乳腺癌組織相關(guān)基因位點(diǎn)雜合性缺失研究進(jìn)展

喬 峰，李曦洲，施俊義

（第二軍醫(yī)大學(xué)長海醫(yī)院普四科，上海 200433）

乳腺癌是多基因變異引起的疾病，包括原癌基因的激活和抑癌基因的失活。而抑癌基因的失活是由于一條等位基因發(fā)生雜合性缺失（loss of heterozygosity，LOH），而另外一條等位基因緊接著發(fā)生突變。本文就乳腺癌組織相關(guān)基因雜合性缺失試做綜述。

1 P53

P53定位于17 p13，長16～20 kb，有11個外顯子和10個內(nèi)含子，編碼由393個氨基酸組成的53 kD磷酸化蛋白。P53基因分野生型和突變型兩種，野生型P53因能抑制多種癌基因，如ras、myc等的轉(zhuǎn)化活性，而被認(rèn)定是一種抑癌基因，它能誘導(dǎo)終末分化，維持穩(wěn)定，誘發(fā)衰老和誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，是負(fù)生長調(diào)控子；而突變型P53不但沒有抑癌功能，還能抑制野生型P53的活性，從而引起細(xì)胞的轉(zhuǎn)化，促進(jìn)細(xì)胞癌變。P53基因失活主要發(fā)生在突變型P53，而其突變的常見的形式是LOH，其在散發(fā)性乳腺癌中突變率可達(dá)50%[1]，是患者復(fù)發(fā)和死亡的重要預(yù)后指標(biāo)。Naoki等[2]在對25例乳腺癌患者的癌旁組織的研究中顯示，生存素（survivin）的過表達(dá)與P53基因的突變密切相關(guān)，而生存素是IAP家族中的一員，其通過阻斷半胱天冬酶-3/-7而抑制腫瘤細(xì)胞的凋亡。此外，腫瘤發(fā)生的另一個重要標(biāo)志是粘著斑激酶（focal adhesion kinase FAK），而Golubovskaya[3]等所做的實驗表明，p53基因啟動子在體外能抑制FAK的啟動子活性。這也證實了P53基因失活對腫瘤發(fā)展的促進(jìn)作用。

2 BRCA1/BRCA2

BRCA1基因定位于17 q21，約100個kb，含有24個外顯子。野生型BRCA1編碼蛋白在細(xì)胞周期調(diào)控，DNA損傷修復(fù)以及誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡方面發(fā)揮著重要作用。近來發(fā)現(xiàn)BRCA1對乳腺癌上皮細(xì)胞的誘導(dǎo)分化作用，這更拓寬了其在細(xì)胞中的作用領(lǐng)域。乳腺癌的BRCA1發(fā)生LOH率為24%～77%，其中阿拉伯和美國婦女的發(fā)生率最高，為77%，日本婦女的發(fā)生率最低，為24%[4,5]，可見，乳腺癌的BRCA1突變與研究對象的種族有關(guān)。Rhiem[6]等檢測了105例散發(fā)性乳腺癌患者的BRCA1和BRCA2基因LOH情況，發(fā)現(xiàn)散發(fā)性乳腺癌與家族性乳腺癌在BRCA1基因LOH方面具有共同的基因/表型特征。Schildkraut等[7]對乳腺癌合并有卵巢癌患者的研究發(fā)現(xiàn)，約38%發(fā)生了BRCA1的LOH，表明了BRCA1在早發(fā)型遺傳性乳腺癌并伴有卵巢癌中扮演著重要角色。

BRCA2定位于13q12-13，由3個序列拼接而成，含27個外顯子，編碼由3 418個氨基酸構(gòu)成的蛋白質(zhì)。其突變常見于早發(fā)型遺傳性乳腺癌，特別是伴有卵巢癌的家系。在非BRCA1基因突變的家族性乳腺癌，特別是有男性乳腺癌患者的家系，BRCA2基因突變起非常重要的作用。在大多數(shù)乳腺癌的發(fā)生中，BRCA1與BRCA2往往同時發(fā)生突變而發(fā)揮作用。Jose等[8]對101例乳腺癌患者研究發(fā)現(xiàn)，47%發(fā)生了BRCA1的LOH，51%發(fā)生了BRCA2的LOH，BRCA1與BRCA2同時發(fā)生LOH的概率為32%，且與癌旁導(dǎo)管侵潤以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等臨床病理參數(shù)密切相關(guān)，然而BRCA1與BRCA2單獨(dú)發(fā)生LOH時則與上述相關(guān)性消失。Luciane等[9]對105例患者研究發(fā)現(xiàn)，59例（56%）發(fā)生了BRCA1/2的LOH。其中30例癌周正常導(dǎo)管末端小葉組織中15例（50%）發(fā)生了BRCA1/2的LOH?？梢夿RCA1和BRCA2的雜合性缺失在癌前病變中起重要作用。

3 FHIT

FHIT基因定位于3p14.2，全長500 kb，含10個外顯子，轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為1.1 kb的mRNA，表達(dá)產(chǎn)物為含147個氨基酸殘基的蛋白。FHIT通過調(diào)控細(xì)胞周期，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，與Ap3A形成復(fù)合物等機(jī)制抑制腫瘤的產(chǎn)生。Gatalica等[10]對50例標(biāo)本的分析發(fā)現(xiàn)，在乳腺癌發(fā)生過程的不同階段FHIT蛋白的表達(dá)量為正常上皮＞增生＞不典型增生＞原位癌＞侵潤性腫瘤，表明FHIT基因作為抑癌基因在乳腺癌中起重要作用。乳腺癌中FHIT基因的改變以雜合性缺失最為常見。Anirban等[11]對45例侵潤性乳腺癌研究發(fā)現(xiàn)45%的3p14.2位點(diǎn)上發(fā)生了LOH，而且與FHIT蛋白表達(dá)明顯相關(guān)（P=0.004）。Ingvarsson等[12]對239例乳腺癌FHIT的LOH與臨床病理學(xué)因素的分析指出，F(xiàn)HIT的LOH與雌、孕激素受體陰性和降低生存率有關(guān)。Silva等[13]對72例患者基因分析，發(fā)現(xiàn)FHIT與BRCA1共同發(fā)生LOH時，乳腺癌的惡性程度更高。

4 PTEN

PTEN基因定位于人類染色體10q23，全長200 kb，有9個外顯子和8個內(nèi)含子，又稱作MMAC1和TEP1。PTEN是迄今為止發(fā)現(xiàn)的第一個具有磷酸酶活性的抑癌基因。它既可通過脂性磷酸酶活性誘發(fā)細(xì)胞凋亡，阻滯細(xì)胞于G1期，又可通過蛋白磷酸酶活性抑制細(xì)胞遷移播散，促進(jìn)細(xì)胞分化，同時影響細(xì)胞核及細(xì)胞膜，從而發(fā)揮其抑癌作用。PTEN變異導(dǎo)致乳腺過度發(fā)育并較早發(fā)生腫瘤，而野生型PTEN過表達(dá)則抑制了乳腺發(fā)育。Teng等[14]發(fā)現(xiàn)在乳腺癌腫瘤標(biāo)本中，LOH發(fā)生率為48%（32/67）。Carcia等[15]分析105例乳腺癌患者10q23區(qū)域LOH和臨床病例參數(shù)的關(guān)系，發(fā)現(xiàn)發(fā)生LOH與無LOH兩組之間年齡、組織學(xué)分級、腋淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的差別有統(tǒng)計學(xué)意義，提示乳腺癌中10q23區(qū)域雜合性缺失與預(yù)后不良有關(guān)。

5 其它抑癌基因

DLC-1基因定位于人染色體8p21.3-p22區(qū)域，多數(shù)人體組織均有表達(dá)。DLC-1涉及乳腺癌等惡性腫瘤的發(fā)生，且與乳腺癌侵襲轉(zhuǎn)移有關(guān)。Xne等[16]檢測了257例乳腺癌標(biāo)本中的LOH，發(fā)現(xiàn)DLC-1的缺失率為50%。

P73基因定位于1p36.2-1p36.3，與P53基因具有高度的同源性，并歸為P53家族中。Neelanjana C[17]等檢測乳腺癌中的LOH情況，發(fā)現(xiàn)P73出現(xiàn)LOH是乳腺癌發(fā)生、發(fā)展過程中的早期事件。

VHL基因定位于染色體3p25-26區(qū)，基因產(chǎn)物VHL蛋白（p VHL）。VHL基因突變致p VHL降解HIF-1α的通道失活，使腫瘤VEGF水平升高，侵襲能力增強(qiáng)。Bemdt[18]等認(rèn)為VHL的LOH與Wnt/β-catenin致癌信號通路有著密切的聯(lián)系。

乳腺癌相關(guān)的抑癌基因還有很多。Brian[19]等對151篇已經(jīng)發(fā)表的相關(guān)研究進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)明顯發(fā)生LOH的區(qū)域位于染色體7q、16q、13q、17p、8p、21q、3p、18q、2q、19p區(qū)域。Thomassen[20]等對乳腺癌染色體LOH情況進(jìn)行Mata分析，發(fā)現(xiàn)在1p31-21、8p22-21、及14q24區(qū)域呈低表達(dá)，1q41-42、8q24、12q14、16q22、 16q24、17q12-21.2、17q21-23、17q25、20q11和20q13呈高表達(dá)；認(rèn)為位于1p31的DIRAS3，位于8p21-22的PSD3、LPL、EPHX2以及位于14q24的FOS是候選抑癌基因，而位于8q24的RECQL4，位于16q22的PRMT7，位于16q24的GINS2以及位于20q13的AURKA則是潛在的促腫瘤轉(zhuǎn)移基因。

綜上所述，抑癌基因的雜合性缺失在癌前病變中已有發(fā)生，是乳腺癌發(fā)生的早期改變并促進(jìn)乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展。與乳腺癌的組織學(xué)分期、雌、孕激素受體的表達(dá)水平、淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移等有著明顯的相關(guān)性。因此，對乳腺癌雜合性缺失的研究對進(jìn)一步從分子水平闡述乳腺癌的發(fā)生機(jī)制尋找新的抑癌基因，以及評定乳腺癌的發(fā)展、預(yù)后等方面具有重大的意義。

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