高效液相色譜法測定生發(fā)素中米諾地爾含量

(第三軍醫(yī)大學(xué)西南醫(yī)院藥劑科，重慶 400038)

生發(fā)素是醫(yī)院制劑，用于治療脫發(fā)，效果顯著。其主要成分米諾地爾對毛囊生長具有直接促進(jìn)作用。筆者采用高效液相色譜法測定生發(fā)素中米諾地爾含量，旨在為控制該制劑質(zhì)量提供可靠依據(jù)。

1 儀器與試藥

Waters 810型液相色譜儀，包括Waters 510泵和Waters 2487型雙波長紫外檢測器;DU－650型紫外可見分光光度計(jì)(美國Beckman);KQ－400KDE型超聲清洗器(昆山市超聲儀器有限公司);Milli－QPlus型超純水器(美國);pH計(jì)(DELTA 320);BP 221S型電子天平(德國賽多利斯)。米諾地爾對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號為100125－200404);生發(fā)素樣品(西南醫(yī)院藥劑科自制，批號分別為080902，090108，090423);甲醇為色譜純，磷酸氫二鉀為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱:北京迪馬公司 C18柱(200 mm×4.6 mm，5 μm);流動相:0.03mol/LK2HPO4溶液(pH=3.3)－甲醇(55∶45);流速:0.9mL/min;檢測波長:287 nm;柱溫:30 ℃;進(jìn)樣量:10 μL。

2.2 溶液配制

精密稱取米諾地爾對照品10.8 mg，置100 mL容量瓶中，加甲醇適量，超聲使之溶解后用甲醇定容，得質(zhì)量濃度為0.108 g/L的對照品貯備液。精密量取生發(fā)素樣品1 mL，置10 mL容量瓶中，用甲醇定容后搖勻，再精密吸取稀釋液1 mL，用甲醇稀釋至100 mL，即得供試品溶液。按生發(fā)素溶液處方比例配制不含米諾地爾的陰性對照品溶液，按供試品溶液配制方法處理，即得陰性對照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

專屬性試驗(yàn):在上述色譜條件下，生發(fā)素樣品溶液中米諾地爾與其他成分分離較好，陰性對照品溶液不干擾米諾地爾的測定。陰性對照品溶液、對照品溶液及供試品溶液的色譜見圖1。

標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制:精密量取米諾地爾對照品貯備液0.2，0.4，0.6，0.8，1.0，1.2，1.4 mL，分別置 10 mL 容量瓶中，用甲醇定容，即得質(zhì)量濃度分別為 2.16，4.32，6.48，8.64，10.80，12.96，15.12 μg/mL 的對照品溶液。吸取上述對照品溶液各 10 μL，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖及米諾地爾的峰面積。以米諾地爾的質(zhì)量濃度對峰面積進(jìn)行回歸，得回歸方程 Y=973.036 9 X－14.286 3，r=0.999 96(n=7)。結(jié)果表明，米諾地爾質(zhì)量濃度在2.16 ～15.12 μg/mL 范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

精密度試驗(yàn):精密量取0.108 g/L的米諾地爾貯備液，分別配成質(zhì)量濃度為 8.64，10.80，12.96 μg/mL 的 3 種溶液，對各質(zhì)量濃度溶液連續(xù)測定6次，以峰面積考察其精密度，RSD分別為 0.70% ，0.85% ，0.92% ，均小于 2%;上述 3種溶液，于 0，24，48，72，96 h 時分別進(jìn)樣，每個質(zhì)量濃度連續(xù)測定3次，記錄峰面積，以峰面積考察其日間精密度，RSD 分別為 0.79%，0.86%，0.96%，均小于 2%。

加樣回收試驗(yàn):取已知含量(含米諾地爾5 μg/mL)的樣品6份，分別加質(zhì)量濃度為10.8 μg/mL的米諾地爾對照品溶液適量，制成質(zhì)量濃度分別為 4.32，5.40，6.48 μg/mL 的溶液各 2 份。按上述色譜條件進(jìn)樣，記錄色譜圖，測定峰面積，計(jì)算回收率。結(jié)果見表1。

圖1 高效液相色譜圖

檢測限和定量限確定:精密稱取干燥的米諾地爾對照品適量，配制成系列質(zhì)量濃度的樣品溶液。按信噪比 S/N=3，測得檢測限為20.4 ng/mL;按信噪比 S/N=10，測得定量限為62.4 ng/mL。

2.4 樣品含量測定

精密量取3批生發(fā)素溶液樣品1 mL，用甲醇稀釋1 000倍，分別取10 μL注入液相色譜儀，記錄峰面積，帶入回歸方程計(jì)算米諾地爾含量，結(jié)果見表2。

表2 生發(fā)素樣品含量測定結(jié)果

3 討論

本試驗(yàn)用高效液相色譜法測定生發(fā)素中米諾地爾的含量，方法快速簡便，靈敏度高。在預(yù)試驗(yàn)中，根據(jù)文獻(xiàn)[1]先后以水－甲醇(30∶70)和(40∶60)為流動相，但都不能將米諾地爾與其他成分分離，以水－甲醇(55∶45)為流動相，雖能將米諾地爾與其他成分分離，但米諾地爾有嚴(yán)重拖尾。根據(jù)文獻(xiàn)[2]將水換成KH2PO4緩沖液，米諾地爾與其他成分色譜峰分離不完全，將KH2PO4緩沖液換成K2HPO4緩沖液(pH=3.3)，由于pH的變化，米諾地爾以離子形式出峰，出峰時間提前，且能與其他成分較好分離，故采用文中的色譜條件。紫外掃描結(jié)果顯示，米諾地爾在240 nm波長處有最強(qiáng)吸收，但方中水楊酸也在240 nm波長附近有很強(qiáng)的吸收，為了避免相互干擾，選287 nm為米諾地爾的檢測波長。

[1]管繼平，王國團(tuán)，程立華.HPLC測定米諾地爾洗劑含量[J].中國醫(yī)院藥學(xué)雜志，2006，26(10):1 298.

[2]林惠強(qiáng).HPLC法測定敏樂啶洗劑中敏樂啶含量[J].海峽藥學(xué)，2008，20(2):44.