透皮促進劑對萘普生的促透效果研究

姜建華，周曉芳，葉金翠

(1.浙江省杭州下城區(qū)中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院，浙江 杭州 310004; 2.浙江省腫瘤醫(yī)院，浙江 杭州 310022;3.浙江省醫(yī)學科學院藥物研究所，浙江 杭州 310013)

萘普生為非甾體抗炎鎮(zhèn)痛藥(NSAIDs)，具有抗炎、鎮(zhèn)痛、解熱功效，臨床常用于治療各類風濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎及強直性脊椎炎，可緩解各種輕度至中度的疼痛。NSAIDs對整個胃腸道均有損傷，患者長期口服NSAIDs，胃和十二指腸潰瘍的發(fā)生率為10% ～20%[1]，是未使用NSAIDs的健康人群的5～15倍[2－3]，嚴重胃腸道并發(fā)癥的發(fā)生危險是非NSAIDs使用者的4倍[4]。因此，需長期服藥的患者或胃潰瘍患者往往不能耐受NSAIDs。經(jīng)皮給藥作為安全、有效的給藥途徑，非常適合NSAIDs。萘普生經(jīng)皮給藥，不僅可避免口服給藥的胃腸道刺激，而且可使藥物在皮下、關(guān)節(jié)等局部保持高濃度，以發(fā)揮更好的治療作用，避免全身作用產(chǎn)生的副反應(yīng)。萘普生具有低相對分子質(zhì)量(230.26)、低熔點(153～154℃)、油水分配系數(shù)與溶解性合適以及生物半衰期較短等特性，使得萘普生研制成透皮吸收制劑具可行性。本研究考察了透皮促進劑月桂氮酮(azone)、油酸(oil acid，OA)、月桂醇(dodecyl alcohol，DA)與 1，2－ 丙二醇(1，2－PG)單用或混合使用對萘普生的促透效果，為萘普生透皮給藥系統(tǒng)的開發(fā)提供參考。

1 儀器與試藥

LC－10 A型高效液相色譜儀(日本島津);SPD－10 A型紫外檢測器;C－R 6 A型數(shù)據(jù)處理器(日本島津);Valia－Chien雙室滲透池(浙江大學玻璃儀器廠);電子分析天平(德國賽多利斯)。萘普生(中國藥品生物制品檢定所，批號為100198－0002);月桂氮酮(廣州助劑化工廠)、油酸(沈陽市都西試劑廠)、月桂醇(上?；瘜W試劑供應(yīng)站)、丙二醇(如皋市金陵試劑廠)均為分析純。雄性SD大鼠(浙江省醫(yī)學科學院)。

2 方法與結(jié)果

2.1 皮膚來源與處理

取體重約200 g的雄性SD大鼠，用刀片刮去大鼠腹部毛，處死，剝離腹部皮膚，去除皮下脂肪及黏液，用生理鹽水沖洗干凈，濾紙吸干后置冰箱儲存，備用。

2.2 皮膚滲透試驗

將處理好的大鼠腹部皮膚固定于Valia－chien雙室滲透池上，角質(zhì)層面向供應(yīng)室，真皮層面向接受室。滲透池固定在磁力攪拌器上，用星狀磁粒以500 r/min的速度攪拌，并用水浴夾套使溫度恒定為(37±0.5)℃。供應(yīng)室中加入4 mL不同促進劑的萘普生供給液，塞子蓋緊并以膜封口，接受室內(nèi)加入10% 聚乙二醇400(PEG 400)生理鹽水 4 mL。分別于 4，6，8，10，24 h 時取樣 500 μL，同時立即補加等溫等體積的接受液。以高效液相色譜(HPLC)法測定各時間點接受室中藥物濃度，計算單位面積內(nèi)藥物的累積滲透量 Q(μg/cm2)。計算公式如下:

式中 Vn和 Cn分別為第 n次取樣時接受液的體積和濃度;Vi和 Ci分別為第 i次取樣時接收液的體積和濃度;Vn=Vi=4 mL;∑CiVi為取樣帶走的藥物的累積和。以 Q與時間(t)作圖得藥物累積曲線，對曲線的直線部分進行線性回歸，所得的直線斜率即為透皮擴散速率J(μg·cm2/h)。

2.3 萘普生質(zhì)量濃度測定(高效液相色譜法)

2.3.1 檢測波長選擇

取萘普生適量，溶于流動相中，于200～400 nm波長范圍內(nèi)進行紫外掃描。根據(jù)吸收圖譜，萘普生在流動相中的最大吸收波長為231 nm，因此選定此波長為檢測波長。

2.3.2 色譜條件

色譜柱:ODS C18柱(150 mm ×4.6 mm，5 μm);流動相:甲醇－水(70 ∶30)，水相中加入冰醋酸調(diào) pH 至 2.0;流速:1.0 mL/min;檢測波長:231 nm;柱溫:37 ℃;進樣量:20 μL。

2.3.3 線性關(guān)系考察

精密稱取萘普生適量，配成貯備液，再用甲醇稀釋配制成質(zhì)量濃度分別為 1，5，15，20，25，30，35，40，50 μg/mL 的溶液，搖勻。精密量取20 μL注入液相色譜儀，照上述色譜條件測定，記錄峰面積，得回歸方程 A=16 403 C－469.4，R2=0.999 3(n=9)。結(jié)果表明，萘普生溶液的質(zhì)量濃度在1.0～50 μg/mL范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.3.4 回收率試驗

精密稱取萘普生適量，配制高、中、低質(zhì)量濃度的樣品溶液各5批，依法測定，將結(jié)果代入標準曲線計算，與實際濃度比較，計算方法回收率。結(jié)果平均回收率為100.85%。

2.3.5 精密度試驗

按照回收率試驗項下操作方法，配制高、中、低3種質(zhì)量濃度的樣品溶液，同日內(nèi)測定5批，隔日測定1批并連續(xù)5批。結(jié)果日內(nèi) RSD 為 0.53% ～0.85%，日間 RSD 為 0.67% ～2.10%。

2.4 單一促進劑促透試驗

結(jié)果見表1。可知，azone和OA對萘普生有顯著的經(jīng)皮促透效果，而DA和1，2－PG對其無明顯促透作用，尤其是1，2－PG單獨使用時基本無促透作用。圖1為單一使用促進劑后的藥物經(jīng)皮累積滲透量－時間曲線，結(jié)果表明，azone和OA對萘普生的促透作用明顯與劑量相關(guān)，在5%濃度以下藥物透皮量與促進劑濃度成正比，但5%濃度以上隨促進劑濃度的增加促透效果反而下降，其中5%azone和5%OA的促透作用最顯著。

表1 促進劑作用下萘普生的經(jīng)皮滲透速率(J)及其促透倍數(shù)(ER)

2.5 合用促進劑促透試驗

研究了azone或OA與1，2－PG聯(lián)合應(yīng)用對萘普生的經(jīng)皮滲透促透效果，固定5%azone和5%OA濃度不變，分別與不同濃度的1，2－PG聯(lián)合使用進行皮膚滲透試驗。結(jié)果見表2和圖2?？梢娭苄源龠M劑azone和OA與水溶性促進劑聯(lián)合使用，比單獨使用的促透效果更顯著，促透倍數(shù)較在水中高達10倍以上。5%azone+20%1，2－PG可達最大促透效果。

3 討論

萘普生收載于2005年版《中國藥典(二部)》，其原料含量測定采用傳統(tǒng)容量法，取樣量大，滴定液配制較煩瑣。萘普生針劑含量測定采用紫外分光光度法。本研究采用靈敏的高效液相色譜法測定萘普生的質(zhì)量濃度，準確性好、精密度高，出峰快、峰形好，分析時間短，且皮膚蛋白浸出液等雜質(zhì)峰與主峰分離完全，專屬性好，回收率與精密度均符合要求，適用于體外透皮試驗的檢測。由于萘普生為弱酸性藥物，在溶液中存在解離平衡，色譜行為受pH影響較大，因此試驗時需在水相中加入冰醋酸調(diào)節(jié)流動相的 pH，以改善其峰形與維持穩(wěn)定性。

圖1 在不同促進劑其及不同濃度作用下藥物經(jīng)皮滲透累積量－時間曲線

表2 促進劑聯(lián)合使用的經(jīng)皮滲透速率(J)及其促透倍數(shù)(ER)

圖2 azone或OA與1，2－PG聯(lián)合使用的藥物滲透累積量－時間曲線

提高藥物的透皮速率是開發(fā)經(jīng)皮給藥制劑的關(guān)鍵，應(yīng)用透皮促進劑是增加藥物透皮吸收的首選方法[5]。其作用機制多是通過改變皮膚角質(zhì)層扁平細胞的有序疊集結(jié)構(gòu)(使有序排列變?yōu)闊o序排列)，增大角質(zhì)層細胞間隙的空隙，使藥物迅速進入皮下而被吸收[6]。本研究結(jié)果表明，azone和OA對萘普生的促透效果顯著，且呈劑量依賴關(guān)系，5%濃度可達最佳促透作用;聯(lián)合1，2－PG使用，可達單一促進劑無法比擬的促透效果，促透倍數(shù)達10倍以上，其中5%azone+20%1，2－PG達最大促透倍數(shù)。azone發(fā)揮促透作用與其同角質(zhì)層中脂質(zhì)的相互作用有關(guān)。azone的化學結(jié)構(gòu)中有一較大的極性基團和脂質(zhì)烷基鏈，可進入到脂質(zhì)雙分子層中破壞它的有序結(jié)構(gòu)。采用電子衍射方法對從人角質(zhì)層剝離的脂質(zhì)進行的研究也表明，azone可作為一個獨立相存在于角質(zhì)層的脂質(zhì)中[7]。1，2－PG單獨作用無明顯促透效果(促透倍數(shù)ER為1.03)，但與azone或OA聯(lián)用時促透作用顯著。一般認為，這主要是因為1，2－PG能作為良好的溶劑分布在類脂極性基團之間的親水性區(qū)域，使azone更容易分配進入細胞間區(qū)域[8]。同時，1，2－PG的水溶性有利于藥物在皮膚角質(zhì)層和活性表皮間轉(zhuǎn)運。5%的OA和20%的1，2－PG混合使用也可取得顯著的促透效果(促滲倍數(shù)ER為11.78)。OA屬于脂肪酸類化合物，與皮膚中脂肪酸有相似的結(jié)構(gòu)，分子中存在的不飽和雙鍵使其具有不對稱的空間結(jié)構(gòu)。當OA分子插入角質(zhì)層內(nèi)的脂質(zhì)雙分子層疏水結(jié)構(gòu)時，由于其不飽和疏水的順式結(jié)構(gòu)，使雙分子層扭轉(zhuǎn)，形成微細的、易于滲透的流動性通道，從而有效地影響了角質(zhì)層脂質(zhì)結(jié)構(gòu)的有序排列[9]。本試驗所得結(jié)果初步驗證了萘普生透皮給藥的可行性，為萘普生經(jīng)皮給藥制劑的研發(fā)提供了參考。

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