牛磺酸有關(guān)物質(zhì)檢查的方法研究及質(zhì)量考察

(北京市藥品檢驗所，北京 100035)

?；撬?taurine)化學(xué)名為2－氨基乙磺酸(2－aminoethansulfonic)，是一種具有多種生理功能的含硫氨基酸，主要用于治療感冒、發(fā)熱、神經(jīng)痛、扁桃體炎、支氣管炎、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、各類眼疾及藥物中毒。其為2005年版《中國藥典(二部)》收載品種[1]，在第31版美國藥典和日本藥局方(15版)中也已收載。但2005年版《中國藥典(二部)》?；撬針?biāo)準(zhǔn)中無有關(guān)物質(zhì)檢查項。為進(jìn)一步提高質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)水平，確保對原料藥質(zhì)量的監(jiān)控，應(yīng)建立牛磺酸有關(guān)物質(zhì)檢查方法。由于?；撬釤o紫外吸收，無法用高效液相色譜法測定其有關(guān)物質(zhì)，筆者參照第31版美國藥典和日本藥局方(15版)?；撬犴椣掠嘘P(guān)物質(zhì)的檢測方法，用薄層色譜(TLC)法為?；撬嵩辖⒘擞嘘P(guān)物質(zhì)檢查方法，并考察了國內(nèi)產(chǎn)品的質(zhì)量，為2010年版《中國藥典》中?；撬豳|(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制訂提供了科學(xué)依據(jù)。

1 儀器與試藥

薄層色譜全自動點(diǎn)樣儀(瑞士Camag);Digistore 2數(shù)碼相機(jī)系統(tǒng)(瑞士Camag);AE240型天平(瑞士Mettler)。?；撬帷⒈彼釋φ掌?中國藥品生物制品檢定所，批號分別為111616－200301和140680－200401);牛磺酸原料藥(市售國產(chǎn)品，批號分別為TP08042365，TP08042366，TP06061029，TP0609004，TP0609005，TP0609006，070702，080301，080302);正丁醇(色譜純，Sigma 公司);冰醋酸、無水乙醇、丙酮(分析純，北京化學(xué)試劑公司);茚三酮(Fluka公司);硅膠G薄層預(yù)制板(青島海洋化工廠、煙臺化學(xué)工業(yè)研究所及Merck公司)，純化水。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液配制

精密稱取?；撬?.5 g，置25 mL量瓶中，用水溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成20 g/L的溶液作為供試品溶液。精密量取供試品溶液1 mL，置500 mL量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，制成含牛磺酸40 μg/mL的溶液，作為對照溶液。分別取?；撬岷捅彼釋φ掌愤m量，分別用水溶解并稀釋成2 g/L的溶液，各取適量，等體積混合，搖勻，作為系統(tǒng)適用性試驗用溶液。

取于105℃下加熱1 h的樣品約1.0 g，精密稱定，置50 mL容量瓶中，用水溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為高溫破壞樣品。取?；撬針悠芳s1.0 g，精密稱定，置50 mL容量瓶中，用水溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液A。精密量取供試品溶液A10 mL，置50 mL容量瓶中，加1 mol/L的氫氧化鈉溶液10 mL，在100℃水浴中加熱1 h，放冷，調(diào)pH至中性，加水至刻度，搖勻，作為強(qiáng)堿破壞樣品。精密量取供試品溶液10 mL，置50 mL容量瓶中，加1 mol/L的鹽酸溶液10 mL，在100℃水浴中加熱1 h，放冷，調(diào)pH至中性，加水至刻度，搖勻，作為強(qiáng)酸破壞樣品。精密量取供試品溶液10 mL，置50 mL容量瓶中，加30%過氧化氫溶液10 mL，在100℃水浴中加熱1 h，放冷，加水至刻度，搖勻，作為氧化破壞樣品。

2.2 展開劑選擇及系統(tǒng)適用性試驗用溶液確定

采用高溫、強(qiáng)酸、強(qiáng)堿、強(qiáng)氧化方法對牛磺酸進(jìn)行破壞性處理，希望能獲得強(qiáng)制降解產(chǎn)物。使用3種展開劑展開劑[A為正丁醇－冰醋酸－ 水(5∶1∶2)，B 為正丁醇－ 冰醋酸－ 水(60∶20∶20)，C 為水－無水乙醇－正丁醇－冰醋酸(150∶150∶100∶1)]分別考察分離效果，使用4種顯色方法[顯色方法Ⅰ為茚三酮的丙酮溶液(1→50)，Ⅱ為茚三酮 0.2 g溶于100 mL的正丁醇－2 mol/L醋酸(95∶5)，Ⅲ為茚三酮0.3 g溶于100 mL的正丁醇再加3 mL冰醋酸，Ⅳ為碘蒸氣]檢視其降解產(chǎn)物。結(jié)果表明，在較強(qiáng)的降解條件下，用上述方法均未檢出雜質(zhì)斑點(diǎn)。顯示?；撬峥赡芫哂泻芎玫幕瘜W(xué)穩(wěn)定性，也有可能此TLC法只適用于檢測含有氨基的物質(zhì)，若強(qiáng)制降解產(chǎn)物不含氨基，則無法檢出。為研究?；撬嵩蠌?qiáng)制降解后含量變化，又使用丹磺酰氯對?；撬嵛雌茐臉悠芳案鹘到猱a(chǎn)物進(jìn)行柱前衍生，采用高效液相色譜法測定其含量，結(jié)果4種降解產(chǎn)物與未破壞樣品相比含量并無下降，說明?；撬嵩戏浅７€(wěn)定，在強(qiáng)制降解條件下并沒有生成其他有關(guān)物質(zhì)。

由于無法選擇強(qiáng)制降解溶液作為系統(tǒng)適用性試驗用溶液，故考慮用雜質(zhì)加入法配制系統(tǒng)適用性試驗溶液。目前國內(nèi)各廠家產(chǎn)品工藝不同，引入的雜質(zhì)也不同，無法統(tǒng)一雜質(zhì)對照品，只能選擇與?；撬嵩谕籘LC條件下比較難分離的化合物，作為其系統(tǒng)適用性分離對照品。丙氨酸分子的大小、性質(zhì)與牛磺酸較接近，在同一條件下的TLC行為較相似，且其易得、無毒。因此，用?；撬崤c丙氨酸的等濃度混合溶液作為系統(tǒng)適用性試驗用溶液較適宜。

用3種展開體系分別對酸降解溶液、堿降解溶液、氧化降解溶液、高溫降解溶液及?；撬崤c丙氨酸的混合溶液進(jìn)行展開，見圖1，分離情況見表1。結(jié)果顯示，C展開劑的分離能力優(yōu)于A和B，因此選C展開劑較好。

圖1 采用3種展開劑的薄層色譜圖

表1 3種展開劑的分離情況

2.3 檢視方式選擇及最低檢出限確定

表2為4種顯色方法的對比。除碘蒸氣的檢測靈敏度明顯較低外，其他3種顯色劑的檢測靈敏度差異不大。因此，選用茚三酮的丙酮溶液(1→50)顯色即可。精密量取供試品溶液0.5，1.0 mL，分別置500 mL量瓶中，用水溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成含?；撬?20 μg/mL 和40μg/mL 的溶液。精密量取供試品溶液 1.0，2.0，3.0，4.0 mL，分別置 200 mL 量瓶中，用水溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成含牛磺酸 100，200，300，400 μg/mL 的溶液。使用展開劑Ⅲ，點(diǎn)樣量5 μL，條帶狀點(diǎn)樣，點(diǎn)樣寬度3 mm。見圖 2。

圖2 最低檢出限薄層色譜圖

2.4 點(diǎn)樣方式考察

供試品溶液配制質(zhì)量濃度較高(20 g/L)，點(diǎn)樣量較大，否則自身對照溶液色譜不易出現(xiàn)斑點(diǎn);又因樣品溶解度而不能選用較易揮發(fā)的有機(jī)溶劑作為供試品溶液配制用溶劑，只能以水作為溶劑。因此，當(dāng)點(diǎn)樣量為5 μL，采用圓點(diǎn)狀方式點(diǎn)樣時，供試品溶液色譜斑點(diǎn)易出現(xiàn)拖尾現(xiàn)象(見圖3)。后采用條帶狀方式點(diǎn)樣，拖尾現(xiàn)象大為改觀(見圖4)。

2.5 溶液穩(wěn)定性考察

配制供試品溶液，室溫放置，于 0，2，4，8，24 h 檢測。結(jié)果各溶液色譜斑點(diǎn)顏色、大小均無明顯變化，且均無雜質(zhì)斑點(diǎn)出現(xiàn)，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

表2 4種顯色劑的對比

圖3 9批樣品的薄層色譜圖

圖4 3批樣品的薄層色譜圖

2.6 擬訂方法

精密吸取供試品溶液(20 g/L)、對照溶液(40 μg/mL)、系統(tǒng)適用性試驗用溶液(1 g/L)各5 μL，分別以條帶式點(diǎn)樣方式點(diǎn)于同一硅膠薄層板上，條帶寬度5 mm，以水－無水乙醇－正丁醇－冰醋酸(150∶150∶100∶1)為展開劑展開，晾干，噴以茚三酮的丙酮溶液(1→50)，在105℃下加熱約5 min至斑點(diǎn)出現(xiàn)。系統(tǒng)適用性試驗用溶液應(yīng)能檢出兩個斑點(diǎn)，供試品溶液的雜質(zhì)斑點(diǎn)不得多于1個，且其斑點(diǎn)大小和顏色不得過對照溶液的主斑點(diǎn)(0.2%)。

3 討論

本試驗參照第31版美國藥典和日本藥局方(15版)的檢測方法，用薄層色譜法為牛磺酸原料建立了有關(guān)物質(zhì)檢查方法。用擬訂方法考察國內(nèi)兩種不同工藝生產(chǎn)的9批牛磺酸原料，均無雜質(zhì)檢出，顯示國內(nèi)產(chǎn)品純度很高、質(zhì)量優(yōu)異。此方法簡便靈敏，能有效檢測?；撬嶂杏嘘P(guān)物質(zhì)。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(二部)[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2005:49.