峰面積計(jì)算，其精密度的 RSD為0.9％（n=6）。

回收率試驗(yàn)：取烏苯美司原料藥80mg，精密稱定，置100mL量瓶中，用0.1mol/L鹽酸溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取1mL溶液16份，分別均勻分散在16格不銹鋼板中，每小格50mm× 50 mm，使每一格的區(qū)域內(nèi)烏苯美司的理論含量為0.8 mg。用0.1 mol/L鹽酸溶液潤濕并擠干的棉簽，按擦拭取樣方法擦拭鋼板，每格一根棉簽，擦拭中間的8個(gè)小方塊。將擦拭后的棉簽分別置150mL具塞玻璃瓶中，分別精密加入100mL 0.1mol/L鹽酸溶液，充分搖動(dòng)，使棉簽上的烏苯美司完全溶解，取上清液作為供試品溶液。按烏苯美司殘留量測(cè)定法測(cè)定并計(jì)算回收率。結(jié)果見表1。

3 討論

烏苯美司在水與乙醇中微溶，在稀酸與稀堿中有較大的溶解度，酸在生產(chǎn)設(shè)備中的殘留比堿在生產(chǎn)設(shè)備中的殘留更易清洗，所以在生產(chǎn)時(shí)用0.1 mol/L鹽酸溶液來清潔所用的反應(yīng)釜和離心機(jī)等設(shè)備。烏苯美司殘留量測(cè)定也用0.1 mol/L鹽酸溶液作溶劑。

表1 烏苯美司回收率試驗(yàn)結(jié)果（n=8）

紫外吸收峰吸光度小，不能檢測(cè)小于10×10－6的濃度。采用總有機(jī)碳法測(cè)定烏苯美司殘留量，方法學(xué)考察結(jié)果證實(shí)，其對(duì)生產(chǎn)設(shè)備清洗烏苯美司殘留量的檢測(cè)控制，在生產(chǎn)效率與檢測(cè)結(jié)果方面考慮均是一種切實(shí)可行的方法。

[1]國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典（二部）[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2010：附錄67.