高效液相色譜法檢查骨筋丸膠囊中非法添加的松香酸

(江蘇省泰州市藥品檢驗(yàn)所，江蘇 泰州 225300)

為追求利益最大化，不法分子在某些貴重中藥材中非法添加其他成分以增重，如在血竭、沉香中添加松香酸。松香酸為天然松香樹(shù)脂的主要成分。有報(bào)道稱(chēng)，銀屑敵膠囊因非法添加松香酸而造成患者視力下降、死亡等嚴(yán)重后果。骨筋丸膠囊是由乳香、沒(méi)藥、白芍、血竭等14味中藥組成，按法定標(biāo)準(zhǔn)[1]檢驗(yàn)是符合規(guī)定的，但筆者用薄層色譜法初步斷定骨筋丸膠囊可能添加了松香酸，為此建立了用高效液相色譜(HPLC)法檢查骨筋丸膠囊中非法添加的松香酸的方法，并通過(guò)二極管陣列檢測(cè)器(DAD)加以確證，為基層打假提供了有效的檢驗(yàn)方法。

1 儀器與試藥

Waters 2695/2996/Empower高效液相色譜系統(tǒng)。松香酸對(duì)照試劑(Flvka Analytical，批號(hào)為1384624);骨筋丸膠囊(湖南某藥廠(chǎng)，批號(hào)為0902301);乙腈(色譜純)，水(超純水)，其他試劑(分析純)。

2 方法與結(jié)果

2.1 薄層色譜法

取供試品2 g，加石油醚(60～90℃)20 mL，振搖10 min，濾過(guò)，濾液濃縮至1 mL，作為供試品溶液。取松香酸對(duì)照試劑，用石油醚(60～90℃)溶解，制成0.5 g/L的對(duì)照試劑溶液。按處方量制備未添加松香酸的陰性樣品，再按供試品溶液制備方法制備成陰性對(duì)照品溶液。分別取供試品溶液、對(duì)照試劑溶液和陰性樣品溶液各5 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上，以石油醚(60～90℃)－乙酸乙酯－冰乙酸(9∶1∶0.1)為展開(kāi)劑展開(kāi)，取出晾干，置紫外燈(254 nm)下檢視。結(jié)果在供試品、對(duì)照試劑、供試品與對(duì)照試劑溶液混合點(diǎn)樣的色譜圖相應(yīng)位置上，均檢出形狀及顏色相近的熒光斑點(diǎn)，并且供試品與對(duì)照試劑溶液混合點(diǎn)樣的色譜圖中斑點(diǎn)單一、緊密，在陰性對(duì)照品溶液色譜的相應(yīng)位置上則沒(méi)有檢出熒光斑點(diǎn)(圖1)。

圖1 薄層色譜圖

2.2 HPLC 法

2.2.1 色譜條件

色譜柱:SymmetryC18柱(150mm×4.6mm，5 μm);流動(dòng)相:乙腈－0.1%甲酸(75 ∶25);檢測(cè)波長(zhǎng):241nm;流速:1.0 mL/min;柱溫:25℃。

2.2.2 溶液制備

取供試品2 g，加甲醇20 mL，超聲處理20 min，過(guò)濾，取續(xù)濾液即得供試品溶液。精密稱(chēng)取松香酸對(duì)照試劑10 mg，呈100 mL量瓶中，加甲醇約40 mL，超聲溶解，放至室溫，加甲醇至刻度，作為松香酸對(duì)照試劑溶液。按處方量制備未添加松香酸的陰性樣品，再按供試品溶液制備方法制備成陰性樣品溶液。

2.2.3 檢測(cè)結(jié)果

分別吸取供試品溶液、對(duì)照試劑溶液、陰性對(duì)照品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，記錄HPLC色譜圖及DAD光譜圖。色圖譜見(jiàn)圖2，二極管陣列光譜圖見(jiàn)圖3。圖2表明，供試品溶液色譜圖在與對(duì)照試劑溶液色譜圖保留時(shí)間相應(yīng)位置上出現(xiàn)色譜峰，陰性樣品無(wú)干擾。圖3表明，供試品溶液和對(duì)照試劑溶液的HPLC－DAD圖譜一致。利用計(jì)算機(jī)檢測(cè)樣品峰純度，結(jié)果在規(guī)定閾值范圍內(nèi)。

圖2 高效液相色譜圖

圖3 DAD光譜圖

2.2.4 精密度試驗(yàn)

精密吸取松香酸對(duì)照試劑溶液10 μL，連續(xù)進(jìn)樣6次。結(jié)果松香酸對(duì)照試劑色譜峰保留時(shí)間分別為 14.988，14.985，14.995，14.886，14.945，14.946 min，RSD 為 0.3%，表明進(jìn)樣精密度良好。

2.2.5 樣品中添加對(duì)照試劑測(cè)定

精密吸取樣品中添加對(duì)照試劑溶液10 μL，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，并與供試品溶液色譜圖比較。結(jié)果峰面積明顯增大，且保留時(shí)間變化在變異范圍內(nèi)。

3 討論

經(jīng)過(guò)薄層色譜圖、液相色譜圖以及光譜圖的驗(yàn)證，檢查出骨筋丸膠囊確實(shí)非法添加了松香酸。

采用薄層色譜法發(fā)現(xiàn)，樣品在與松香酸對(duì)照試劑相應(yīng)的位置上有相同顏色的熒光斑點(diǎn)，初步確定樣品中含有松香酸。再通過(guò)二極管陣列檢測(cè)器對(duì)供試品溶液色譜圖中與松香酸對(duì)照試劑溶液保留時(shí)間基本一致的色譜峰進(jìn)行紫外光區(qū)的光譜檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，兩者的光譜行為一致，進(jìn)一步確定樣品中含有松香酸。

[1]YBZ13882004，國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局標(biāo)準(zhǔn)(試行)[S].