李寶聚博士診病手記（三十三）辣椒疫病初侵染來源、傳播途徑及防治技術(shù)

江厚春 朱 輝 王滿意 呂國華 李寶聚

辣椒疫?。≒epper Phytophthora Blight）是辣椒生產(chǎn)上一種世界性分布較廣的毀滅性病害，該病發(fā)病周期短，流行速度快，嚴重制約著辣椒生產(chǎn)。辣椒疫病首先于1918年在美國新墨西哥州發(fā)現(xiàn)，中國最早于1940年報道此病在江蘇發(fā)生，此后陸續(xù)有相關(guān)報道，且表現(xiàn)為逐年加重的趨勢。自20世紀80年代以來，辣椒疫病在全國各地的溫室、大棚和露地普遍發(fā)生，弄清其初侵染來源、傳播途徑以及制定有效的防治技術(shù)成為當務(wù)之急。

1 發(fā)病癥狀

辣椒疫病是由辣椒疫霉菌（Phytophthora capsici Leonian）引起的一種土傳病害，在辣椒的整個生育期各部位均可發(fā)病。

1.1 幼苗癥狀 幼苗發(fā)病表現(xiàn)為立枯狀，莖基部呈暗綠色水浸狀軟腐，莖倒伏，有的莖基部呈黑褐色，最后枯萎死亡（彩色圖版1、2）。

1.2 成株期的根部癥狀 根腐型爛根，須根少且易斷，主根、側(cè)根及須根的表皮易剝離，木質(zhì)部變?yōu)榈稚ú噬珗D版3）；莖基部腐爛（彩色圖版4），形成水漬狀或環(huán)繞莖基部的病斑，表皮組織疏松易剝離，木質(zhì)部變色（李寶聚 等，2008）。溫室、大棚及露地的辣椒栽培中，尤以根腐型疫病發(fā)生最普遍（彩色圖版 5）。

1.3 成株期的葉片、果實癥狀 土壤中的病原菌通過雨水飛濺到葉片上，或發(fā)病果實、葉片上的孢子直接飛落到葉片上引起發(fā)病，病斑圓形或近圓形，直徑2～3 cm，邊緣黃綠色，中央暗褐色，濕度大時，可見白色霉層（彩色圖版6）。植株上的病原菌通過維管束系統(tǒng)侵染果實，多從果柄部開始發(fā)病，初生暗綠色水浸狀斑，迅速變褐（彩色圖版7），全果腐爛，濕度較大時，病部產(chǎn)生白色緊密霉層（彩色圖版8），即病原菌孢囊梗和孢子囊，干燥后形成暗褐色條斑，病部以上枝葉迅速凋萎。果實發(fā)病初期僅表現(xiàn)為果肉腐爛，表皮不破裂也不變形，最后脫落。如遇晴天，果實變成暗綠色干果，掛于枝上，果內(nèi)有白色菌絲和孢子囊（彩色圖版 9）。

2 初侵染來源

2.1 種子帶菌 我們采用辣椒疫霉菌胎座注射法對辣椒果實進行處理，于接種后對帶菌種子的傳病情況進行調(diào)查研究。辣椒種子感染疫霉菌后，活力下降，導致發(fā)芽率降低。疫病種子發(fā)芽后播種于土壤中，會有一部分不能出土，腐爛在土壤中，成為當年或翌年的病殘體；出土的幼苗在苗期生長階段會持續(xù)地發(fā)生疫病，因此認為帶菌種子是辣椒疫病的主要初侵染來源之一。

另外，我們進行了辣椒疫病的系統(tǒng)侵染試驗，辣椒植株在莖部人工接種后，病原菌會沿著維管束進行雙向侵染，之后植株發(fā)病萎蔫。將發(fā)病植株上的果實剖開，能觀察到種子上布滿白色的菌絲，經(jīng)顯微鏡鏡檢，鑒定結(jié)果為辣椒疫霉（Phytophthora capsici）。同時，用選擇性培養(yǎng)基對辣椒種子進行檢測，能分離到辣椒疫霉菌。此試驗表明土壤中的病原菌，通過莖基部傳播到植株上，再通過維管束傳播到果實的種子上，導致種子帶菌。

2.2 土壤帶菌 我們采用辣椒疫霉菌人工拌土法對土壤進行處理，于接種后對菌土中種植的辣椒植株發(fā)病情況以及土壤中病原菌的存活情況進行了調(diào)查研究。辣椒植株在帶菌土壤中會持續(xù)發(fā)病，直到定植4個月時，植株發(fā)病才處于穩(wěn)定，此時用選擇性培養(yǎng)基對土壤中的病原菌進行誘集檢測，能分離到辣椒疫霉菌，因此認為帶菌土壤也是辣椒疫病的主要初侵染來源之一。

2.3 土壤中的病殘體 病原菌可隨病殘體在土壤中長時間存活，越冬后的病原菌只要溫、濕度條件適宜便可萌發(fā)進行初侵染。

2.4 苗木 帶病幼苗遠距離調(diào)運是無病地區(qū)的主要初侵染來源之一。

3 傳播途徑

3.1 雨水和灌溉水傳播 土壤中的病原菌以及病株病部產(chǎn)生的孢子囊，都可借雨水飛濺到底部的葉片而傳播到其他辣椒植株上。土壤中的病原菌也可隨灌溉水在田間進行傳播。

3.2 氣流傳播 發(fā)病植株上的孢子囊可隨氣流在田間進行傳播。

3.3 農(nóng)事操作傳播 農(nóng)事操作人員在發(fā)病田塊行走后攜帶病殘體、病土以及發(fā)病植株上的孢子囊，傳播到本田塊或其他田塊。用于翻地等的一些農(nóng)機具也可以傳播病原菌，在一些辣椒疫病多發(fā)的田塊，土壤中積累了大量的病原菌，農(nóng)事操作人員在積累大量病原菌的田塊進行操作后，沒有對農(nóng)具消毒，再到無病原菌或病原菌少的田塊進行農(nóng)事操作，病原菌便隨著農(nóng)具帶到了相對健康的田塊。

4 檢測技術(shù)

4.1 選擇性培養(yǎng)基檢測技術(shù) 國內(nèi)外分離辣椒疫霉菌時側(cè)重點在于使用選擇性培養(yǎng)基（Larkinetal.，1995），其利用病原菌耐營養(yǎng)貧乏的原理，在滿足病原菌生長的基礎(chǔ)上盡量簡化培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分，以造成一種營養(yǎng)貧乏的環(huán)境，在這種環(huán)境下雜菌的生長受到一定的抑制，而對辣椒疫霉菌生長影響不大。選擇性培養(yǎng)基內(nèi)還加入了抑制雜菌生長的化學藥劑，如抑制細菌生長的各種抗生素（氨芐青霉素等）和抑制真菌生長的各種殺菌劑（五氯硝基苯等）。

我們配制了辣椒疫霉菌的專性選擇性培養(yǎng)基，其配方為：匹馬霉素10mg、氨芐青霉素250mg、利福平10mg、五氯硝基苯100mg、惡霉靈100mg、多菌靈10mg，可有效地從病株不同部位的組織、帶菌土壤和辣椒疫病種子中分離出辣椒疫霉菌（表1）。

4.2 免疫學檢測技術(shù) 近十幾年來免疫學技術(shù)在病原菌的檢測方面發(fā)展較快，顯示了常規(guī)方法所不具有的優(yōu)點：① 簡單、快速、準確、靈敏；② 可檢測未顯示癥狀時的病原菌；③可檢測癥狀不典型或與其他病原菌復合侵染時的情況；④可定量檢測病原菌；⑤可同時檢測大量樣品；⑥可制成試劑盒。因此，在田間進行檢測診斷時，無需對病原菌進行分離即可進行準確、快速的檢測。

表1 辣椒疫病種子病原菌分離情況

我們運用免疫學技術(shù)，建立了檢測辣椒疫霉的間接 ELISA（I-ELISA）和斑點 ELISA（Dot-ELISA）方法。這兩種檢測方法的穩(wěn)定性好、特異性強，檢測靈敏度高，可用于田間實際檢測。

4.3 分子生物學檢測技術(shù) 近年來，聚合酶鏈式反應(yīng)（PCR）方法已被成功地用于檢測和鑒定病原菌。其中在以PCR為基礎(chǔ)的方法中，實時熒光定量PCR（Real-timePCR）技術(shù)已被證明是簡單且可靠的技術(shù)，用于量化病毒、細菌、真菌和卵菌植物病原菌，正越來越多地應(yīng)用于植物病原菌檢測。

我們建立的Real-timePCR方法可以成功地用于定量檢測辣椒種子中的疫霉菌。對模擬的不同帶菌率的種子進行檢測時，能夠定量檢測其帶菌率為1/105。

5 防治技術(shù)

針對上述辣椒疫病的初侵染來源及傳播途徑，溫室大棚及露地均可從以下幾個方面制定相應(yīng)的綜合防治措施，從而更好地防止辣椒疫病的發(fā)生和蔓延。

①針對種子傳播，可采取播前種子消毒。采用50%烯酰嗎啉可濕性粉劑2000倍液或20%氟嗎啉可濕性粉劑1000倍液浸種3小時，取出用冷水沖洗后催芽播種，可有效降低種子帶菌率。

②針對土壤以及土壤中病殘體的傳播，可采取土壤高溫消毒。溫室、大棚在高溫季節(jié)（6～8月）氣溫達35℃以上時，每667m2施入切碎的麥秸或稻草500kg及有機肥5000kg左右，然后翻地、灌水、覆膜，再蓋嚴棚膜，密閉15～20天。有條件的可采用石灰氮進行土壤消毒。另可采取土壤浸泡消毒，即做畦灌水，浸泡土壤20天以上。

③針對苗木傳播，可在定植之前用藥劑噴淋辣椒植株，杜絕帶菌苗定植。

④針對灌溉水傳播，可采用高畦栽培，防止辣椒莖基部被淹；針對雨水反濺傳播，可采用行間覆膜，膜下滴灌，減少辣椒莖基部葉片與水直接接觸。

⑤針對農(nóng)事操作的傳播，田間若有病株，一定要等露水下去后再進行農(nóng)事操作，農(nóng)事人員在活動完畢后，應(yīng)及時對衣服、鞋子及農(nóng)具等進行清洗消毒，防止將病原菌帶入無病田塊。

⑥針對田間病株的傳播，應(yīng)及時清除中心病株，并進行藥劑控制。我們利用28種殺菌劑進行了辣椒疫病的離體和活體藥劑篩選。試驗結(jié)果表明，選用50%烯酰嗎啉可濕性粉劑2000倍液或20%氟嗎啉可濕性粉劑1000倍液防治辣椒疫病效果顯著，可在發(fā)病初期用藥劑噴淋植株莖基部和地表，能有效防止初侵染。辣椒生長中后期可采用藥劑灌根進行防治，用50%烯酰嗎啉可濕性粉劑1500倍液灌根，每株50mL，每隔15～20天施藥1次，連施2次，能有效防止再侵染。

李寶聚，石延霞，王滿意，朱輝.2008.辣椒根腐型疫病診斷與防治.中國蔬菜，（6）：55-56.

Larkin R P，Ristaino J B，Campbell C L.1995.Detection and quantification of Phytophthora capsici in soil.Phytophthology，85：1057-1063.