?；撬釋?duì)肉仔雞生長(zhǎng)性能、消化器官和免疫器官發(fā)育的影響

黃春喜 袁建敏 周淑亮 王 波

?；撬峄瘜W(xué)名稱為 2-氨基乙磺酸,是動(dòng)物體內(nèi)含量豐富的游離含硫氨基酸之一。?；撬崮芘c膽汁酸結(jié)合形成?；悄懰崽岣咧纠肹1],在機(jī)體內(nèi)還參與滲透壓調(diào)節(jié)、防止 Ca2+超載和增強(qiáng)免疫,維護(hù)質(zhì)膜的穩(wěn)定,并與腦、視網(wǎng)膜和神經(jīng)發(fā)育有重要關(guān)系[2-3]。由于玉米 -豆粕型飼糧?；撬岷繕O低[4],而肉仔雞生長(zhǎng)早期合成?；撬岬哪芰τ植蛔?繼而影響其生長(zhǎng)性能[5-6]。因而,滿足肉仔雞對(duì)?；撬岬臓I(yíng)養(yǎng)需要對(duì)于保證其生長(zhǎng)性能具有重要意義。先前的研究表明,在低含硫氨基酸(0.49%)的純合飼糧中添加 0.26%的?；撬?能提高 1～3周肉仔雞的增重,降低料重比[6]。而在含硫氨基酸正常水平下,添加?；撬嵋部商岣呷庾须u日增重[6-9],降低料重比[9-11],這可能與其促進(jìn)油脂的吸收利用[8]、提高脂肪酶活性[12]和提高肉仔雞早期的卵黃囊吸收[13]有關(guān),但也有研究表明?；撬峥山档偷半u的蛋重[14],降低肉仔雞小腸長(zhǎng)度和重量[15],對(duì)肉仔雞生長(zhǎng)性能沒(méi)有影響[16]。正常含硫氨酸水平飼糧中是否需要添加牛磺酸尚存在一定爭(zhēng)議,它在肉仔雞飼糧中的添加效果也有待于進(jìn)一步研究。因此,本文旨在通過(guò)在玉米 -豆粕型飼糧中添加不同水平的?；撬?研究其對(duì)肉仔雞的生長(zhǎng)性能、消化器官和免疫器官發(fā)育的影響,為確定牛磺酸在肉仔雞飼糧中的合理利用提供理論指導(dǎo)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物與藥品

選用體重均勻、健康的 1日齡愛(ài)拔益加(AA)肉雞父母代母系公雛 250只。試驗(yàn)用牛磺酸購(gòu)自石家莊瑞田生化有限公司,純度≥99%。

1.2 試驗(yàn)分組與飼糧

本試驗(yàn)采用單因素完全隨機(jī)設(shè)計(jì)。試驗(yàn)雞只隨機(jī)分成 5組,每組 5個(gè)重復(fù),每個(gè)重復(fù) 10只雞。雞只初始體重經(jīng)方差分析,差異不顯著(P＞0.05)。對(duì)照組飼喂基礎(chǔ)飼糧,試驗(yàn)組飼喂基礎(chǔ)飼糧中添加 0.25、0.50、1.00、2.00 g/kg?；撬岬脑囼?yàn)飼糧,添加方式為替代基礎(chǔ)飼糧中的麥飯石?；A(chǔ)飼糧參考 NY/T 33—2004肉雞營(yíng)養(yǎng)推薦量配制,其組成及營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表 1。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成與營(yíng)養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))Table 1 Composition and nutrient levels of basal diets(air-dry basis) %

1.3 飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)雞采用籠養(yǎng),乳頭飲水器供水,人工喂料并保持自由采食,料型為粉料;24 h光照,保持良好通風(fēng)。試驗(yàn)期為 6周,日常管理與衛(wèi)生防疫按常規(guī)進(jìn)行,定時(shí)清理衛(wèi)生,定期進(jìn)行舍內(nèi)消毒。試驗(yàn)期間,詳細(xì)記錄雞只的死亡、淘汰和發(fā)病情況。

1.4 測(cè)定指標(biāo)與方法

1.4.1 生長(zhǎng)性能

7、22、42日齡空腹 7～8 h后測(cè)定各組各重復(fù)的體重,同時(shí)記錄各階段的耗料量。計(jì)算各階段末體重(BW)、平均日采食量(ADFI)、平均日增重(ADG)和料重比(F/G)。

1.4.2 器官相對(duì)重量

7、22和 44日齡每組選擇體重接近平均體重的肉仔雞 10只(每個(gè)重復(fù) 2只),稱空腹體重后屠宰,分離肝臟、胰腺、膽囊、腺胃、肌胃(去外部脂肪和內(nèi)容物)、胸腺、法氏囊和脾臟,稱重。計(jì)算各消化器官的相對(duì)重量和免疫器官指數(shù),消化器官相對(duì)重量 =消化器官重量(g)/[100×體重(g)],免疫器官指數(shù) =免疫器官重量(g)/體重(kg)。胰腺稱重后,經(jīng)液氮冷凍后于 -30℃冰箱中保存,用于消化酶活性測(cè)定。

1.4.3 胰腺消化酶活性

樣品處理:稱取 1 g左右的胰腺中段組織,按W/V=1/10的比例,加入 10 mL去離子水。冰浴下勻漿 30 s。勻漿液在 20 000×g 4℃的條件下離心 15 min,取上清液于 -30℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

胰淀粉酶活性測(cè)定:胰腺中淀粉酶活性的測(cè)定按照安永義[17]修改的方法,本文條件修改為37℃水浴 3 min,底物為馬鈴薯淀粉。1個(gè)淀粉酶活性單位相當(dāng)于溫度 37℃、pH 6.9條件下,從可溶性淀粉中釋放出 1μmol還原物質(zhì)(以麥芽糖計(jì)算)所需的酶量。

胰蛋白酶活性測(cè)定:胰蛋白酶原的激活是加入相同體積的 0.1%腸激酶 Tris緩沖液,37℃保溫 60 min,腸激酶緩沖液是將腸激酶(Sigma,E0632)溶解于 0.1 mol/L Tris緩沖液中,pH 7.20,內(nèi)含 0.1 mol/L的 CaCl2。按照安永義[16]的測(cè)定方法,BAPNA(Sigma,B4875)作為底物,水浴反應(yīng)溫度修改為 37℃。1個(gè)胰蛋白酶活性單位定義為在溫度 37℃、p H 7.8條件下,每分鐘分解產(chǎn)生0.1μmol對(duì)硝基苯胺所需的酶量。

胰腺組織上清液中的蛋白質(zhì)測(cè)定采用 Folin-酚法[18],小牛血清白蛋白作為標(biāo)準(zhǔn)物,酶活性表示為 U/mg蛋白。

1.5 統(tǒng)計(jì)分析

利用 SPSS 16.0進(jìn)行方差分析,部分百分?jǐn)?shù)數(shù)據(jù)經(jīng)過(guò)反正弦轉(zhuǎn)換后分析。采用 One-way ANOVA進(jìn)行方差分析,對(duì)差異顯著的數(shù)據(jù)進(jìn)行 LSD多重比較;同時(shí)分析不同添加水平間線性和二次曲線概率值,差異顯著者列出回歸方程。以 P＜0.05作為檢驗(yàn)各項(xiàng)數(shù)據(jù)差異的顯著性水平,P＜0.01為差異極顯著,P＜0.10為有變化趨勢(shì)。

2 結(jié) 果

2.1 生長(zhǎng)性能

由表 2可知,?；撬釋?duì) 1～7日齡、8～22日齡、23～42日齡 3個(gè)階段肉仔雞的體重、平均日增重、平均日采食量和料重比均無(wú)顯著影響(P＞0.05),但隨著添加水平增加,其線性降低了 1～7日齡肉仔雞的料重比(P＜0.05)。

2.2 消化器官相對(duì)重量

由表 3可知,飼糧中添加不同水平?；撬釋?duì)7、22和 44日齡肉仔雞的肝臟 、胰臟、肌胃 、腺胃和膽囊的相對(duì)重量均沒(méi)有影響顯著(P＞0.05)。但是隨添加水平增加,?；撬釁s線性降低了 22日齡肉仔雞胰臟的相對(duì)重量(P=0.05),44日齡肉仔雞胰臟的相對(duì)重量也有先降低后升高的二次曲線關(guān)系(P＜0.05);?；撬嵊芯€性提高 44日齡肉仔雞肝臟和線性降低 44日齡肉仔雞膽囊相對(duì)重量的趨勢(shì)(P＜0.10)。劑量效應(yīng)擬合曲線顯示,添加量為 0.99 g/kg時(shí),對(duì) 44日齡肉仔雞胰臟抑制效應(yīng)最大(表 4)。

2.3 胰腺消化酶活性

由表 5可知,飼糧中添加不同水平?；撬犸@著影響 7日齡和 22日齡肉仔雞胰蛋白酶活性,其中 7日齡 1.00 g/kg組肉仔雞胰蛋白酶活性顯著降低(P＜0.05),但 22日齡肉仔雞 0.25 g/kg組和 2.00 g/kg組分別比對(duì)照組顯著提高了26.74%和 24.03%(P＜0.01),且添加后整體呈現(xiàn)線性升高的趨勢(shì)(P＜0.10);而且,牛磺酸還線性提高了22日齡肉仔雞胰淀粉酶活性(P＜0.05),各試驗(yàn)組依次比對(duì)照組提高了9.91%、11.50%、11.50%和 19.65%,但是各組之間差異不顯著(P＞0.05)。?；撬釋?duì) 7日齡和 44日齡肉仔雞的胰淀粉酶活性和 44日齡肉仔雞胰蛋白酶活性影響均不顯著(P＞0.05)。

表2 飼糧中添加不同水平?；撬釋?duì)肉仔雞生長(zhǎng)性能的影響Table 2 Effects of dietary taurine on growth performance of broilers

表3 飼糧中添加不同水平?；撬釋?duì)肉仔雞消化器官相對(duì)重量的影響Table 3 Effects of dietary taurine on the relative weight of digestive organs of broilers %

表4 回歸方程Table 4 Regression equation

表5 飼糧中添加不同水平牛磺酸對(duì)肉仔雞胰腺消化酶活性的影響Table 5 Effects of dietary taurine on the activities of digestive enzymes in pancreas of broilers U/mg

2.4 免疫器官指數(shù)

由表 6可知,飼糧中添加不同水平的?；撬峋€性提高了 7日齡肉仔雞胸腺指數(shù)(P＜0.05),對(duì) 22日齡肉仔雞胸腺指數(shù)有顯著提高作用(P＜0.05),對(duì) 44日齡肉仔雞胸腺指數(shù)沒(méi)有顯著影響 (P＞0.05)。?；撬釋?duì)各日齡肉仔雞脾臟指數(shù)和法氏囊指數(shù)均無(wú)顯著影響(P＞0.05)。

表6 飼糧中添加不同水平牛磺酸對(duì)肉仔雞免疫器官指數(shù)的影響Table 6 Effects of dietary taurine on the indices of immune organs of broilers g/kg

3 討 論

3.1 ?；撬釋?duì)肉仔雞生長(zhǎng)性能的影響

本試驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn),在玉米 -豆粕(無(wú)魚(yú)粉)型飼糧中逐漸增加?；撬崴胶?1～7日齡肉仔雞料重比線性下降,與 Tufft等[8]、何天培等[7]的結(jié)果基本一致,進(jìn)一步證明了添加牛磺酸具有一定的降低肉仔雞早期料重比的作用。這可能與?；撬岣纳萍仪菰缙谥纠?促進(jìn)卵黃囊吸收或與肉仔雞早期需要量高有關(guān)[12]。

本試驗(yàn)還發(fā)現(xiàn)添加?；撬釋?duì) 8～44日齡肉仔雞生長(zhǎng)性能沒(méi)有顯著影響。先前的研究發(fā)現(xiàn)含 5.4%的牛油且含硫氨基酸處于臨界水平的肉仔雞飼糧中添加 0～0.2%的?；撬崮茱@著降低 3～6周料重比[10],添加 0.025%牛磺酸能顯著降低玉米 -小麥 -豆粕(加玉米油)型飼糧 0～6周的料重比[19],而玉米 -豆粕(加豆油)型飼糧中添加 0.05%的?；撬崮芙档往g鶉育雛期、育成期和全期的料重比[11],且 Tufft等[8]研究發(fā)現(xiàn)玉米 -豆粕(加禽脂)型火雞飼糧中添加?；撬犸@著提高了 14日齡火雞的脂肪沉積和 0～3周料重比。但 Miller等[16]發(fā)現(xiàn)含 4.8%牛油的飼糧中添加 0、0.2%、0.4%和 0.6%的?；撬?對(duì)肉仔雞(公)1、2和 3周齡時(shí)的生長(zhǎng)速度和飼料效率均無(wú)顯著影響。上述結(jié)果說(shuō)明,?；撬釋?duì)脂肪利用的改善與肉仔雞周齡和脂肪酸來(lái)源有關(guān),添加牛磺酸可以改善肉仔雞生長(zhǎng)早期對(duì)飽和脂肪酸含量低的脂肪(如植物油和禽油)的利用,但并不能改善肉仔雞早期對(duì)飽和脂肪酸含量高的牛油的利用,但可以改善肉仔雞后期對(duì)牛油的利用。本試驗(yàn)中采用的是添加豆油的玉米 -豆粕型飼糧,而先前的研究表明添加?；撬釋?duì) 3周齡和 6周齡肉仔雞玉米 -豆粕 -豆油型飼糧中的脂肪酸消化率沒(méi)有顯著影響[15],說(shuō)明玉米 -豆粕 -豆油型飼糧并不需要添加牛磺酸來(lái)改善脂肪的消化和利用,從而,對(duì) 7日齡后肉仔雞生長(zhǎng)性能并沒(méi)有改善效果。

此外,Anderson等[6]發(fā)現(xiàn)在低含硫氨基酸(0.49%)的純合飼糧中添加 0.26%?；撬?能提高1～3周肉仔雞的增重,降低料重比。在肉雛雞飼糧中添加含硫化合物也具有類似的促生長(zhǎng)作用,可能與其參與?；撬岷铣捎嘘P(guān)[5]。Lee等[20]發(fā)現(xiàn)?；撬?0.3%和 0.4%)通過(guò)降低耗料量而降低 0～3周料重比,說(shuō)明添加?；撬峥赡軙?huì)抑制肉仔雞采食量,并且蛋氨酸水平與?；撬岢尸F(xiàn)顯著的互作效應(yīng)。還有研究認(rèn)為,飼糧中添加蛋氨酸有利于牛磺酸的合成,提高雛雞肝臟的?；撬岷?而半胱氨酸則會(huì)抑制無(wú)機(jī)硫的利用,降低其含量[5]。不同文獻(xiàn)報(bào)道的試驗(yàn)結(jié)果不一致可能還與含硫氨基酸水平不同有關(guān)。本研究使用的玉米 -豆粕(無(wú)魚(yú)粉)型飼糧中含硫氨基酸含量滿足 NY/T 33—2004營(yíng)養(yǎng)推薦量,添加?；撬釋?duì)后期生長(zhǎng)性能的改善效果并不理想,說(shuō)明飼糧滿足含硫氨基酸需要量時(shí)可能沒(méi)有必要再添加牛磺酸。

3.2 牛磺酸對(duì)肉仔雞消化器官發(fā)育的影響

本試驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)?；撬峤档土?22日齡和 44日齡肉仔雞胰臟相對(duì)重量,0.99 g/kg對(duì) 44日齡肉仔雞胰臟抑制效應(yīng)最大。有研究發(fā)現(xiàn)添加 0.06%的?；撬崮懰徕c會(huì)降低雛火雞的胰腺重量和胰腺分泌的總脂肪酶活性[21]。由于?；撬嵩隗w內(nèi)可以結(jié)合膽汁酸形成?；悄懰?所以兩者導(dǎo)致胰腺萎縮的結(jié)果具有一致性。胰腺重量的下降可能會(huì)導(dǎo)致消化酶分泌總量不足,消化能力下降。而一些研究也表明?；撬峥赡軐?duì)組織器官和機(jī)體生長(zhǎng)具有一定的條件毒性:人服用含?；撬岬膹?fù)合藥物或飲料后會(huì)出現(xiàn)便秘、嘔吐和腹瀉等胃腸不適癥狀[22];0.05%的?；撬釙?huì)降低肉雞小腸長(zhǎng)度和重量,降低腸道黏膜比率[15];在飲水中加入高劑量(超過(guò) 0.5%)?；撬釙?huì)使大鼠生長(zhǎng)受到抑制,使小鼠授乳母鼠和仔鼠的死亡率增加,而小劑量(0.2%)牛磺酸則可提高小鼠新生仔鼠的存活率[23]。

本試驗(yàn)中 22日齡肉仔雞胰腺的蛋白酶和淀粉酶活性均有所升高,其中胰蛋白酶達(dá)到顯著水平。雖本試驗(yàn)未測(cè)定胰腺脂肪酶活性,但有研究發(fā)現(xiàn)添加?；撬峥梢蕴岣?21日齡肉仔雞胰腺脂肪酶活性[12];還可提高 3周齡肉仔雞空腸食糜中脂肪酶的活性[15]。這會(huì)在一定程度上補(bǔ)償此時(shí)胰腺重量下降造成的消化酶分泌量不足。

3.3 ?；撬釋?duì)肉仔雞免疫器官發(fā)育的影響

胸腺、脾和法氏囊參與機(jī)體的細(xì)胞免疫和體液免疫,是禽類的主要免疫器官。研究表明,可以用胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)和法氏囊指數(shù)來(lái)評(píng)價(jià)家禽的免疫狀態(tài)。前人研究發(fā)現(xiàn),添加 0.10%?；撬崮芴岣呷庾须u脾臟指數(shù)和法氏囊指數(shù),而胸腺指數(shù)未見(jiàn)顯著變化[7,24];0.15%牛磺酸能提高 3周齡肉仔雞的脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù)[24];添加 0.01%、0.05%?；撬峥商岣啭g鶉的胸腺指數(shù)和法氏囊指數(shù),但對(duì)脾臟指數(shù)影響不顯著[11]。還有研究表明,0.25%?；撬崮軌蛱岣?6周齡肉仔雞的新城疫抗體滴度[20]。本試驗(yàn)中 7日齡和 22日齡肉仔雞的胸腺指數(shù)均顯著提高,而脾臟指數(shù)和法氏囊指數(shù)未見(jiàn)提高,與前人結(jié)果相似。這些結(jié)果說(shuō)明,?；撬峥赡軙?huì)有利于改善肉仔雞的免疫機(jī)能。

4 結(jié) 論

①在正常含硫氨基酸水平飼糧中,添加?；撬峥删€性降低肉仔雞早期(1～7日齡)料重比,但對(duì)其7日齡后的生長(zhǎng)性能沒(méi)有顯著改善作用。

②在 AA肉仔雞飼糧中添加?；撬峥梢种?22日齡和 44日齡肉仔雞的胰腺發(fā)育,提高 7日齡和22日齡肉仔雞的胸腺指數(shù)。

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