東北農(nóng)業(yè)大學(xué)動物營養(yǎng)研究所 蘇斌朝 王連生 單安山* 白會新
霉菌毒素廣泛存在于各種飼料及飼料原料中,是霉菌的次生代謝產(chǎn)物。目前已知的約有200種,在飼料衛(wèi)生上比較重要的霉菌毒素就有:黃曲霉毒素、雜色曲霉毒素、赭曲霉毒素、單端孢霉毒素類(如T-2毒素、HT-2毒素)、玉米赤霉烯酮、丁烯酸內(nèi)酯、豆類絲核菌素等(于炎湖,1996)。
霉菌毒素每年造成的損失數(shù)以億計,嚴(yán)重危害著畜禽生產(chǎn),已經(jīng)成為飼料業(yè)亟須解決的問題之一。敖志剛(2008)的調(diào)查報告中指出,在其調(diào)查的全部225個樣品中,黃曲霉毒素、赭曲霉毒素、T22毒素、玉米赤霉烯酮、煙曲霉毒素和嘔吐毒素的檢出率分別為92.1%、95.1%、93.4%、91.2%、88.5%和99.1%。
1.1 黃曲霉毒素 黃曲霉毒素 (aflatoxin,AF)是一類主要由黃曲霉 (aspergillus flavus)和寄生曲(aspergillus parasiticus)真菌產(chǎn)生的次級代謝產(chǎn)物,具有極強(qiáng)的毒性。根據(jù)熒光顏色的不同,黃曲霉毒素分為黃曲霉毒素B1、B2(藍(lán)色熒光),G1、G2(綠色熒光),其中以黃曲霉毒素 B1(AFB1)的毒性最強(qiáng)(Sumit等,2010)。不同物種、性別對AF的敏感性不同,通常雄性動物更易感(Maurice,2002)。AF的危害表現(xiàn)在多個方面:(1)降低動物的采食量和日增重,影響生產(chǎn)性能。研究表明,日糧中添加AFB1,肉雞從第三周開始減少采食量,第五周開始體重降低(Jindal,1994)。(2)抑制免疫機(jī)能,增強(qiáng)動物對疾病的易感性。將巨噬細(xì)胞暴露在不同濃度黃曲霉毒素的環(huán)境下,發(fā)現(xiàn)了細(xì)胞的減少和損傷,并表現(xiàn)出劑量效應(yīng)(Neldon,1992)。(3)致畸、致癌、致突變(戴玉瑞,2009)。 體外實驗發(fā)現(xiàn),AF為0.1~10000 ng/mL,可抑制豬淋巴細(xì)胞的合成(Pang 等,1994)。 (4)抑制核酸的合成,間接影響生物大分子的合成及發(fā)揮正常的生物學(xué)功能(馮建蕾,2005)。
1.2 嘔吐毒素 嘔吐毒素,又名脫氧雪腐鐮刀菌烯醇(deoxynivalenol,DON),是一種由鐮刀菌屬等產(chǎn)生的毒性代謝產(chǎn)物,屬于單端孢霉烯族化合物?,F(xiàn)已證實,包括禾谷鐮刀菌、擬枝鐮刀菌、梨孢鐮刀菌等多種鐮刀菌株以及頭孢菌屬、漆班菌屬、木霉屬等菌株都可產(chǎn)生該毒素 (Marasas等,1984)。研究表明,DON具有急慢性毒性作用,可引起豬食欲減退或廢絕,嘔吐,體重下降,流產(chǎn),死胎和弱仔,抑制免疫機(jī)能和降低機(jī)體抵抗力(Swamy等,2002);具有細(xì)胞毒性作用,產(chǎn)生翻譯抑制作用,并且可以抑制蛋白質(zhì)的合成 (James,2007)。此外,DON還具有免疫毒性,它既是一種免疫抑制劑,又是一種免疫促進(jìn)劑,其作用與劑量有關(guān) (鮑淑青,2007)。
1.3 玉米赤霉烯酮 玉米赤霉烯酮(zearalenone,ZEA)是由鐮刀菌產(chǎn)生的一種類雌激素樣真菌毒素。它最重要的毒害作用是產(chǎn)生生殖毒性,降低免疫力。研究表明,它具有很強(qiáng)的生殖毒性和致畸作用,能引起生殖器官變形和功能的改變,如引起母豬外陰陰道炎,降低胚胎存活率和胎兒初生重(Michel和 Jean,1994)。 此外,它還能刺激雌激素受體的轉(zhuǎn)錄,作為類固醇等的受體替代物干擾內(nèi)分泌(Gremmels,2007)。 ZEA 已被證明具有基因毒性,曾導(dǎo)致體外培養(yǎng)的牛淋巴細(xì)胞DNA加和物的形成(Lioi等,2004)。同時,它還可能誘發(fā)腫瘤,而且也具有血液和免疫毒性方面影響,對人和動物的健康存在極大的危害(鄧友田,2007)。
吸附包括物理吸附和化學(xué)吸附兩類,物理吸附的作用力是范德華力,吸附速度快、可逆、多層、無選擇性;化學(xué)吸附有原子或分子的電子轉(zhuǎn)移、交換,形成化學(xué)健,吸附熱大、有選擇性、不可逆、速度慢(周巖民,2009)。具有吸附作用的物質(zhì)稱為吸附劑,其特點為比表面積大、選擇性吸附能力強(qiáng)、表面和孔結(jié)構(gòu)適宜、不與介質(zhì)發(fā)生化學(xué)反應(yīng)等。飼料中常用的吸附劑有硅鋁酸鹽類吸附劑、酵母細(xì)胞壁及其提取物、活性炭等。
2.1 鋁硅酸鹽類 鋁硅酸鹽是粘土類霉菌毒素吸附劑的主要化學(xué)成分。因其具有不飽和負(fù)電荷及陽離子交換能力,故可以捕獲、吸附和固定毒素,降低腸道對毒素的吸收,降低毒害作用(史瑩華,2005)??勺鳛槊咕舅匚絼┑恼惩林饕蟹惺?、蒙脫石、高嶺土、硅藻土等 (盧永紅等,2005)。齊德生(2002)指出,沸石和蒙脫石都具有巨大的比表面積和永久負(fù)電荷,有較大表面積且能產(chǎn)生較大的靜電引力,使其具有巨大的吸附能力,易結(jié)合極性分子,如黃曲霉毒素,卻不易吸收極性不強(qiáng)的嘔吐毒素和玉米赤霉烯酮。普通鋁硅酸鹽在使用中常需要改造(因其吸附力低,尤其是膨潤土和沸石)。此外,霉菌毒素的單一吸附特性、體內(nèi)與體外試驗不總是相關(guān)(Abdel等,2002)、結(jié)合毒素的穩(wěn)定性不高及吸附營養(yǎng)物質(zhì)或干擾其吸收等成為鋁硅酸鹽類吸附劑的主要缺陷。
2.2 酵母細(xì)胞壁及其提取物 近年來研究發(fā)現(xiàn),酵母細(xì)胞壁及其提取物可以吸附霉菌毒素來提高動物健康。酵母細(xì)胞壁的重要提取物包括β-葡聚糖和蛋白質(zhì)結(jié)合物(糖蛋白)以及甘露寡糖。其中,糖蛋白可以通過氫鍵和分子間作用結(jié)合霉菌毒素形成復(fù)合物,阻礙腸道的吸收;甘露寡糖可以通過螯合霉菌毒素起到保護(hù)作用。目前,研究較多的是葡甘露聚糖(glucomannan,GM),它是釀酒酵母細(xì)胞壁的活性提取物,呈現(xiàn)出多種和脂類物質(zhì)不同的吸鍵、離子鍵、疏水鍵(Huwig 等,2001)。
2.3 活性炭 活性炭是一種具有高比表面積的多孔不溶性粉末狀物質(zhì),其比表面積可達(dá)到500~3500 m2/g?;钚蕴康奈阶饔猛耆巧⒘?,表面呈惰性,其對非極性有機(jī)物吸附性較強(qiáng),能吸附霉菌毒素(齊德生,2002)。近年來的研究發(fā)現(xiàn),活性炭的吸附作用具有非特異性,在吸附霉菌毒素時,也會吸附其他營養(yǎng)物質(zhì)。
2.4 復(fù)合型霉菌毒素類 在生產(chǎn)實踐中,霉菌產(chǎn)生的毒素通常為多種,而單一吸附劑對霉菌毒素的吸收表現(xiàn)為單一性。為了開發(fā)廣譜霉菌毒素吸附劑,經(jīng)過一定配比和特殊制作工藝制成的復(fù)合型霉菌毒素吸附劑逐步成為研究熱點。如鋁硅酸鹽類吸附劑易吸附黃曲霉毒素,酵母細(xì)胞壁及其提取物易于吸附玉米赤霉烯酮及嘔吐毒素,將鋁硅酸鹽類和酵母細(xì)胞壁提取物配合出復(fù)合型吸附劑可能有效地解決吸附劑廣譜吸附的問題。復(fù)合型吸附劑的作用力往往是非常復(fù)雜的,依配制方法和材料而異。
3.1 鋁硅酸鹽類 李娟娟等(2010)發(fā)現(xiàn),水合鋁硅酸鹽(HSCAS)在不同的酸堿環(huán)境中結(jié)合AFB1的速率和穩(wěn)定性都非常好,可以顯著降低AFB1對肉仔雞的危害。齊德生(2004)研究表明,利用季銨鹽改性蒙脫石對AFB1的吸附量最高達(dá)
682.4 μg/g,且不受賴氨酸濃度、溫度及pH變化的影響,用三氯甲烷、甲醇、丙酮解吸時表現(xiàn)出高穩(wěn)定性。夏枚生(2005)的試驗表明,酸改性坡縷石較改性前對AFB1的吸收更為顯著,有更好的去毒作用。近年來,納米技術(shù)已被應(yīng)用于對霉菌毒素的吸收。史瑩華(2007)研究指出,黃曲霉毒素污染的飼糧中添加蒙脫石納米復(fù)合物后飼喂豬后,顯著降低了AFB1在豬體組織中的殘留量,明顯改善了試驗豬的生長性能,減輕甚至消除了AFB1對動物生長性能和肝臟功能等的不良影響。各種改性鋁硅酸鹽在增強(qiáng)吸附霉菌毒素的效率和穩(wěn)定性方面大都有較大的提高,但較少涉及單一吸附特性及對營養(yǎng)物質(zhì)的吸附研究,吸附機(jī)制也還有待深入研究和探討。
3.2 酵母細(xì)胞壁及其提取物 試驗表明,葡甘露聚糖聚合物吸附劑對DON和ZEA具有一定的脫毒作用,對其他養(yǎng)分無顯著副作用(Hernandez等,2009)。李華(2009)的研究指出,酯化葡甘露聚糖(EGM)能很好地吸附DON,減輕DON對小鼠的毒性損傷作用,在飼料中的最適添加劑量為0.10%。EGM可緩解AF、T–2、ZEA和DON對小鼠的毒害。常順華(2010)認(rèn)為,EGM可提高仔豬的日增重,降低料重比,扭轉(zhuǎn)霉菌毒素對仔豬的過氧化損傷,在仔豬霉變飼料中的適宜添加劑量為0.2%。
3.3 活性炭 體外試驗表明,活性炭對霉菌毒素有較好的吸附脫毒作用,然而在體內(nèi)得不到驗證。在吸附霉菌毒素的同時,其對飼料中的某些營養(yǎng)成分和藥物也有吸附作用,如活性炭對土霉素有很強(qiáng)的吸附能力,從而降低了營養(yǎng)物質(zhì)的吸收和藥物的效價。此外,活性炭的吸附具有較強(qiáng)特異性。例如,在含有10 mmol/L AFB1的飼料中添加0.1%活性炭能夠減少AFB1對肉雞的影響(Dalvi和 Mccowav,1984)。 然而,Kubena 等(1999)研究發(fā)現(xiàn),添加0.5%活性炭不能減輕仔雞日糧中T-2毒素的毒性。近年來,活性炭在吸附霉菌毒素方面的研究較少,可能在付諸實際應(yīng)用時存在上述局限性。
3.4 復(fù)合型霉菌毒素類 Monica(2007)的試驗中,應(yīng)用了酵母細(xì)胞壁、粘土和植物提取物的各種混合物及腐殖質(zhì)、其他改性吸附劑對ZON和DON的體外吸附,結(jié)果表明,復(fù)合型吸附劑對ZON的吸附比腐殖質(zhì)、酵母細(xì)胞壁顯著;所有這些吸附劑對DON的吸附效果不很理想。徐雪梅(2008)研究了各種單一及按特殊比例配制的復(fù)合型吸附劑對AFB1、ZEA、DON的吸附規(guī)律和解吸情況。結(jié)果表明,pH為2.0時,以葡甘聚糖與膨潤土復(fù)合物 (比例1∶1)對ZEA的吸附量最高,為1776 μg/g。pH為8.0時,葡甘聚糖與膨潤土復(fù)合物(比例 2∶1)對 AFB1的吸附量最高,為 217.39 μg/g。兩種pH條件下,葡甘聚糖與膨潤土復(fù)合物(比例 1∶1)對 AFB1、ZEA 的吸附率超過了單一吸附劑,解析率也較低,對DON的吸附不如AF、ZEA顯著。試驗產(chǎn)生的不同效果可能與動物及日糧因素有關(guān),與復(fù)合型吸附劑中各吸附劑的種類和配比可能也有關(guān)。關(guān)于復(fù)合型吸附劑的吸附實驗缺乏系統(tǒng)的研究,需要更多的研究。
研究表明,霉菌毒素可以通過吸附作用得到緩解或有效的消除。目前,其他技術(shù)手段還不成熟或者有其局限性,吸附作用因其方便、高效、易于廣泛應(yīng)用等的特點而具有較強(qiáng)的優(yōu)勢。當(dāng)前存在的問題,主要表現(xiàn)在吸附的低效性、單一吸附劑不能廣譜吸收各類霉菌毒素、吸附效果的不穩(wěn)定性、高效的吸附劑商品還不多等等,對于吸附機(jī)制等深層次的問題一直沒有得到很好的解釋,部分研究尚停留在假設(shè)和猜想方面。
因此,需要研制更多高效穩(wěn)定的吸附劑并付諸應(yīng)用。目前任何單一吸附劑都不能很好的解決霉菌毒素廣譜吸附的問題,根據(jù)霉菌毒素的分布和種類,選取優(yōu)勢的吸附劑進(jìn)行合理的改造和配伍將是未來研究的方向。此外,還需要通過深層次的吸附機(jī)理研究,確定各類吸附劑及霉菌毒素間的吸附原理以促進(jìn)更多更好吸附劑的開發(fā)。
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