液體復(fù)合酶對(duì)草魚生長(zhǎng)、養(yǎng)分消化率及體組成的影響

武 漢 工 業(yè) 學(xué) 院 王輔臣 黃 峰 汪 華 丁斌鷹

武漢新華揚(yáng)生物股份有限公司 周金敏 張 偉

飼料中添加酶制劑可有效提高飼料的利用率，降低飼料成本，提高養(yǎng)殖效益（陳喜斌，2003）。目前，在水產(chǎn)酶制劑的相關(guān)研究中，大多采用直接添加固態(tài)酶制劑，但調(diào)質(zhì)和制粒時(shí)的高溫可能會(huì)使添加的酶失活，從而影響酶制劑的添加效果。本研究以草魚為研究對(duì)象，采用后噴涂方式在飼料中噴涂不同水平的液體復(fù)合酶，研究其對(duì)草魚生長(zhǎng)、養(yǎng)分消化率及體組成的影響，旨在為液體復(fù)合酶制劑在水產(chǎn)飼料中的應(yīng)用提供試驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)魚和試驗(yàn)復(fù)合酶 試驗(yàn)用草魚購(gòu)自武漢東西湖漁場(chǎng)，初始體重4.6 g左右。試驗(yàn)前將草魚集中暫養(yǎng)于2 m×1.5 m×1.5 m的暫養(yǎng)池中，投喂基礎(chǔ)日糧馴化1周。挑選體質(zhì)健康，大小一致的試驗(yàn)魚，經(jīng)藥物浸洗后隨機(jī)分為9組，每組設(shè)3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)35尾魚，隨機(jī)放入已經(jīng)消毒的室內(nèi)圓形水族箱（直徑80.0 cm，高60.0 cm）中進(jìn)行飼養(yǎng)，試驗(yàn)期為84 d。

試驗(yàn)用酶制劑為液體水產(chǎn)專用復(fù)合酶，由武漢新華揚(yáng)生物股份有限公司提供。液體復(fù)合酶組成：木聚糖酶6000 IU/mL、葡聚糖酶1000 U/mL、甘露聚糖酶20000 U/mL和纖維素酶20000 U/mL。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì) 試驗(yàn)采用梯度法，以粗蛋白質(zhì)含量35%左右的配合飼料作為基礎(chǔ)日糧 （CA組）；在基礎(chǔ)日糧中直接添加0.20 mL/kg液體復(fù)合酶（CE組）；調(diào)整基礎(chǔ)日糧的大宗原料配方，使飼料蛋白質(zhì)含量降至33%左右（Ⅰ組）；在Ⅰ組基礎(chǔ)上分別添加0.20 mL/kg和0.30 mL/kg液體復(fù)合酶（Ⅱ和Ⅲ組）；再調(diào)整配方使飼料蛋白質(zhì)含量降至32%左右 （Ⅳ組）；在Ⅳ組基礎(chǔ)上分別添加0.20 mL/kg和0.30 mL/kg液體復(fù)合酶（Ⅴ和Ⅵ組）。

各組日糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平見表1。飼料原料粉碎后以倍增法充分混合，制成2 mm粒徑的配合飼料。采用后噴涂方法將液體酶制劑添加到飼料中，晾干后于低溫干燥處保存，備用。

1.3 飼養(yǎng)管理 采用循環(huán)水養(yǎng)魚，24 h充氣增氧，每天投喂 2 次，時(shí)間分別為 9∶00 和 16∶00，投喂率為魚體重的2%～3%，隨著魚體生長(zhǎng)調(diào)整投喂量。每3 d換水一次，換水量為1/4～1/3，保持水中溶解氧大于6 mg/L，試驗(yàn)期間水溫25℃左右，pH 7.0～7.5。

1.4 生長(zhǎng)性能指標(biāo)測(cè)定 試驗(yàn)開始前以及試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，將試驗(yàn)魚饑餓24 h，每缸稱重。根據(jù)采食量計(jì)算增重率、特定生長(zhǎng)率和餌料系數(shù)。

表1 飼料配方及營(yíng)養(yǎng)水平 %

存活率/%=成活草魚尾數(shù)/投放草魚尾數(shù)；

增重率/%=（試驗(yàn)?zāi)~均重－試驗(yàn)初魚均重）/試驗(yàn)初魚均重×100；

特定生長(zhǎng)率/%=（ln試驗(yàn)?zāi)~均重－ln試驗(yàn)初魚均重）/試驗(yàn)天數(shù)×100；

飼料系數(shù)=攝取的飼料總重量 /（試驗(yàn)?zāi)~總體重+試驗(yàn)中死亡魚體重－試驗(yàn)初魚總體重）。

1.5 表觀消化率測(cè)定 以Cr2O3為指示劑，用虹吸法收集糞便，采用二苯碳酰二肼丙酮法測(cè)定Cr2O3含量（高民和馮宗慈，1993），凱氏定氮法測(cè)定粗蛋白質(zhì)含量（楊勝，1991），計(jì)算飼料干物質(zhì)、粗蛋白質(zhì)、粗脂肪的表觀消化率。

干物質(zhì)表觀消化率/%=（1－飼料Cr2O3含量/糞便 Cr2O3含量）×100；

1.6 消化酶活性的測(cè)定 每個(gè)重復(fù)隨機(jī)抽取3尾魚，于冰盤中處死，取出全部的腸道，剝除腸道外的脂肪和結(jié)締組織，用冷凍去離子水洗凈腸道中的內(nèi)容物，濾紙吸干水分，稱重。加入10倍冷凍去離子水，于4℃冰浴中勻漿，離心15 min（4℃、12000 r/min），所得上清液即為消化酶粗酶液。酶液于4℃保存，24 h內(nèi)檢測(cè)酶活。

蛋白酶活力測(cè)定采用福林-酚試劑法（朱儉，1981）。蛋白酶活力單位定義：在 30℃，pH 7.5，底物酪蛋白濃度為2%的條件下，1 min內(nèi)1 g組織中蛋白酶分解酪蛋白產(chǎn)生1 μg酪氨酸為一個(gè)活力單位（μg/min·g）。

淀粉酶活力測(cè)定采用3，5-二硝基水楊酸顯色法（陳毓荃，2002），淀粉酶活力單位定義：在30℃，pH 7.5，1%的可溶性淀粉作為底物條件下，1 min內(nèi)1 g組織中的淀粉酶能完全水解淀粉產(chǎn)生1 mg麥芽糖為一個(gè)活力單位（mg/min·g）。

1.7 數(shù)據(jù)處理 用SPSS 16.0軟件對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理和統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。若差異達(dá)到顯著，則進(jìn)行多重比較，顯著性水平設(shè)為0.05。

2 結(jié)果與分析

2.1 液體復(fù)合酶對(duì)草魚生長(zhǎng)性能的影響 從表2可以看出，CE組草魚的增重率和特定生長(zhǎng)率大于CA組，Ⅱ和Ⅲ組草魚的增重率、特定生長(zhǎng)率均大于Ⅰ組，Ⅴ和Ⅵ組草魚的增重率、特定生長(zhǎng)率也大于Ⅳ組。表明在同一蛋白質(zhì)水平的飼料中直接添加0.20～0.30 mL/kg的液體酶均可在一定程度上提高草魚的生長(zhǎng)速度。但是Ⅰ組草魚的增重率、特定生長(zhǎng)率低于CA組，Ⅳ組草魚的增重率、特定生長(zhǎng)率又低于Ⅰ組，表明降低飼料蛋白質(zhì)含量2%～3%會(huì)減緩草魚的生長(zhǎng)速度。但是，Ⅱ、Ⅲ、Ⅴ和Ⅵ組草魚的增重率、特定生長(zhǎng)率大于CA組，表明適當(dāng)降低飼料蛋白含量的同時(shí)添加0.20～0.30 mL/kg的液體酶制劑會(huì)改善草魚的生長(zhǎng)性能。此外，第Ⅵ組的飼料系數(shù)顯著小于其他各組，說明添加液體復(fù)合酶在降低草魚飼料系數(shù)方面也具有一定的效果。

2.2 液體復(fù)合酶對(duì)草魚飼料表觀消化率的影響從表3可以看出，試驗(yàn)魚對(duì)各組飼料干物質(zhì)、粗蛋白質(zhì)和粗脂肪的表觀消化率差異不顯著（P＞0.05）。說明一定限度內(nèi)降低飼料蛋白質(zhì)含量、添加液體復(fù)合酶制劑對(duì)草魚飼料消化吸收無顯著影響。

表2 液體復(fù)合酶對(duì)草魚生長(zhǎng)性能的影響

表3 液體復(fù)合酶對(duì)草魚飼料表觀消化率的影響 %

2.3 液體復(fù)合酶對(duì)草魚體組成的影響 表4顯示，CE組草魚魚體粗脂肪含量略低于CA組（P＞0.05）。此外，當(dāng)飼料蛋白質(zhì)含量為33%左右（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組）時(shí)，隨著液體酶制劑添加量的升高，草魚魚體粗蛋白質(zhì)含量呈上升趨勢(shì)，粗脂肪含量呈降低趨勢(shì)。結(jié)果表明，在飼料中使用液體酶制劑不會(huì)影響草魚的體組成。

2.4 液體復(fù)合酶對(duì)草魚內(nèi)源性消化酶活性的影響 從表5可以看出，CE組蛋白酶和淀粉酶活性高于CA組，Ⅱ和Ⅲ組蛋白酶和淀粉酶活性均大于Ⅰ組，Ⅴ和Ⅵ組蛋白酶和淀粉酶活性也大于Ⅳ組，并且在前腸達(dá)顯著水平（P<0.05）。表明在同一蛋白質(zhì)水平的飼料中直接添加0.20～0.30 mL/kg的液體復(fù)合復(fù)合酶有提高草魚腸道和肝胰臟內(nèi)源性消化酶活性的趨勢(shì)。同時(shí)，Ⅱ、Ⅲ、Ⅴ和Ⅵ組草魚的淀粉酶活性、前腸蛋白酶活性還大于CA組，Ⅴ和Ⅵ組草魚的后腸和肝胰臟蛋白酶活性大于CA組，表明適當(dāng)降低飼料蛋白質(zhì)含量的同時(shí)添加0.20～0.30 mL/kg的液體復(fù)合酶不會(huì)影響草魚腸道和肝胰臟內(nèi)源酶活性。

表4 液體復(fù)合酶對(duì)草魚體組成的影響 %

表5 液體復(fù)合酶制劑對(duì)草魚消化酶活性的影響 U/g組織

3 討論

3.1 液體復(fù)合酶制劑對(duì)草魚生長(zhǎng)性能的影響Carter等（1994）研究表明，在基礎(chǔ)日糧中添加復(fù)合酶制劑，能促進(jìn)大西洋鮭的生長(zhǎng)，提高飼料轉(zhuǎn)化率；鄧岳松（2005）和周小秋等（2001）通過試驗(yàn)也分別證實(shí)了復(fù)合酶制劑對(duì)草魚和鯉魚的促生長(zhǎng)作用。本試驗(yàn)在以豆粕、菜粕等植物性原料為蛋白源的基礎(chǔ)飼料中添加不同水平的液體復(fù)合酶制劑，草魚增重率和特定生長(zhǎng)率有所提高。適當(dāng)降低飼料蛋白質(zhì)含量，同時(shí)添加0.20～0.30 mL/kg液體酶，各組草魚增重率、特定生長(zhǎng)率依然呈現(xiàn)良好的增加態(tài)勢(shì)。這說明液體復(fù)合酶制劑能改善草魚的生長(zhǎng)性能，其原因可能是上述復(fù)合酶制劑中各種酶協(xié)同作用，促進(jìn)了生長(zhǎng)（王愛民和劉文斌，2006；鐘國(guó)防和周洪琪，2005；馮定遠(yuǎn)，2005）。

3.2 液體復(fù)合酶制劑對(duì)草魚體組成的影響 本試驗(yàn)表明，液體復(fù)合酶制劑對(duì)草魚體組成影響不顯著（P ＞ 0.05）。 Vielma等（2000）研究了植酸酶對(duì)虹蹲成魚體組成的影響，結(jié)果表明，添加外源酶沒有顯著改變魚體的粗灰分含量，對(duì)魚體組成無顯著影響，與本試驗(yàn)結(jié)論一致。

4 小結(jié)

試驗(yàn)結(jié)果表明，在飼料中直接添加或適當(dāng)降低飼料蛋白質(zhì)含量的同時(shí)添加0.20～0.30 mL/kg液體酶，均可在一定程度上改善草魚的生長(zhǎng)性能，促進(jìn)草魚的內(nèi)源性蛋白酶和淀粉酶等消化酶的分泌，而且不會(huì)影響草魚的體組成。

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