鹽酸川芎嗪注射液對青霉素致癇大鼠血液流變學指標、血小板聚集率和血漿去甲腎上腺素水平的作用

張 霞 劉雨銀 章正華 萬楚成 夏云金 姜 鏵 張端蓮

鹽酸川芎嗪注射液對青霉素致癇大鼠血液流變學指標、血小板聚集率和血漿去甲腎上腺素水平的作用

張 霞1劉雨銀2章正華1萬楚成1夏云金1姜 鏵1張端蓮3

十堰442000；2湖北醫(yī)藥學院附屬十堰市人民醫(yī)院干部病房；3武漢大學醫(yī)學院人體解剖與組織胚胎學系； 通訊作者，劉雨銀，電話：0719—8637908；E-mail：liuyuyin1964＠163.com

本文2010—11—03收到，2011—02—15修回，2011—02—16接受

癲癇是一種由多種病因引起的慢性腦功能障礙綜合征，以腦神經(jīng)元異常放電所致的突發(fā)、短暫、反復中樞神經(jīng)功能失常為特征。鹽酸川芎嗪（Tetramethylpyrazine，TMP）是從川芎的生物堿中分離得到的有效單體，可透過血腦屏障，因其療效好、副作用少而被廣泛用于腦血管疾病的治療。已有研究報道，TMP可明顯降低全血高切粘度、低切粘度、血漿粘度、紅細胞聚集性、紅細胞壓積，增加紅細胞變形性，從而降低血液粘滯性，防止血栓形成；TMP具有拮抗內(nèi)皮素、去甲腎上腺素釋放，對抗血管緊張素E及血管加壓素等體液因子的縮血管效應；TMP能抑制小血管平滑肌痙攣、擴張小動脈而改善微循環(huán)。本文通過對青霉素致癇大鼠模型腹腔注射一定劑量TMP，觀察其對癲癇大鼠血液流變學指標、血小板聚集率和血漿去甲腎上腺素水平的影響。

1 材料與方法

1.1 實驗動物及分組

SD大鼠（由湖北醫(yī)藥學院實驗動物中心提供）24只 ，雌雄不拘，體重200～250g。隨機分為三組：手術(shù)對照組（A組）、青霉素致癇模型組（B組）和TMP治療組（C組），每組8只。

1.2 試劑與儀器

主要藥物和試劑：鹽酸TMP注射液（批號0107001），常州制藥廠生產(chǎn)；注射用青霉素鈉（批號00109306），華北制藥股份有限公司生產(chǎn)；二磷酸腺苷（ADP），上海源聚生物科技有限公司進口分裝；ELISA試劑盒（德國BL公司）。

主要儀器：BL-410生物機能實驗系統(tǒng)，成都泰盟電子有限公司生產(chǎn)；江灣I-C型立體定向器，第二軍醫(yī)大學器材處生產(chǎn)；LBY-NJ血小板聚集儀，北京普利生有限公司生產(chǎn)；法國產(chǎn)Stago全自動血凝儀及配套試劑；奧地利產(chǎn)安托斯三型酶標儀；日本產(chǎn)MEK-6108型全自動血細胞分析儀；LBY-N 6B自動血液黏度計，北京普利生有限公司生產(chǎn)。

1.3 實驗方法

1.3.1 癲癇大鼠模型制備：用10%烏拉坦以10ml／kg體重腹腔注射麻醉后，將動物固定在立體定向器上，于大腦左、右兩側(cè)前鹵后3mm，矢狀縫旁開3mm行開顱手術(shù)，暴露大腦皮層記錄區(qū)域（2mm×2mm），將銀球電極置于左、右兩側(cè)的記錄部位，信號輸入生物機能實驗系統(tǒng)，進行左、右兩側(cè)腦電記錄。B、C兩組大鼠用浸有青霉素溶液的明膠海綿（200u／mm3）置于左側(cè)大腦皮層表面，誘發(fā)大鼠大腦皮層癲癇樣放電，待癲癇放電20min后，移去明膠海綿，用浸有溫熱生理鹽水棉球蓋住創(chuàng)口。

1.3.2 藥物的使用：A組，手術(shù)后腹腔注射生理鹽水；B組，青霉素誘發(fā)癲癇20min后腹腔注射生理鹽水；C組，青霉素誘發(fā)癲癇放電20min后，腹腔注射TMP（40mg／kg，參照臨床用量）。各組所用溶液量相同。

1.3.3 實驗指標及檢測方法：于C組TMP注射30min后，分別采集三組大鼠心臟血7.4ml，立即分三管抗凝。（1）在含有0.4 ml（109 mmol／L）枸櫞酸鈉抗凝管中加入3.6ml全血，按常規(guī)操作制備富含血小板血漿（PRP）和乏血小板血漿（PPP）；在血細胞分析儀上計數(shù)PRP血小板，調(diào)整其血小板數(shù)至150×109／L；以3.0μmo l／L 的 ADP作為血小板聚集誘導劑，在血小板聚集儀上測定3min、5min、10min最大聚集率（%）PAG（3′）、PAG（5′）、PAG（10′）。（2）取全血1.8ml，加入含有109mmol／L枸櫞酸鈉（1∶9）抗凝管中，顛倒混勻，在血凝儀上測定血漿纖維蛋白原含量；（3）全血2ml注入含有ED—TA-K2的真空抗凝管中混勻，在血液黏度計上測定血液流變學指標；（4）取第二管剩余血漿，在酶標儀上用ELISA測定血漿去甲腎上腺素含量。

1.4 統(tǒng)計學處理

2 結(jié) 果

2.1 各組血液流變學指標比較

TMP對青霉素致癇大鼠血液流變學指標的影響，結(jié)果見表1。

2.2 各組血小板聚集率和去甲腎上腺素含量變化的比較

TMP對青霉素致癇大鼠血小板聚集功能和去甲腎上腺素含量變化的影響見表2。

表1 各組大鼠血液流變學指標比較（±s，n均＝8）

表1 各組大鼠血液流變學指標比較（±s，n均＝8）

注：與 A組比較，1）P＜0.05，2）P＜0.01；與B組比較，3）P＜0.05，4）P＜0.01

檢測指標 A組 B組 C組全血高切粘度 （200s—1，mPa·s） 3.51±0.315 4.92±0.401） 3.49±0.3013）全血低切粘度（10s—1，mPa·s） 9.27±1.003 13.73±1.102） 9.68±1.0103）血漿粘度（mPa·s） 1.22±0.11 1.70±0.131） 1.30±0.103）紅細胞壓積 0.37±0.03 0.43±0.041） 0.35±0.033）紅細胞剛性指數(shù) 5.81±0.47 9.16±0.811） 5.76±0.353）紅細胞聚集指數(shù) 3.67±0.46 8.03±0.312） 4.17±0.524）紅細胞變形指數(shù) 1.06±0.18 1.80±0.162） 1.04±0.204）纖維蛋白原（g／L） 1.78±0.69 3.13±0.771） 1.76±0.683）

表2 各組大鼠血小板聚集率和去甲腎上腺素含量變化（±s，n均＝8）

表2 各組大鼠血小板聚集率和去甲腎上腺素含量變化（±s，n均＝8）

注：與 A組比較，1）P＜0.05，2）P＜0.01；與B組比較，3）P＜0.05，4）P＜0.01

檢測指標 A組 B組 C組PAG（3′） 67.76±9.51 94.31±6.162） 69.34±6.694）PAG（5′） 58.29±5.15 89.57±6.641） 65.86±5.533）PAG（10′） 75.27±5.43 92.21±5.711） 76.48±5.124）去甲腎上腺素（μg／L） 54.21±12.36 82.17±9.042） 67.15±9.154）

3 討 論

實驗結(jié)果表明，青霉素致癇組大鼠去甲腎上腺素含量顯著增高的同時，出現(xiàn)血液中紅細胞剛性和聚集性明顯增強，紅細胞壓積增高，紅細胞變形能力明顯下降，纖維蛋白原顯著增多，致使全血粘度、血漿粘度等血液流變學指標出現(xiàn)異常；同時癲癇發(fā)作時血小板聚集率明顯增高（P＜0.05或P＜0.01）。最終青霉素致癇組大鼠呈現(xiàn)粘、濃、凝、聚等血瘀證表現(xiàn)。

TMP為中藥川芎的有效成分，化學名為四甲基吡嗪，是從川芎的生物堿中分離得到的有效單體，TMP可透過血腦屏障，是一種新型的鈣離子拮抗劑［1，2］及自由基清除劑，除有擴張血管平滑肌作用外，還能抑制血小板凝聚，提高紅細胞表面電荷，使受損的紅細胞恢復變形能力，增強血液流動性［3］，同時通過分解血漿纖維蛋白原降低全血黏度，通過抑制ADP誘導的血小板聚集，對已聚集的血小板有解聚作用，且能抑制血小板活化，降低血小板表面活性，抗血栓形成，改善微循環(huán)［4，5］，因而具有對抗癲癇對血液流變性的應激損傷作用［6］。關(guān)于TMP改善血液流變性的機制可能在于其能改變血小板內(nèi)環(huán)磷酸腺苷（c AMP）、環(huán)磷酸鳥苷（cGMP）的含量，減少磷脂酰肌醇4，5二磷酸（PIP2），抑制蛋白磷酸化，可顯著減少靜脈壁白細胞黏附，延緩并減輕微循環(huán)內(nèi)紅細胞聚集，加速紅細胞和血小板運動［8］等。

黃智峰等［9］探討了TMP對新生大鼠缺氧缺血性腦損傷的保護作用，發(fā)現(xiàn)TMP能延長缺氧缺血性腦損傷新生大鼠的平均生存時間，直觀地證明了TMP對缺氧缺血腦組織的保護作用。

王萬鐵［10］、馬中富［11］報道 TMP可增加血小板內(nèi)c AMP的含量，置換血小板膜上的Ca2＋，使其膜流動性增強，并阻斷Са2＋對血小板激活和前列腺素代謝及抑制血小板線粒體耗氧量和氧化磷酸化作用，從而抑制血小板聚集。另有報道，TMP能夠使癲癇大鼠海馬內(nèi)cGMP含量明顯下降，而c AMP含量進一步增加。cGMP含量有一定的調(diào)節(jié)作用，腦內(nèi)c AMP含量的進一步增加，反作用于細胞膜，改變膜通透性，減弱神經(jīng)興奮性，使發(fā)作停止或減弱，因而提高腦內(nèi)c AMP水平可能有抗癲癇作用［12］。因此，觀察TMP對青霉素致癇大鼠血液流變性、血小板聚集性和去甲腎上腺素含量的影響，無論對基礎(chǔ)理論研究還是對臨床治療都有重要意義。

本文第一作者簡介：

張 霞（1968～），女，漢族，副主任醫(yī)師，碩士，主要從事惡性血液病基礎(chǔ)與臨床方面的研究

1 何榮杰，刁統(tǒng)美.TMP的臨床新應用.中國誤診學雜志，2001，1（2）：307.

2 程先超，劉新泳，徐文方.TMP心腦血管藥理學研究進展.中國醫(yī)院藥學雜志，2005，25（7）：661～663.

3 梁子均.血液流變學基礎(chǔ)理論與臨床應用.上海：上海醫(yī)科大學出版社，1991：76～79.

4 陳澤濤.TMP在腦血管病治療中的應用.中國中西醫(yī)雜志，2003，23（5）：378～270.

5 曹成明.川芎的臨床應用及其機理探討.張家口醫(yī)學院學報，2002，19（3）：28～29.

6 賀志安，張晨光，涂曉艷，等.川芎嗪對應激家兔血液流變學的影響.中國誤診學雜志，2006，6（13）：2 501～2 502.

7 荻柯坪，杜軍英，常立功.TMP在徽血管運動中作用的研究進展.中草藥，2002，33（10）：附8.

8 Paragh G.Treatment possibility of hypercholesterdaemia associated with hypertriglyceridaemia.Acta Biol Hung，1997，48（3）：359～367.

9 黃智峰，趙 玲，龔曉斌.TMP對新生大鼠缺氧缺血性腦損傷的保護作用.中華實用中西醫(yī)雜志，2004，4（17）：2 545～2 546.

10 王萬鐵，林麗娜，徐正衸.川芎嗪對心臟換瓣患者血小板聚集功能的影響.中國中西醫(yī)結(jié)合雜志2000；20（1）：25～27.

11 馬中富，李天木，黎湛興，等.慢性肺心病急性加重期血小板內(nèi)Ca2＋、c AMP和TXB含量關(guān)系的探討.中國急救醫(yī)學，1998，18（5）：15～16.

12 解學孔.癲癇病學.北京：人民衛(wèi)生出版社，1995：92～93.

鹽酸川芎嗪注射液對青霉素致癇大鼠血液流變學指標、血小板聚集率和血漿去甲腎上腺素水平的作用

張 霞，劉雨銀，章正華，等／湖北醫(yī)藥學院附屬太和醫(yī)院血液內(nèi)科，十堰442000

目的：研究鹽酸川芎嗪（TMP）對青霉素致癇大鼠的血液流變學指標、血小板聚集率和去甲腎上腺素含量的變化。方法：制備青霉素致癇大鼠模型，采用BL-410生物機能實驗系統(tǒng)記錄雙側(cè)大腦皮層癲癇樣放電，放電穩(wěn)定后，腹腔注射不同劑量TMP，待其抑制作用最明顯時（30min后），采血檢測血液流變學指標、血小板聚集率和去甲腎上腺素含量。結(jié)果：青霉素致癇組紅細胞壓積（Hct）、全血黏度、血漿黏度、血漿纖維蛋白原水平均高于TMP治療組（P＜0.01），而腦血流量顯著低于TMP組（P＜0.01），血小板聚集率和血漿去甲腎上腺素水平比較亦有顯著性差異（P＜0.01）。結(jié)論：TMP對青霉素致癇大鼠血小板聚集率和去甲腎上腺素含量有明顯影響；TMP在血液流變性方面有對抗應激損傷的作用。

Effect of Chlorpromazine Hydrochloride Injection on Peni-cillin-induced Epilepsy Rat Blood Rheology，Platelet Ag—gregation and Plasma Norepinephrine Levels

Zhang Xia，Liu Yu yin，Zhang Zhenghua，et al／Affiliated Taihe Hospital of Hubei University of Medicine，Shiyan 432000

Tetramethylpyrazine；Epilepsy； Hemorheology；Platelet aggregation rate；Noradrenaline

R331

A

1005—1740（2011）02—0016—03

1湖北醫(yī)藥學院附屬太和醫(yī)院血液內(nèi)科，郵政編碼

Objective：To study effect of tetramethylpyrazine hydrochloride（TMP）on penicillin-induced epileptic rats blood rheology，platelet aggre-gation rate and norepinephrine content changes.Method：Preparation of penicillin-induced epileptic rats，and a BL-410 bio-functional experimental system recorded a two-sided epileptiform discharges in the cerebral cor-tex，epileptiform discharges after stabilization，intraperitoneal injection of different doses of TMP，and its inhibitory effects of the most obvious（30 minutes），blood rheology of blood testing，platelet aggregation rate and norepinephrine levels were detected.Results：Penicillin induced epilepsy group hematocrit（Hct），blood plasma fibrinogen，quantitative plasma viscosity，viscosity were higher than the TMP group（P＜0.01），while cerebral blood flow was significantly lower than the TMP group（P＜0.01）.Platelet aggregation and plasma noradrenaline levels were also sig—nificant difference compared with two group（P＜0.01）.Conclusion：TMP has effect on penicillin-induced epileptic rats platelet aggregation rate and norepinephrine levels.TMP with respect to hemorheological antagonistic effect of stress injuries.

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