草莓上一種新病害——草莓角斑病

劉天鴻 楊萬風

草莓角斑?。ˋngular leaf spot of strawberry）是草莓生產(chǎn)上的主要病害，其病原菌為黃單孢桿菌屬草莓黃單孢菌，屬細菌草莓角斑病菌。1962年首次報道于北美洲，草莓角斑病會引起產(chǎn)量下降，但一般不是毀滅性的。已有該病害發(fā)生的國家包括：歐洲的法國、希臘、意大利、葡萄牙、羅馬尼亞、西班牙；非洲的留尼汪；美洲的美國、阿根廷、巴西、委內(nèi)瑞拉；大洋洲的澳大利亞和新西蘭。我國將該病菌列入檢疫性有害生物名單，在歐洲及地中海植物保護組織（EPPO）為A2類檢疫性有害生物。該病可隨著草莓繁殖材料的引進而迅速傳播，因此，必須采取嚴格的檢疫措施，防止該病菌通過貿(mào)易傳入我國。

1 分類地位

草莓角斑病菌屬于原核生物界（Procaryote），薄壁細菌門（Gracilicutes），暗細菌綱（Scotobacteria），假單胞桿菌科（Pseudomonadaceae），黃單胞桿菌屬（Xanthomonas）。

2 寄主

廣泛種植的草莓（Fragaria ananassa）是該病原菌的主要寄主。Fragaria ananassa是智利草莓（F.chiloensis）和深紅莓（F.virginiana）的雜交種，病原菌對草莓屬的其他品種的致病性變化較大。人工接種情況下，弗州草莓（F.virginiana）、野草莓（F.vesca）、金露梅（Potentilla fruticosa）和委陵菜（P.glandulosa）均可被草莓角斑病菌侵染。草莓屬（Fragaria）植物中僅麝香草莓（F.moschata）對草莓角斑病菌免疫。

3 主要發(fā)病癥狀

草莓角斑病菌初侵染時在葉片下表面出現(xiàn)1～4 mm大小的水浸狀紅褐色不規(guī)則形病斑，病斑擴大時受細小葉脈所限呈角形葉斑。病斑在可見光下照光呈透明狀，但以反射光看時呈暗綠色。病斑逐漸擴大后融合成一體，逐漸變成淡紅褐色而干枯；濕度大時葉背可見溢的出菌膿，干燥條件下成一薄膜，病斑常出現(xiàn)在葉尖或葉緣處，嚴重時使植株生長點變黑枯死，葉片發(fā)病后常干縮破碎形成孔洞。在適宜的條件下，花萼也會受到侵染。另外，該細菌還可導致維管束病變。

4 形態(tài)特征

無莢膜桿菌，單個、成雙或成短鏈，具單根極鞭，革蘭氏染色陰性，大小約為0.4μm×1.3μm。病菌生長較慢，在培養(yǎng)基上4～5 d（天）才能形成菌落。營養(yǎng)瓊脂上，菌落圓屋頂形，邊緣整齊規(guī)則，有光澤，黃色奶油狀。好氧菌，氯化鈉最大耐受力為0.5%～1.0%，生長最適溫度25℃，超過33℃不能生長。明膠液化、淀粉水解，不水解七葉苷，不從阿拉伯糖、半乳糖、海藻糖、纖維二糖溶液產(chǎn)酸，不能利用天冬酰胺作唯一碳源和氮源。

5 生物學特性

病葉殘渣和帶菌植株是發(fā)病的初侵染源。在病殘葉和土壤中，病菌能夠存活到下茬作物；在實驗室保存的干燥病葉片中，病原菌至少可存活兩年半。在草莓開始生長時，病原菌由病殘葉傳播到幼葉上，細菌可從侵染區(qū)沿著幼葉基部葉脈擴散。病原菌可通過氣孔侵入，也可通過局部傷口或下方的病葉侵染，在整個生長期發(fā)生多個侵染循環(huán)，病菌可侵染花，但不侵染果實。中等偏低的日溫（大約20℃）、夜間低溫及較高的濕度更有利于該病菌的侵染。

6 傳播途徑

草莓角斑病菌可以通過雨水和田間灌溉飛濺進行局部傳播、擴散，攜帶病菌的草莓苗以及夾雜在草莓苗中的病殘體都可能隨貿(mào)易進行短距離和長距離的運輸傳播。

7 檢測技術

首先，檢查病害癥狀，看草莓托葉上有無角斑癥狀；其次，檢查有角斑癥狀的病葉，是否有該病原菌存在，可以通過直接分離法和間接分離法。即將具水浸狀病斑的葉片放在研缽中，加少量蒸餾水研磨浸漬，制成細菌懸浮液，然后，用間接熒光免疫抗體染色法（IFAS）檢查。必要時可以采用劃線分離該病原菌。通常是在YPGA等平板上劃線，并在25℃下培養(yǎng)，5～7 d（天）后就可以看到第1批菌落。菌落圓形，大小為0.5～1.0mm，黃色，圓頂狀，邊緣規(guī)則。該病原菌的純培養(yǎng)和其他黃單胞菌不同，超過33℃不生長，七葉苷不水解，對氯化鈉的耐受度為0.5%～1.0%。由于病原菌在培養(yǎng)基上生長速度很慢，直接分離時常被其他快速生長的微生物所覆蓋，因此較難成功。IFAS技術能成功地檢測濃縮的細菌懸浮液及10倍稀釋液。當檢測結(jié)果為陽性時，在顯微鏡下可以看到幾百個小而圓的熒光細菌，在使用抗血清的不同稀釋度時，沒有其他細菌發(fā)生干擾。

對無癥狀的枝頭進行檢測難度較大。任何受感染的枝頭葉窩只要通過組織檢測就能檢測到細菌，一般只用1個枝頭檢查。最近，有人在研究檢測無癥狀枝頭的方法，即將枝頭洗凈、搗碎、拌勻，用離心的方法將菌液濃縮，再用IFAS檢測。雖然該方法不是很靈敏，但作為初步檢測是很有用的。

PCR分子檢測方法可以克服以上弊端，取待測樣品或分離培養(yǎng)菌株，利用DNA提取試劑盒提取DNA，也可直接用培養(yǎng)的菌株稀釋懸濁液作為模板進行PCR反應。測試菌株經(jīng)PCR反應后，如果PCR產(chǎn)物與陽性對照條帶一致（537 bp），且陰性對照和空白對照均沒有相應條帶，則能證明所測菌株為草莓角斑病菌。否則，則判斷為不是。該方法具有靈敏度高、特異性強、重復性好、快速等優(yōu)點，適合口岸快速、準確的工作特點。

8 檢疫的重要性

草霉角斑病于1962年發(fā)生在北美，感病植株葉片出現(xiàn)病斑、干縮、穿孔，造成草莓大量減產(chǎn)。20世紀80年代以來，由于農(nóng)村經(jīng)濟政策的落實，在一業(yè)為主、多種經(jīng)營方針的指導下，草莓生產(chǎn)得到了迅速的發(fā)展。草莓科研工作也有了明顯進展，建立了品種資源圃，每年從國外引進了上百個優(yōu)良品種，但良種的引入必然帶來草莓角斑病等有害生物傳播的巨大風險。為保護我國草莓產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展，在風險分析的基礎上，我國及時將草莓角斑病列入新的檢疫性有害生物名錄，深入、細致地研究該病的發(fā)生特點和檢測技術，確保引進種苗的健康安全。同時要密切關注草莓角斑病的侵入和發(fā)生情況，一旦發(fā)現(xiàn)，必須進行有效的除害處理，避免該病傳入、傳播，以保護我國草莓產(chǎn)業(yè)。