中藥利濕活血方對(duì)酒精性腎損害大鼠尿單核細(xì)胞趨化蛋白-1及β2-微球蛋白的影響*

陶小紅,呂曉云,邱 皓,劉 文,滕玉蓮,劉明龍

(1.甘肅省第二人民醫(yī)院腎內(nèi)科 ,甘肅蘭州 730000;2.蘭州大學(xué),甘肅蘭州 730000; 3.蘭州大學(xué)第一醫(yī)院 ,甘肅蘭州 730000)

酒精可損害全身多臟器功能,肝臟、小腸、胃、胰腺、神經(jīng)系統(tǒng)等均可不同程度受累[1-2]。近些年來,酒精對(duì)腎臟的損害也開始被人們關(guān)注。乙醇極易吸收入血,體內(nèi)代謝過程中氧化耗能、離子紊亂和代謝產(chǎn)物的毒性均可導(dǎo)致以腎小管-間質(zhì)損害為主的病理改變[3],而慢性腎小管 -間質(zhì)損害最終會(huì)進(jìn)展至腎間質(zhì)纖維化。腎纖維化是多種慢性腎病的共同病理基礎(chǔ),是慢性腎病向終末期腎病進(jìn)展的重要途徑。本研究在建立動(dòng)物模型的同時(shí),以復(fù)方中藥活血利濕方(huoxue lishi prescrip tion,HLP)灌胃處理大鼠,觀察HLP對(duì)酒精性腎損害大鼠的保護(hù)作用,以期為酒精性腎損害尋求一種理想的中醫(yī)藥防治措施。

1 材料與方法

1.1 動(dòng) 物

清潔級(jí)Wistar大鼠66只,雄性,體質(zhì)量(178± 18)g,由蘭州大學(xué)醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供,動(dòng)物質(zhì)量合格證號(hào):甘動(dòng)準(zhǔn)14-006。

1.2 藥品與試劑

HLP由黃芪、當(dāng)歸、紅花、連翹、白茅根、薏苡仁等藥物組成,水煎制劑,由蘭州大學(xué)藥學(xué)院生藥研究所監(jiān)制。血清尿素氮(BUN)、血清肌酐(Scr)、尿β2-微球蛋白(β2-microglobulin,β2-MG)試劑盒,均由南京建成生物工程研究所提供,批號(hào)依次 161278-01,161778-01,20100402;大鼠單核細(xì)胞趨化蛋白-1(monocyte chemoatt-ractant protein-1、MCP-1)試劑盒,R＆D公司產(chǎn)品,批號(hào)GD20100511;無水乙醇,為分析純,沈陽化學(xué)試劑廠產(chǎn)品,批號(hào)20100412。

1.3 動(dòng)物分組與模型的建立

參照文獻(xiàn)[4]將Wistar大鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組 18只、模型對(duì)照組 24只、中藥組 24只。正常對(duì)照組給予生理鹽水 20 mL灌胃,3次/d,共 12周。模型對(duì)照組給予乙醇灌胃造模,3次/d,共12周,其中第1—4周每日400 mL/L乙醇8 g/(kg·d);第5—8周每日500m L/L乙醇9 g/(kg·d),第9—12周每日500 mL/L乙醇10 g/(kg·d)。中藥組在造模的同時(shí),于第 2周開始,加用活血利濕方水煎劑每日4m L/kg,分2次灌胃,共12周。

1.4 檢測指標(biāo)

1.4.1 一般情況

觀察各組大鼠活動(dòng)狀態(tài),毛發(fā)光澤度,進(jìn)食、飲水情況、體質(zhì)量變化及呼吸情況。

1.4.2 血BUN、Scr

于第 4,8,12周末從大鼠眼底靜脈叢采集血樣,分離血清,分別以脲酶 -波氏比色法、苦味酸法測定BUN、Scr。

1.4.3 尿MCP-1及β2-MG

于第 4,8,12周末以代謝籠收集大鼠尿液樣品,按試劑盒說明以ABC-ELISA法檢測尿MCP-1,以放射免疫法檢測β2-MG。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)行單因素方差分析。數(shù)據(jù)以均數(shù)(BZ_139_2138_999_2156_1045)±標(biāo)準(zhǔn)差(s)表示,兩組間比較用Q檢驗(yàn)。以P＜0.05為差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 HLP對(duì)酒精性腎損害大鼠一般情況的影響

正常對(duì)照組大鼠無異常表現(xiàn)。模型對(duì)照組大鼠大多表現(xiàn)為毛色晦暗,被毛松亂,食欲不佳,行動(dòng)、反應(yīng)遲鈍,呼吸節(jié)律不整,少數(shù)出現(xiàn)抽搐、癲癇樣發(fā)作,且隨著灌胃時(shí)間的延長而明顯。中藥組大鼠被毛較細(xì)膩、柔順、有光澤,行動(dòng)、反應(yīng)較活躍,呼吸較平穩(wěn),進(jìn)食及飲水量較正常對(duì)照組略減少,少數(shù)表現(xiàn)為運(yùn)動(dòng)平衡能力下降、四肢無力。第 12周末模型對(duì)照組與中藥組大鼠體質(zhì)量分別為(206±22)g、(223± 24)g,均低于正常對(duì)照組(265±28)g,差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。表明造模成功,模型對(duì)照組大鼠已出現(xiàn)形態(tài)、外觀及生理活動(dòng)的改變,經(jīng)過中藥處理后上述改變有所減輕。

2.2 HLP對(duì)酒精性腎損害大鼠腎功能的影響

與正常對(duì)照組對(duì)比,模型對(duì)照組大鼠血清BUN、Scr升高,差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。與模型對(duì)照組對(duì)比,中藥組BUN、Scr降低,差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05或P＜0.01)。見表1。

表1 各組大鼠BUN、Scr變化對(duì)比 mmol·L-1,±s

表1 各組大鼠BUN、Scr變化對(duì)比 mmol·L-1,±s

注:與正常對(duì)照組對(duì)比,**P＜0.01;與模型對(duì)照組對(duì)比,#P＜0.05,##P＜0.01。

?

2.3 HLP對(duì)酒精性腎損害大鼠尿MCP-1、β2-MG的影響

與正常對(duì)照組對(duì)比,模型對(duì)照組尿 MCP-1、β2-MG水平升高,差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。與模型對(duì)照組對(duì)比,中藥組尿MCP-1、β2-MG降低,差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05和P＜0.01)。見表2。

表2 HLP對(duì)大鼠尿MCP-1、β2-MG變化的影響 ±s

表2 HLP對(duì)大鼠尿MCP-1、β2-MG變化的影響 ±s

注:與正常對(duì)照組對(duì)比,**P＜0.01;與模型對(duì)照組對(duì)比,#P＜0.05,##P＜0.01。

?

3 討 論

腎臟的血液供應(yīng)豐富,容易導(dǎo)致乙醇、乙醛的蓄積、濃縮。當(dāng)飲酒超過了肝臟的代謝能力時(shí),腎臟的負(fù)荷會(huì)明顯增加,發(fā)生代謝功能紊亂;此外,毒性的代謝產(chǎn)物等可造成腎小管 -間質(zhì)損害。酒精性腎臟損害主要是酒精導(dǎo)致了腎間質(zhì)纖維化的產(chǎn)生[5]。在多種腎臟疾病中,普遍存在隨腎間質(zhì)損傷的加重,腎間質(zhì)區(qū)單核/巨噬細(xì)胞浸潤聚集、MCP-1陽性細(xì)胞增多和MCP-1表達(dá)增強(qiáng),尿MCP-1水平升高。此提示MCP-1通過趨化和激活單核/巨噬細(xì)胞的雙重作用,參與腎臟疾病的發(fā)生、發(fā)展,且突出表現(xiàn)在腎小管間質(zhì)的損傷方面[6-7]。尿 β2-MG升高可較敏感的反映近端腎小管重吸收功能受損,如腎小管 -間質(zhì)性疾病、藥物或毒物或所致早期腎小管損傷等。本研究結(jié)果顯示,隨著酒精刺激時(shí)間的延長和劑量的不斷加大,模型對(duì)照組大鼠精神、活動(dòng)等狀況明顯較正常對(duì)照組差,腎功能損害逐漸加重,同時(shí)伴隨尿MCP-1和β2-MG水平升高。經(jīng)中藥活血利濕方灌胃干預(yù)處理,上述異常改變均明顯得以修復(fù),各項(xiàng)指標(biāo)接近正常對(duì)照組。

活血利濕方中黃芪、當(dāng)歸、枸杞益氣養(yǎng)血,當(dāng)歸、紅花活血化瘀,連翹、白茅根、薏苡仁清利濕熱。諸藥合用,共奏扶正祛邪之效。國內(nèi)研究證實(shí),中醫(yī)學(xué)范疇內(nèi)的“血瘀證”與腎纖維化密切相關(guān)[8],黃芪、當(dāng)歸等補(bǔ)益藥為主組成的復(fù)方以及化瘀解毒類中藥具有明顯的抗腎纖維化作用[8-10]。本研究證實(shí),活血利濕方對(duì)持續(xù)酒精暴露大鼠的整體不良狀況具有較好的調(diào)節(jié)作用,體現(xiàn)了中醫(yī)學(xué)整體觀念及方劑理論的優(yōu)勢;該方對(duì)酒精性腎損害具有較好的保護(hù)作用,有良好的抗酒精性腎纖維化潛能,其機(jī)制可能是通過降低尿MCP-1和β2-MG水平來實(shí)現(xiàn)的。有關(guān)活血利濕方干預(yù)酒精性腎損害的機(jī)制尚需進(jìn)一步深入研究。

[1]王炳元,孔琪,傅寶玉,等.血清轉(zhuǎn)鐵蛋白微小變異的測定及其臨床意義[J].中華肝臟病雜志,1995,3(4): 2141-2142.

[2]王炳元,傅寶玉.酒精性肝病患者中樞和周圍神經(jīng)改變[J].世界華人消化雜志,2000,8(4):4771-4773.

[3]Vamvakas S,Teschner M,Bahner U,et al.Alcohol abuse:potential role in electrolyte disturbances and kidney diseases[J]. Clin Nephrol,1998,49(4):2051-2054.

[4]晏子友,皮持衡,高書亮,等.化瘀解毒湯抗腎間質(zhì)纖維化的實(shí)驗(yàn)研究[J].中國中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)雜志,2001,7(9): 35-38.

[5]曹艷雪,王炳元,傅寶玉.酒精性肝腎損害及腎層粘連蛋白、Ⅲ型膠原的表達(dá)[J].世界華人消化雜志,2001,9 (10):1134-1137.

[6]Wada T,Furuichi K,Sakai N,et al.Gene therapy via b lockade ofmonocyte chemoattractant protein-1 for rental fibrosis[J].JAm Soc Nephrol,2004,15(4):940-948.

[7]Liu YH.Epithelial tomesenchymal transition in renal fibrogenesis:pathologic significance,molecularmechanism,and therapeutic intervention[J].J Am Soc Nephrol,2004,15 (1):1-12.

[8]趙建榮,屈磊,李曉玫.黃芪當(dāng)歸合劑對(duì)梗阻性腎病大鼠腎間質(zhì)纖維化的防治作用[J].北京大學(xué)學(xué)報(bào):醫(yī)學(xué)版, 2004,36(2):119-123.

[9]黃海長,閡業(yè)麗,土海燕,等.黃芪當(dāng)歸合劑及依那普利對(duì)CTGF在腎間質(zhì)纖維化中表達(dá)的比較研究[J].中華腎臟病雜志,2003,19(3):133-136.

[10]朱辟疆,韋先進(jìn),周遜,等.腎衰康抗腎間質(zhì)纖維化的實(shí)驗(yàn)研究[J].中國中西醫(yī)結(jié)合急救雜志,2003,10(6): 346-349.