肝臟型脂肪酸結(jié)合蛋白與慢性腎臟病的相關(guān)性研究

鄭 偉,那 宇,袁洪萍

（1吉林大學(xué)第四醫(yī)院ICU科,吉林長春 130011;2解放軍306醫(yī)院腎內(nèi)科）

近年來大量臨床和實驗研究表明,小管間質(zhì)損傷在CKD進(jìn)程中起重要作用。在各種原發(fā)、繼發(fā)腎小球疾病和非腎小球疾?。ㄈ缏阅I盂腎炎、慢性梗阻性腎?。┲?腎小管間質(zhì)病變程度是反映腎功能下降嚴(yán)重程度和判斷預(yù)后最重要的指標(biāo)。游離脂肪酸（FFAs）超負(fù)荷可能是導(dǎo)致腎小管間質(zhì)損傷引起多種腎臟疾病的一個共同機制。L-FABP可以結(jié)合脂肪酸并把他們轉(zhuǎn)運到線粒體或過氧化物酶體中進(jìn)行β氧化,來發(fā)揮一定的脂肪酸代謝穩(wěn)態(tài)作用[1,2]。Kam ijo等[3]發(fā)現(xiàn)尿L-FABP的含量與腎小管間質(zhì)損害的嚴(yán)重性密切相關(guān)。為了探討L-FABP是否與慢性腎病的相關(guān),我們進(jìn)行了尿L-FABP與慢性腎臟病的相關(guān)性研究。

1 材料與方法

1.1 試劑與儀器 L-FABP ELISA試劑盒產(chǎn)自美國GBD公司,購自北京鼎國生物技術(shù)有限責(zé)任公司。7170A全自動生化檢測儀（日立公司,日本）,BIORADModel550酶標(biāo)儀,Haier BCD-268深低溫冰箱,醫(yī)用離心機,微量加樣器,2-8℃冰箱,三用電熱恒溫水浴箱,振蕩搖床,MK2全自動多功能洗板機。

1.2 實驗方法

1.2.1 研究對象分組 實驗選取無肝臟損害慢性腎臟病組（CKD組）60例,CKD1-2期20例、CKD3-4期20例、CKD5期20例。,為2008年8月至2010年1月吉林大學(xué)第四醫(yī)院腎內(nèi)科診治的患者。慢性腎臟病的診斷分期依據(jù)依據(jù):美國NKF K/DOQI指南[4]。健康組20例,從2009年12月在吉林大學(xué)第四醫(yī)院住院的病人中隨機選取。

1.2.2 標(biāo)本留取 留取研究對象的新鮮尿液標(biāo)本保存在深低溫冰箱中以待集中檢測尿L-FABP,其他血液及尿液標(biāo)本當(dāng)日檢測。

1.2.3 血肌酐（Scr）測定:采用日立7170A全自動生化儀測定。

1.2.4 腎小球濾過率（GFR）的計算:用簡化MDRD方程[4]計算,公式為:GFR[ml.min-1（1.73m2）-1]=186×[Scr（mg/dl）]-1.154×[年齡]-0.203×[女性×0.742]。

1.2.5 尿L-FABP測定:應(yīng)用美國GBD公司的ELISA試劑盒測定。

2 結(jié)果

2.1 各組尿L-FABP的比較 不同CKD分期患者尿L-FABP水平及隨著CKD分期的進(jìn)展,尿L-FABP水平逐漸上升。各組尿 L-FABP水平見表 1。Wilconxon秩和檢驗顯示CKD各分期間尿L-FABP水平比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（H=69.05,P＜0.001）,亞組分析CKD1-2期尿L-FABP水平高于健康組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.001）,CKD3-4期尿L-FABP水平高于 CKD1-2期,差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.001）,CKD5期尿L-FABP水平高于CKD3-4期,差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.001）。見表2。

表1 各組尿L-FABP水平（μmol/l）

2.2 尿L-FABP與其他指標(biāo)的相關(guān)性分析

Pearson相關(guān)性分析顯示尿L-FABP與GFR呈顯著負(fù)相關(guān)（rs=-0.942,P＜0.001）,與Scr呈顯著正相關(guān)（rs=0.948,P＜0.001）,見表3。

表2 各組尿L-FABP的比較（μmol/l）

表3 尿L-FABP與臨床指標(biāo)相關(guān)分析

3 討論

慢性腎臟?。–KD）已經(jīng)成為全世界的公共健康問題。在美國腎衰竭的發(fā)生率逐漸增加,而且預(yù)后差,花費高。據(jù)統(tǒng)計,每1萬人口中,每年約有 1人發(fā)生慢性腎衰。早期發(fā)現(xiàn)腎損害、監(jiān)測CKD的進(jìn)程及判斷預(yù)后顯然非常重要。目前尿中的參數(shù)都是隨著細(xì)胞結(jié)構(gòu)的破壞而增加的,像尿蛋白與白蛋白在腎小球結(jié)構(gòu)破壞后增加,而n-乙酰-6-d-氨基葡萄糖苷酶是在近曲小管結(jié)構(gòu)破壞后增加。但是在腎臟疾病時L-FABP在近曲小管里的表達(dá)是上調(diào)的,尿中從近曲小管中分泌出的L-FABP在小管結(jié)構(gòu)被破壞之前就已經(jīng)增加。隨著腎功能的惡化,當(dāng)尿蛋白與尿n-乙酰-B-d-氨基葡萄糖苷酶（NAG）的變化還不明顯的時候,尿中的L-FABP就已顯著升高。因此尿中的L-FABP可更早地反映慢性腎病的發(fā)展。尿LFABP可能是一種監(jiān)測CKD進(jìn)程的新的特異的生化指標(biāo)[5,6]。

L-FABP在肝臟和腎臟均有表達(dá),有可能來自于肝臟的血清L-FABP影響尿L-FABP水平。有報道血清L-FABP在一些肝臟疾病如急慢性肝炎時增高[7],在這種情況下,來自肝臟的血清L-FABP經(jīng)腎小球濾過并且可能影響到尿L-FABP水平。因此,我們排除了有明確肝損傷的病人。也有研究表明在肝臟損害時的血L-FABP顯著高于腎臟疾病及健康人,但尿L-FABP水平在肝臟疾病和健康人無差異[8]。

本研究結(jié)果顯示隨著CKD各組病程的進(jìn)展,尿L-FABP水平逐漸上升。CKD各組間尿L-FABP水平比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義。尿L-FABP與GFR呈顯著負(fù)相關(guān),與Scr呈顯著正相關(guān)。有研究發(fā)現(xiàn)終末期腎衰竭主要的病理改變是小管間質(zhì)性的損害,而尿液中的 L—FABP與小管間質(zhì)性損害嚴(yán)重程度相關(guān)[9]。多項研究證實小管間質(zhì)損傷在CKD的進(jìn)程中起重要作用[10,11],腎小管間質(zhì)病變程度是反映腎功能下降嚴(yán)重程度和判斷預(yù)后最重要的指標(biāo)。動物模型和體外細(xì)胞研究也證明蛋白尿通過損傷腎小管上皮細(xì)胞而加重腎小管間質(zhì)病變[12]。盡管體外研究表明高濃度白蛋白可誘發(fā)小管上皮細(xì)胞的多種反應(yīng),但白蛋白本身對近端小管上皮細(xì)胞并無直接的毒性作用,人類微小病變患者腎組織就無單核細(xì)胞浸潤和慢性小管間質(zhì)損傷[13]。導(dǎo)致腎小管炎癥反應(yīng)或細(xì)胞損傷的導(dǎo)火索更可能是與白蛋白結(jié)合的化合物如游離脂肪酸（FFA）,與FFA結(jié)合的白蛋白具有趨化巨噬細(xì)胞的活性,而去脂的白蛋白無趨化作用。FFAs在近端小管與細(xì)胞內(nèi)的FABP結(jié)合并運輸?shù)骄€粒體或過氧化物酶體[14,15],在那里通過β氧化進(jìn)行代謝。大量蛋白尿時,近端小管的FFAs超負(fù)荷,同時誘導(dǎo)炎癥因子和巨噬細(xì)胞趨化因子,從而引起小管間質(zhì)損害[16-19]。腎實質(zhì)損傷時,L-FABP在近端腎小管的表達(dá)增強,腎固有細(xì)胞能夠大量生成L-FABP,在近端小管與FFAs結(jié)合以后,可以通過過氧化氫體增殖體激活受體介導(dǎo)腎小管上皮細(xì)胞調(diào)亡;通過誘導(dǎo)產(chǎn)生更多的活性氧簇（ROS）而激活核因子-κΒ（NF-κΒ）,使腎小管上皮細(xì)胞產(chǎn)生和釋放炎癥因子、趨化因子增多,損傷小管間質(zhì)。故尿LFABP排泄增多。

總之,尿L-FABP作為一種新的臨床生化指標(biāo),與腎小管間質(zhì)損傷有密切的關(guān)系。L-FABP和各自的過氧化物酶體增生物激活體（PPAR）還可以作為營養(yǎng)素和藥物影響PPAR敏感性基因表達(dá)的靶子。在慢性腎臟病的診斷、鑒別診斷、監(jiān)測進(jìn)程、判斷預(yù)后及治療等方面有廣闊的應(yīng)用前景。

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