薄層色譜法鑒別冠脈寧顆粒的研究

徐曉弘，熊 鑫

大慶油田總醫(yī)院藥學部，黑龍江大慶 163001

冠脈寧顆粒由丹參、葛根、血竭、冰片等14味藥材組合而成，具有活血化瘀，行氣止痛。用于以胸部刺痛、固定不移、心悸不寧、入夜更甚、舌質(zhì)紫暗，脈沉弦為主癥的冠心病、心絞痛、冠狀動脈供血不足[1]。冠脈寧片處方收載于《中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標準·中藥成方制劑》。本次實驗依據(jù)相關文獻并結合復方中主藥的特點，用薄層色譜法對丹參、葛根、當歸、紅花進行定性鑒別，從而更好地對“冠脈寧顆粒”進行質(zhì)量控制。

1 試劑與試藥

1.1 試藥

丹參、葛根、當歸、紅花（長春宏檢藥材公司），對照品：人參皂苷Rb1、Rg1、三七皂苷R1、木犀草素（中國藥品生物制品檢定所）。

1.2 試劑

正丁醇、甲醇、磷酸、正己烷、乙酸乙酯、氯仿、乙醚。

2 實驗方法與結果

2.1 性狀

本品呈顆粒狀，棕褐色；氣香，味微苦。

2.2 鑒定分析

薄層色譜法鑒別參照《中國藥典》（2005年版）一部項下薄層鑒別方法，并結合相關的文獻對丹參、當歸、紅花、葛根進行薄層鑒別，再對鑒別結果進行定性分析。

2.2.1 薄層鑒別丹參 取本品5 g，研成細粉。加三氯甲烷50 ml，加熱回流1.5 h，濾過后藥渣備用，濾液蒸干，殘渣加乙醇3 ml使溶解、濾過，濾液作為供試品溶液。丹參在處方中為主藥，其有效成分丹參酮ⅡA含量直接影響藥效的發(fā)揮[2]。所以另取丹參酮ⅡA作為對照品，加入乙醇制成每1 ml含0.5 mg的丹參酮ⅡA對照品溶液。按照《中國藥典》（2005年版）一部附錄ⅥB薄層色譜法中薄層色譜法進行試驗，然后分別吸取4μl上述兩種溶液，在同一硅膠G薄層板上分別點樣，其中硅膠板的黏合劑是羧甲基纖維素鈉，展開劑為苯-乙酸乙酯，配制比例為19∶1，展開，晾干。結果顯示：在供試品色譜中，在與對照品色譜斑點相應的位置上，顯相同的暗紅色斑點。

2.2.2 薄層鑒別紅花 紅花具有活血通經(jīng)、祛瘀止痛等功效,其藥理作用主要表現(xiàn)為抗凝血、抗血栓[3]，研究結果亦有表明紅花具抑制炎癥反應的作用。取本樣品3 g，加入80%的丙酮25 ml后，進行30 min的超聲提取，濾過，濾液作為試驗的供試品溶液并濃縮至5 ml。再取3 g紅花對照藥材細粉，同樣以80%的丙酮溶解并超聲30 min，所得濾液作為對照溶液。不含紅花藥材的陰性對照液也按處方的比例制得。按照《中國藥典》（2005年版）一部附錄ⅥB中薄層色譜法進行試驗，吸取對照藥材溶液、陰性對照液和三批供試品溶液各5μl，再統(tǒng)一用醋酸乙酯-甲酸-水-甲醇按 7∶2∶2∶0.4 的比例為展開劑的硅膠H薄層板上分別點樣，展開薄層板，晾干。結果：供試品色譜中，與對照品色譜相同位置上，顯出的斑點顏色是相同的，無陰性干擾。

2.2.3 薄層鑒別當歸 當歸主要成分含揮發(fā)油和水溶性物質(zhì)兩大類。揮發(fā)油中以藁本內(nèi)酯和正丁烯酉夫內(nèi)酯為主要成分[4]。取本品內(nèi)容物約4 g，研細后，加入石油醚（60~90℃）30 ml，經(jīng)過40 min的超聲處理后，濾過并蒸干濾液，用3 ml的無水乙醇將殘渣溶解，作為供試品溶液。對照品溶液的配制則另取5 g當歸對照藥材，相同于供試品溶液的方法配制完成。按照《中國藥典》（2005年版）一部附錄ⅥB中薄層色譜法試驗方法，對上述兩種溶液各吸取5μl，在同一硅膠G薄層板上點樣，展開劑以9∶1比例配制的正己烷-醋酸乙酯溶液，展開薄層板，晾干。結果：在365 nm的紫外燈下檢視，相應于對照藥材色譜的位置上，供試品色譜顯相同顏色的熒光斑點[5]。2.2.4葛根的薄層鑒別[6]取本品內(nèi)容物5 g，加甲醇50 ml，超聲提取45 min，濾過，蒸干濾液，用水25 ml加入將殘渣溶解，濾過，用乙酸乙酯提取，每次20 ml，共提取5次。合并乙酸乙酯層，用無水硫酸鈉吸去多余水分，濾過，蒸干乙酸乙酯，殘渣加甲醇1 ml使溶解，過濾，濾液作為供試品溶液。對照品溶液配制則用甲醇溶解葛根素對照品，制成每1 mg/ml的溶液。另取除葛根外的的陰性樣品粉5 g與等量的基質(zhì)混合進行均勻，同法制得了陰性供試品溶液。分別吸取4μl上述對照品溶液、樣品及陰性溶液，再統(tǒng)一以氯仿-甲醇-乙酸乙酯-水按3∶3∶4∶0.8的比例為展開劑的硅膠G薄層板上分別點樣，展開薄層板，取出，晾干，置365 nm的紫外線燈下檢視，相同于對照品色譜位置上，供試品色譜顯相同顏色的熒光斑點。

3 討論

活血通絡片由丹參、沒藥（炒）、血竭、雞血藤、延胡索（醋制）、郁金、當歸、制何首烏、桃仁（炒）等14味藥組成。以丹參為君藥，內(nèi)可以化臟腑之瘀滯，外可通經(jīng)而宣導氣機。臣藥雞血藤補血活血，疏通經(jīng)絡；延胡索、紅花活血化瘀，行氣止痛，血竭祛瘀定痛。佐用當歸、何首烏和黃精補血生精，養(yǎng)心安神，體現(xiàn)標本兼具之用[7]。本次試驗采用薄層色譜法（TLC）對本制劑中的四味藥材丹參、當歸、葛根、紅花進行鑒別研究，對照實驗均以四味藥材各自的藥材中相應有效成分及陰性對照品進行試驗。經(jīng)過多次鑒別實驗后，四種藥材實驗測得的斑點均清晰可見，具有良好的重現(xiàn)性，且陰性無干擾。綜上，用薄層色譜法鑒別冠脈寧顆粒的實驗具有操作簡單、穩(wěn)定、重現(xiàn)性及專屬性都很強的特點，可作為此類中藥制劑質(zhì)量控制的定性依據(jù)，為今后標準的進一步修訂提供了依據(jù)。

[1]張雪慧.HPLC法測定冠脈寧顆粒中丹參素鈉的含量[J].現(xiàn)代中醫(yī)藥,2008,28(1):60-61.

[2]賈艷寧,吳麗紅,張慶.復方丹參片中丹參提取工藝研究[J].黑龍江醫(yī)藥,2004,17(5):365-366.

[3]徐如英,童樹洪.紅花的化學成分及藥理作用研究進展[J].綜述報告,2010,19(20):86-87.

[4]杜天璽,郭延生,華永麗,等.當歸炭飲片質(zhì)量標準研究[J].時珍國醫(yī)國藥,2010,21(9):2156-2158.

[5]中華人民共和國藥典委員會.《中華人民共和國藥典》[S].北京:化學工業(yè)出版社,2005:103,109.

[6]劉紅霞,孫志坡,梁軍.冠脈寧軟膠囊薄層色譜鑒別研究[J].方藥縱橫,2007,34(3):343-344.

[7]劉萬利.冠脈寧片治療心血瘀阻型胸痹療效觀察[J].中國現(xiàn)代藥物應用,2009,3(18):95-96.