基質(zhì)金屬蛋白酶組織抑制因子-1、2在宮頸鱗癌中的表達(dá)及意義*

南云澤 劉麗利 林貞花 金仁順

宮頸癌是婦女最常見的惡性腫瘤之一，全球范圍內(nèi)宮頸癌的發(fā)病率雖有下降趨勢(shì)，但仍是惡性腫瘤造成婦女死亡的第二位因素。腫瘤細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移是宮頸癌患者死亡的根本原因?？刂颇[瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移是當(dāng)前研究的重點(diǎn)?；|(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)可降解細(xì)胞外基質(zhì)和基底膜，是與腫瘤侵襲、轉(zhuǎn)移關(guān)系最為密切的一類蛋白水解酶，而MMPs活性又可被基質(zhì)金屬蛋白水解酶組織抑制因子（tis?sue inhibitor of matrix metalloproteinase，TIMPs）所抑制。本文旨在應(yīng)用免疫組化技術(shù)檢測(cè)TIMP-1和TIMP-2在宮頸鱗癌組織中的表達(dá)情況，并探討其與宮頸癌生物學(xué)行為的關(guān)系，從而明確其在腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移過程中的作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料 標(biāo)本選自2001年7月—2009年7月我院婦產(chǎn)科住院手術(shù)切除的組織，其中宮頸鱗癌標(biāo)本（鱗癌組）46例，年齡22～59歲，平均年齡（42.89±7.16）歲，臨床分期采用國(guó)際婦產(chǎn)科聯(lián)盟（FIGO）2000年修訂的標(biāo)準(zhǔn)[1]。宮頸原位癌標(biāo)本（原位癌組）34例，年齡25～64歲，平均年齡（38.97±8.09）歲。選取20例同期因子宮肌瘤行子宮切除的正常宮頸標(biāo)本作為對(duì)照組，年齡25～64歲，平均年齡（40.25±8.90）歲。全部病例在術(shù)前均未接受放療、化療，臨床及病理資料完整。3組間年齡比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=2.56,P＞0.05）。

1.2 主要試劑 兔抗人TIMP-1免疫組化多克隆抗體（40282Ra），兔抗人TIMP-2免疫組化多克隆抗體（40283Ra），即用型快捷免疫組化MaxvisionTM試劑盒（鼠/兔），DAB顯色試劑盒，均購自福州邁新生物技術(shù)有限公司。

1.3 染色方法 所有標(biāo)本均經(jīng)10%中性福爾馬林固定，常規(guī)石蠟包埋，4 μm厚連續(xù)切片，并行常規(guī)HE染色經(jīng)病理科專家閱片復(fù)診。免疫組織化學(xué)MaxvisionTM法嚴(yán)格按試劑盒說明書進(jìn)行，DAB顯色，蘇木素復(fù)染，封片后用光學(xué)顯微鏡觀察。同時(shí)設(shè)置陰性對(duì)照（用PBS代替一抗），陽性對(duì)照用已知陽性片。

1.4 結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn) TIMP-1、TIMP-2蛋白陽性信號(hào)呈棕黃色顆粒樣，位于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)。觀察全片，按陽性細(xì)胞所占百分比及著色程度進(jìn)行結(jié)果判定[2]。按陽性細(xì)胞比例判定：陽性細(xì)胞≤10%1分，10%～50%2分，＞50%3分；按染色程度判定：陰性為0分，淡黃色1分，中度黃色2分，棕黃色3分。按陽性細(xì)胞得分×染色程度得分計(jì)總分，總分＜3為陰性，≥3為陽性。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 宮頸病變組織中TIMP-1和TIMP-2蛋白的表達(dá) TIMP-1和TIMP-2蛋白在原位癌組及鱗癌組的陽性表達(dá)率均較高，與對(duì)照組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），但鱗癌組與原位癌組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見表1，圖1～6。

2.2 TIMP-1和TIMP-2蛋白的表達(dá)與子宮頸鱗癌臨床病理特征的關(guān)系 不同臨床分期和病理類型的患者TIMP-1和TIMP-2蛋白的陽性表達(dá)率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者TIMP-2陽性表達(dá)率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表2。

表1 TIMP-1及TIMP-2在不同宮頸組織中的陽性表達(dá)例（%）

圖1 宮頸鱗癌TIMP-1（MaxvisionTM×100）

圖2 宮頸鱗癌TIMP-2(MaxvisionTM×100)

圖3 宮頸原位癌TIMP-1(MaxvisionTM×100)

圖4 宮頸原位癌TIMP-2(MaxvisionTM×100)

圖5 正常宮頸上皮TIMP-1(MaxvisionTM×100)

圖6 正常宮頸上皮TIMP-2(MaxvisionTM×100)

表2 宮頸鱗癌TIMP-1及TIMP-2的免疫組化結(jié)果

3 討論

浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移是惡性腫瘤的典型特征，是導(dǎo)致腫瘤患者死亡的主要原因。腫瘤的浸潤(rùn)與轉(zhuǎn)移是一個(gè)動(dòng)態(tài)的、復(fù)雜的、多步驟的過程，其中細(xì)胞外基質(zhì)的降解是腫瘤浸潤(rùn)正常組織及開始轉(zhuǎn)移的基本途徑，基質(zhì)金屬蛋白酶為降解細(xì)胞外基質(zhì)的一組最重要的酶，該過程對(duì)腫瘤細(xì)胞的浸潤(rùn)以及相繼發(fā)生的轉(zhuǎn)移較為重要。而其中與婦科惡性腫瘤關(guān)系較為密切的為MMP-2和MMP-9，同時(shí)MMPs活性又受到其抑制劑的調(diào)節(jié)，MMP-2、MMP-9的特異性組織抑制劑分別為TIMP-2和TIMP-1[3]。有研究表明，對(duì)MMPs的適當(dāng)抑制和調(diào)控可以對(duì)腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移進(jìn)行控制，阻斷腫瘤血管的生成，從而阻斷腫瘤的生長(zhǎng)和發(fā)展[4]。本研究表明，TIMP-1和TIMP-2蛋白在鱗癌組和原位癌組的陽性表達(dá)率均高于對(duì)照組，這表明在細(xì)胞發(fā)生癌變過程中TIMP-1、2起著重要的作用。但鱗癌組與原位癌組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，可推測(cè)在子宮頸鱗癌的發(fā)展過程中TIMP-1、2的表達(dá)是一早期事件。

宮頸癌的轉(zhuǎn)移方式主要是淋巴道轉(zhuǎn)移，臨床上也是以有無淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移來判斷預(yù)后和指導(dǎo)臨床治療。有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的宮頸鱗癌患者TIMP-2陽性表達(dá)率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示TIMP-2在宮頸鱗癌的腫瘤細(xì)胞的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移中起抑制作用。在宮頸鱗癌中TIMP-1的陽性表達(dá)率較原位癌組低，但有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的宮頸鱗癌患者TIMP-1陽性表達(dá)率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。據(jù)此推測(cè)，TIMP-1對(duì)于腫瘤細(xì)胞的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移是一雙向調(diào)節(jié)因子。有報(bào)道，TIMP的超表達(dá)與惡性腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移行為呈正相關(guān)[5]。也有研究表明TIMP-1對(duì)腫瘤的侵襲既有保護(hù)作用又有抑制作用，這依賴于腫瘤的TIMP-1的基因型而不是宿主本身[6]。在以后的研究中，筆者要對(duì)其進(jìn)行深入研究，從而進(jìn)一步確定TIMP-1是否能夠作為治療腫瘤的藥物用于臨床。

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