染料木素自乳化制劑的處方研究

李大維，柴寶麗

(哈藥集團制藥六廠，哈爾濱150056)

染料木素(genistein)為異黃酮類化合物，化學(xué)名稱為5，7，4'－三羥基黃酮(C15H10O5)，難溶于水，具有明顯防治骨質(zhì)疏松癥、心血管疾病和抗腫瘤等多種藥理作用［1］.自乳化藥物傳遞系統(tǒng)(Self－emulsifying drug delivery systems，SEDDS)是由油、表面活性劑和助溶劑組成的均一混合物，當(dāng)它進入胃腸道遇到水相介質(zhì)可在輕微攪拌和胃腸的蠕動下自發(fā)乳化形成乳劑.研究表明SEDDS的快速自發(fā)乳化和在吸收部位的高度分散能有效的提高水難溶性藥物的口服吸收［2－4］.本文通過繪制偽三元相圖和體外自乳化效率的評價來優(yōu)化染料木素自乳化制劑的處方.

1 儀器與試藥

1.1 儀器

日本島津 LC—10A高效液相色譜儀(配SPD—10紫外可見檢測器，CK chrom色譜工作站);;HZQ－C空氣振蕩器(哈爾濱市東聯(lián)電子技術(shù)開發(fā)有限公司);79HW—1型恒溫磁力攪拌器(浙江樂清樂成電器廠);LS230粒度測定儀(美國Beckman Coulter);FA2104電子天平(上海精密儀器科學(xué)有限公司).

1.2 試藥

染料木素(陜西慧科科技開發(fā)有限公司，純度＞98%);染料木素對照品(中國藥品生物制品檢定所);染料木素普通膠囊(染料木素50 mg，微晶纖維素75 mg，羧甲基淀粉鈉75 mg);Cremophor EL 35(BASF公司);油酸乙酯(北京長城化學(xué)試劑有限公司);Tween 80(北京益利精細化學(xué)品有限公司);Transcultol P(法國佳法賽公司);其他試劑均為分析純.

2 實驗方法與結(jié)果

2.1 SEDDS的制備

稱取適量的染料木素，加入處方量的油相、乳化劑和助溶劑，在40°C，100 r/min空氣振蕩器中振蕩24 h左右使染料木素完全溶解.

2.2 相圖的繪制:

采用偽三元圖的方法，分別以油酸乙酯和Miglyol812為油相、吐溫80(Tween 80)和T50C50(50% Tween80－50%Cremophor EL35)為乳化劑、Transcultol P為助溶劑，以油相、乳化劑和助乳化劑各為一邊，所有處方中染料木素的質(zhì)量分數(shù)均為輔料的10%，按“2.1”項下配制藥液，所得藥液室溫放置48 h，通過外觀觀察是否產(chǎn)生分層現(xiàn)象，將可形成均一、透明藥液的處方確定為可形成自乳化區(qū)域的點.

自乳化制劑處方中，助溶劑占0～30%(w)，在本研究中選擇Transcultol P作為助溶劑，主要作用是溶解藥物，其占輔料總重的5%以上.當(dāng)Transcultol P的比例過高，不利于軋制軟膠囊，因此篩選助溶劑的比例在5%～25%范圍內(nèi)，表面活性劑占輔料總重的30%～70%(w)，由圖1可見，以T50C50(50%Tween80－50%Cremophor EL35)為混合乳化劑所形成的自乳化區(qū)域略大于以Tween80單獨作為乳化劑，以油酸乙酯(Ethyl oleate)為油相時所形成的自乳化區(qū)域遠大于以Miglyol 812為油相.因此在進一步研究中選定油酸乙酯為油相，比較乳化劑種類和乳化劑用量對處方的影響.

圖1 偽三元相圖(實心的方形代表所作的處方，用線所圍成的區(qū)域為可形成自乳化的區(qū)域)

2.3 體外自乳化效率

精密取0.2 mL上述所配溶液，加入100 mL 37℃的蒸餾水，用磁力攪拌器低速溫和攪拌，肉眼觀察所配溶液完全乳化的時間和所形成乳劑最后形態(tài)，所有實驗均重復(fù)2遍，見表1.

表1 不同染料木素自乳化制劑的自乳化效率評價

在所考察的處方中自乳化時間隨著乳化劑含量的增加先減小后增大，在乳化劑質(zhì)量分數(shù)為55%和50%時，自乳化時間最短，這可能是由于乳化劑質(zhì)量分數(shù)較大時，黏度對乳化速度的影響較大，而當(dāng)乳化劑質(zhì)量分數(shù)較小時，乳化劑質(zhì)量分數(shù)對乳化速度起主要作用.不同乳化劑(Tween80，T50C50)對自乳化時間無顯著的影響，但當(dāng)乳化劑的用量較低時對外觀有顯著的影響，以Tween 80為乳化劑用量為45%時，所形成乳劑呈淺白色，以T50C50為乳化劑用量為40%時，所形成乳劑仍呈淡藍色.由于SEDDS處方中使用了大量的表面活性劑，長期服用可能對機體產(chǎn)生毒性，而助溶劑可能與膠囊殼相互作用導(dǎo)致藥物滲出，故在表面活性劑量和助溶劑量盡可能小的前提下，以自乳化速率較大及乳化后的粒徑較小為原則，最終確定處方為油酸乙酯－T50C50－丙二醇質(zhì)量比為45∶45∶10.

2.4 乳滴粒徑的測定

取含質(zhì)量分數(shù)分別為5%、10%和20%的染料木素自乳化制劑，用不同的介質(zhì)(蒸餾水，0.1 mol/ L鹽酸和pH值為6.8磷酸鹽緩沖液)稀釋100倍后，測定其粒徑，結(jié)果見表2.可見，不同的乳化介質(zhì)對后乳滴的粒徑基本沒有影響.隨著藥物的增加，乳滴的粒徑有所增加，但沒有明顯的區(qū)別.當(dāng)載藥量達到20%時，有藥物析出，為了確保制劑的穩(wěn)定性，最終選擇含藥量為10%.

2.5 樣品含染料木素量測定

色譜條件:色譜柱為Diamonsil C18柱(200 mm ×4.6 mm I.D.，5 μm);以甲醇－0.05%磷酸(60∶40)為流動相;流速為1.0 mL/min;檢測波長為260 nm，柱溫為30℃，進樣量為10 μL.

表2 染料木素自乳化制劑在不同介質(zhì)中的粒徑

色譜系統(tǒng)適應(yīng)性:標(biāo)準(zhǔn)曲線:A=20 456 C+ 20.465(r=0.999 8);線性范圍:0.1～5 μg/mL;日內(nèi)和日間精密度分別為0.84%和1.25%;回收率為99.1%，RSD=1.2%;空白輔料不影響測定.

含量測定方法:精密稱定適量染料木素自乳化制劑(約含染料木素50 mg)置50 mL量瓶中，用甲醇溶解定容，搖勻，0.45 μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液.取供試品溶液10 μL進行HPLC測定.結(jié)果見表3.

表3 樣品含染料木素量測定結(jié)果(n=3)

3 討論

由于染料木素溶解后呈黃色，本文通過觀察染料木素溶解后溶液的顏色來判斷溶解程度，結(jié)果表明染料木素在Transcultol P中的溶解度遠大于其他所選的輔料，因此選用Transcultol P作為助溶劑.

自乳化效率指的是自乳化系統(tǒng)自發(fā)形成乳劑的能力，包括乳化速率和乳化后所得乳劑的粒徑.自乳化速率是評價SEDDS自發(fā)形成乳劑的能力的一個重要指標(biāo)，可以通過目測觀察，電導(dǎo)或濁度的變化來檢測［5］.本研究通過目測觀察SEDDS在溶液中完全分散所需的時間，即自乳化時間，并通過肉眼觀察所形成乳劑的澄明度，來比較處方組成對制劑的影響.

Pouton［6］指出使用親水性表面活性劑與親油性表面活性劑的混合物可以產(chǎn)生有效的乳化，增加處方中藥物的溶解能力，Li P等研究表明使用混合表面活性劑Tween20－Cremophor EL(50∶50)作為氟比洛芬自乳化制劑的乳化劑，體系的乳化效率遠大于單獨使用Tween20和Cremophor EL，同時可增大載藥量，提高制劑的穩(wěn)定性［7－8］.

［1］ 黃 枚，陳利銘.染料木素防治癌癥的研究進展［J］.海峽藥學(xué)，2000，12(3):9－10.

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［3］ GURSOY R N，BENITA S.Self-emulsifying drug delivery systems(SEDDS)for improved oral delivery of lipophilic drugs［J］.Biomed Pharmacother.，2004，58(3):173－82.

［4］ CHARMAN S A，CHARMAN W N，ROGGE MC，et al.Self-emulsifying drug delivery systems:formulation and biopharmaceutic evaluation of an investigational lipophilic compound［J］.Pharm Res.，1992，9:87－93.

［5］ POUTON C W.Self-emulsifying drug delivery systems:assessment of the efficiency of emulsification［J］.Int J Pharm.，1985，27:335－48.

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［8］ 夏麗文，李大維，張麗杰.染料木素自乳劑的制備及溶出度研究［J］.哈爾濱商業(yè)大學(xué)學(xué)報:自然科學(xué)版，2010，26(4): 398－399，412.