上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化及相關(guān)microRNA分子與腫瘤的惡性行為的研究進(jìn)展

洪倫 綜述 沈守榮 審校

1.長(zhǎng)沙市第八醫(yī)院消化內(nèi)科，湖南 長(zhǎng)沙，410100 2.中南大學(xué)湘雅三醫(yī)院消化內(nèi)科，湖南 長(zhǎng)沙， 410013

上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial-mesenchymal transition，EMT)在胚胎形成和傷口愈合等方面起著關(guān)鍵的作用。目前研究發(fā)現(xiàn)其與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)，癌細(xì)胞發(fā)生EMT后能獲得更強(qiáng)侵襲和轉(zhuǎn)移能力，此外還對(duì)腫瘤細(xì)胞的耐藥性產(chǎn)生影響。以RNA(microRNA，MCR)是新發(fā)現(xiàn)的一類非編碼小RNA，具有基因轉(zhuǎn)錄后調(diào)控的作用，在很多生理病理過(guò)程中均起著重要作用，包括腫瘤、發(fā)生、進(jìn)展，并與腫瘤EMT有關(guān)。

1 EMT現(xiàn)象與腫瘤

EMT，即上皮樣細(xì)胞向間質(zhì)樣細(xì)胞表型特征的轉(zhuǎn)化。此概念是上世紀(jì)70年代使用雞胚研究其形成和發(fā)育的過(guò)程中所提出的一個(gè)假設(shè)。而首次描述觀察到的EMT現(xiàn)象，則是人們發(fā)現(xiàn)人類眼的晶狀體細(xì)胞能在類凝膠膠質(zhì)中相對(duì)失去極性，轉(zhuǎn)化成間質(zhì)細(xì)胞樣形態(tài)后同時(shí)獲得移動(dòng)能力。往后數(shù)年研究中，陸續(xù)發(fā)現(xiàn)EMT在胚層轉(zhuǎn)化、原胚腸形成及神經(jīng)嵴細(xì)胞遷移等胚胎形成發(fā)育領(lǐng)域起重要作用［1］。近年研究又在傷口愈合，組織再生［2］，干細(xì)胞分化［3］及肝、腎等器官組織的纖維化病變中也陸續(xù)發(fā)現(xiàn)EMT，是一種重要的病理生理現(xiàn)象［4］。越來(lái)越多的研究發(fā)現(xiàn)EMT在多種腫瘤的侵襲及轉(zhuǎn)移等惡性發(fā)展過(guò)程中起著重要的作用［5-6］。

1.1 腫瘤EMT中的細(xì)胞表型變化

可以從上皮細(xì)胞與間質(zhì)細(xì)胞各自的特點(diǎn)觀察EMT現(xiàn)象發(fā)生后的特征變化。上皮細(xì)胞是一種有黏聚性的細(xì)胞，主要組成上皮組織，覆蓋著人機(jī)體表面和多個(gè)器官管腔內(nèi)表面。鱗癌、腺癌、移行上皮癌等上皮來(lái)源的惡性腫瘤歸屬此范疇。上皮細(xì)胞的特征是細(xì)胞與細(xì)胞之間有著相對(duì)緊密的連接，并且與其所附著基底膜之間有著很強(qiáng)的極性，即相對(duì)穩(wěn)定和不可移動(dòng)性。而間質(zhì)細(xì)胞是間質(zhì)及結(jié)締組織的主要組成成分，間質(zhì)細(xì)胞的特征在于結(jié)構(gòu)松散，細(xì)胞相對(duì)沒(méi)有極性，有著相對(duì)高的可移動(dòng)性，分散存在于細(xì)胞外基質(zhì)(extra cellular matrix，ECM)中。這兩類細(xì)胞結(jié)構(gòu)上的差異同樣反映在各自特性的基因和蛋白表達(dá)上。

EMT是上皮特征性的細(xì)胞發(fā)生一定程度的轉(zhuǎn)變，使得其具有部分間質(zhì)樣細(xì)胞特征的現(xiàn)象，結(jié)合以上描述的此兩類細(xì)胞的特征后可得出腫瘤細(xì)胞EMT現(xiàn)象的實(shí)質(zhì)：具有上皮來(lái)源特征性的腫瘤細(xì)胞，通過(guò)EMT獲得間質(zhì)細(xì)胞樣的高遷移運(yùn)動(dòng)、侵襲浸潤(rùn)能力。EMT過(guò)程中，細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化和特征性分子標(biāo)志可作為判斷其發(fā)生程度的標(biāo)準(zhǔn)。

1.1.1 形態(tài)學(xué)變化特征

第一屆關(guān)于EMT的Boden國(guó)際會(huì)議提出：在細(xì)胞形態(tài)學(xué)和侵襲運(yùn)動(dòng)方面，以4個(gè)標(biāo)準(zhǔn)來(lái)判斷細(xì)胞發(fā)生了EMT現(xiàn)象：⑴細(xì)胞極性的喪失；⑵出現(xiàn)紡錘形樣等成纖維樣的細(xì)胞形態(tài)(紡錘形樣)；⑶可出現(xiàn)板狀/絲狀偽足(fp)；⑷侵襲運(yùn)動(dòng)性增強(qiáng)。

1.1.2 分子標(biāo)志物變化特征

EMT是一個(gè)動(dòng)態(tài)的、多步驟且調(diào)節(jié)機(jī)制復(fù)雜的過(guò)程。包括細(xì)胞之間黏附的喪失，細(xì)胞與周圍腫瘤過(guò)程中所附著基底膜和ECM的破壞以及細(xì)胞骨架的重建而導(dǎo)致細(xì)胞遷移力和運(yùn)動(dòng)能力的增強(qiáng)這幾大基本特征。因而下調(diào)上皮細(xì)胞黏附相關(guān)分子、上調(diào)間質(zhì)細(xì)胞特征相關(guān)分子及表達(dá)各種ECM相關(guān)的蛋白是EMT的分子變化特征。

1.1.2.1 下調(diào)上皮細(xì)胞黏附連接相關(guān)分子

E-黏附蛋白(E-cadherin)表達(dá)降低或丟失是EMT 最重要的標(biāo)志性變化。E-黏附蛋白屬于1型鈣黏蛋白(CDH1)，結(jié)構(gòu)域橫跨細(xì)胞膜。細(xì)胞外部分使得相鄰的細(xì)胞之間緊密相互結(jié)合；細(xì)胞內(nèi)部分則與α-聯(lián)蛋白(α-catenin)、β-聯(lián)蛋白(β-catenin)以及肌動(dòng)蛋白(α-SMA)形成數(shù)種復(fù)合物，從而組成細(xì)胞之間的連接黏附，使得細(xì)胞與細(xì)胞間有著強(qiáng)大的物理性連接，是維持上皮細(xì)胞特性的重要分子， 其丟失的細(xì)胞則出現(xiàn)間質(zhì)細(xì)胞樣的極性丟失。E-黏附蛋白水平下調(diào)以后，此時(shí)與之結(jié)合的β-聯(lián)蛋白游離出來(lái)，轉(zhuǎn)位到胞核內(nèi)，與轉(zhuǎn)錄因子淋巴增強(qiáng)結(jié)合因子(lymphoid enhancer binding factor，LEF)結(jié)合形成β-黏附蛋白/LEF復(fù)合體，調(diào)控的轉(zhuǎn)錄。

1.1.2.2 上調(diào)間質(zhì)細(xì)胞來(lái)源相關(guān)分子

間質(zhì)細(xì)胞特征的功能分子，主要是一些間質(zhì)或胚胎來(lái)源的骨架蛋白，在一般上皮細(xì)胞不表達(dá)或表達(dá)非常低下。而發(fā)生EMT現(xiàn)象后，這些分子重新表達(dá)或高水平表達(dá)亦是其標(biāo)志性變化。

N-鈣黏蛋白(N-cadherin)是間質(zhì)細(xì)胞來(lái)源的骨架蛋白之一，在正常上皮細(xì)胞中基本無(wú)表達(dá)或很少有表達(dá)。其主要功能是介導(dǎo)成纖維細(xì)胞的動(dòng)態(tài)黏附，有助于這些間質(zhì)細(xì)胞的移動(dòng)。N-鈣黏蛋白在前列腺癌、乳腺癌和胃癌等多種惡性腫瘤中存在反常高表達(dá)。另外，波形蛋白也是細(xì)胞骨架蛋白之一，特異性的也分布于間質(zhì)細(xì)胞中，在上皮細(xì)胞中基本不表達(dá)。波形蛋白表達(dá)異常增多導(dǎo)致細(xì)胞骨架蛋白構(gòu)成發(fā)生變化，使得上皮源性細(xì)胞具有成纖維細(xì)胞樣特征，更易于遷移游動(dòng)。波形蛋白在腫瘤中表達(dá)上調(diào)不僅與腫瘤分級(jí)相關(guān)，還可促進(jìn)腫瘤的轉(zhuǎn)移。

1.1.2.3 ECM相關(guān)分子

在PCB設(shè)計(jì)時(shí)，需要使用接地器件實(shí)現(xiàn)“0”參考點(diǎn)。用于射頻接地的器件有3種，分別是“0”電容、微帶線和射頻電纜。射頻模塊采用“0”電容接地；通過(guò)“0”電容與“無(wú)窮大”電感相互配合，盡可能降低電路干擾[32]。

ECM主要包括膠原層黏連蛋白等，功能為促進(jìn)成纖維細(xì)胞及角膜上皮細(xì)胞的遷移，特別是層黏連蛋白可促進(jìn)多種腫瘤細(xì)胞的遷移。研究發(fā)現(xiàn)：ECM成分不僅促使腫瘤細(xì)胞發(fā)生EMT，而且發(fā)生了EMT 的細(xì)胞也能夠改變ECM的組成，便于腫瘤浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移。

1.2 腫瘤EMT相關(guān)信號(hào)通路及轉(zhuǎn)錄因子

EMT受各種因素調(diào)控，在誘導(dǎo)EMT形成的模型中，信號(hào)分子與細(xì)胞膜表面特異性的受體結(jié)合，進(jìn)而通過(guò)細(xì)胞內(nèi)各條不同的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑活化， 激活核內(nèi)的轉(zhuǎn)錄因子，從而使細(xì)胞表型發(fā)生不同程度的轉(zhuǎn)化。故細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑和轉(zhuǎn)錄因子的激活等與EMT的發(fā)生有著密切的關(guān)系。

EMT現(xiàn)象涉及多條信號(hào)通路，其中轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(transforming growth factor beta 1，TGFβ1)信號(hào)傳導(dǎo)通路是研究較成熟的EMT通路。多年的研究結(jié)果提示：血清TGFβ1水平不僅與腫瘤惡性程度呈正相關(guān)，而且也是有效的EMT誘發(fā)因素。核轉(zhuǎn)錄因子kappaB (nuclear factor kappaB，NF-κB)是 TGF通路誘導(dǎo)EMT發(fā)生的重要分子，同樣可以促進(jìn)Snail轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)，從而下調(diào)E-黏附蛋白的表達(dá)水平。

Wnt通路也是EMT中1條重要的信號(hào)通路，β-連蛋白是Wnt信號(hào)通路中的關(guān)鍵蛋白，其通過(guò)介導(dǎo)與E-黏附蛋白間的相互作用參與細(xì)胞間的黏附。β-連蛋白磷酸化破壞了E-黏附蛋白/β-連蛋白復(fù)合物的結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致細(xì)胞黏附力下降，使腫瘤細(xì)胞浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移的能力增強(qiáng)。

Ras/MAPK通路受體酪氨酸激酶是一類具有受體酪氨酸激酶活性的膜受體， 是小 GTP結(jié)合蛋白超家族成員。MAPK主要參與細(xì)胞的增殖、分泌以及神經(jīng)元分化等生物反應(yīng)的調(diào)節(jié)。絲氨酸/蘇氨酸酶Raf信號(hào)作為Ras的效應(yīng)物，其削弱TGF的生長(zhǎng)抑制和誘導(dǎo)凋亡作用，強(qiáng)化TGF的致侵襲效應(yīng)，從而誘導(dǎo)MDCK細(xì)胞發(fā)生EMT。

磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidy Iinositol-3 kinase，PI3K)/蛋白激酶B(AKT)通路中PI3K的作用是使磷脂酰肌醇發(fā)生磷酸化，產(chǎn)生第二信使進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。PI3K有2種激活方式，一種是通過(guò)Ras和p110直接結(jié)合，導(dǎo)致PI3K的活化；而另一種則是與具有磷酸化酪氨酸殘基的生長(zhǎng)因子受體或連接蛋白相互作用，引起構(gòu)象改變而被激活。AKT是PI3K信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的下游信號(hào)，活化的AKT可通過(guò)磷酸化作用激活或抑制其下游靶蛋白，進(jìn)而調(diào)節(jié)細(xì)胞的增殖、分化、凋亡以及遷移。

目前研究較多較成熟的信號(hào)通路下游有關(guān)EMT的轉(zhuǎn)錄因子主要是Snail、Slug、SIP1及Twist等。這類DNA結(jié)合蛋白可以通過(guò)同SIP1競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合E-黏附蛋白基因啟動(dòng)子部位的E-box連接序列，直接下調(diào)E-黏附蛋白及上調(diào)間質(zhì)來(lái)源的波形蛋白表達(dá)，從而引起EMT。Twist還能直接增強(qiáng)Snail的表達(dá)促使腫瘤細(xì)胞發(fā)生EMT。

2 EMT相關(guān)microRNAs與腫瘤的惡性行為

microRNA是一類新發(fā)現(xiàn)的長(zhǎng)度為19～25個(gè)核苷酸的非編碼單鏈小分子RNA，其與目標(biāo)mRNA配對(duì)，導(dǎo)致目的mRNA發(fā)生降解。

2.1 EMT相關(guān)microRNAs與腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移

侵襲和轉(zhuǎn)移是惡性腫瘤的重要特征，也是造成癌癥患者死亡的重要原因。腫瘤細(xì)胞發(fā)生EMT的直接后果包括細(xì)胞黏附能力下降、穿破基底膜進(jìn)入血液循環(huán)、逃避免疫監(jiān)視及在遠(yuǎn)處部位定植生長(zhǎng)等。

2.1.1 與腫瘤EMT負(fù)相關(guān)的microRNA分子

2007年，Hurteau等［7］發(fā)現(xiàn)microRNA-200c在乳腺細(xì)胞中的表達(dá)與E-黏附蛋白的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，由此人們逐漸將注意力轉(zhuǎn)移到miRNAs與腫瘤EMT相關(guān)標(biāo)志物的關(guān)系上。隨后，Gregory等［8］又通過(guò)生物信息學(xué)方法對(duì)EMT中重要的轉(zhuǎn)錄因子ZEB1的 3’非翻譯區(qū)(3’UTR)與現(xiàn)已知的microRNA分子綁定序列進(jìn)行預(yù)測(cè)分析，繼而進(jìn)行驗(yàn)證之后發(fā)現(xiàn)，microRNA-200家族在經(jīng)TGF-β1誘導(dǎo)的腫瘤細(xì)胞發(fā)生EMT過(guò)程中下調(diào)，并且在乳腺癌細(xì)胞系中發(fā)現(xiàn)此現(xiàn)象。最近，Chen等［9］發(fā)現(xiàn)microRNA-429能通過(guò)調(diào)控ZEB1、VCAN、EPCAM、TSPAN13及CAV2等多種EMT相關(guān)基因，使高度惡性的卵巢癌OVCAR3細(xì)胞出現(xiàn)EMT，大大降低其侵襲能力。

Wiklund等［10］研究還發(fā)現(xiàn)在肌肉轉(zhuǎn)移性膀胱癌組織及低分化膀胱癌細(xì)胞系中，microRNA-200家族及microRNA-205同時(shí)表達(dá)沉默，在其相應(yīng)的DNA轉(zhuǎn)錄區(qū)出現(xiàn)超甲基化，并且與不同膀胱癌分期呈明顯的相關(guān)性。Yu等［11］發(fā)現(xiàn)在胰腺癌中microRNA-200c以影響多種細(xì)胞上皮標(biāo)志物表達(dá)的方式來(lái)調(diào)控EMT，從而降低胰腺癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移和侵襲能力。在200例不同分期的胰腺癌患者中發(fā)現(xiàn)microRNA-200c表達(dá)與患者的預(yù)后相關(guān)。日本學(xué)者Shinozaki等［12］發(fā)現(xiàn)microRNA-200家族在3種主要EBV相關(guān)性胃癌中隨著惡性程度的增加，microRNA-200家族的表達(dá)逐漸降低。體外實(shí)驗(yàn)也證實(shí)了這個(gè)觀點(diǎn)，并且認(rèn)為EBV感染與microRNA-200的前體表達(dá)水平有關(guān)。

Let-7是microRNA分子之一，與腫瘤EMT所導(dǎo)致的侵襲轉(zhuǎn)移現(xiàn)象相關(guān)。除了研究較多的microRNA-200家族和let-7家族，新發(fā)現(xiàn)與腫瘤EMT有關(guān)的其他分子陸續(xù)被提出。Li等［13］在乳腺癌相關(guān)體內(nèi)和體外實(shí)驗(yàn)中，通過(guò)抑制microRNA-448的表達(dá)，能觀察到明顯的EMT現(xiàn)象，可能與其靶向調(diào)控SATB1 (特別富含AT序列區(qū)域綁定蛋白1)基因，進(jìn)而經(jīng)過(guò)一系列機(jī)制增加Twist以及NF-κB的表達(dá)有關(guān)。Castilla等［14］通過(guò)基因芯片陣列技術(shù)分析了不同EMT惡性程度的子宮內(nèi)膜癌組織的microRNA差異發(fā)現(xiàn)，microRNA-23b、microRNA-29c和microRNA-203同樣具備抑制腫瘤EMT的特征。

2.1.2 與腫瘤EMT正相關(guān)的microRNA分子

2008年，Kong等［15］發(fā)現(xiàn)microRNA-155的表達(dá)在TGF誘導(dǎo)的腫瘤EMT中增高，是通過(guò)SMAD4來(lái)調(diào)控轉(zhuǎn)錄活性的，并且在microRNA-155表達(dá)缺失的乳腺癌細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)無(wú)法有效誘發(fā)EMT。在乳腺上皮細(xì)胞系誘發(fā)的EMT內(nèi)部比較中發(fā)現(xiàn)microRNA-29a及microRNA-21，在間質(zhì)樣細(xì)胞系中的表達(dá)明顯高于上皮樣細(xì)胞系。同時(shí)研究還發(fā)現(xiàn)TTP(1種RNA結(jié)合蛋白)的表達(dá)在表達(dá)Ras的乳腺腺瘤細(xì)胞中被microRNA-29a抑制從而發(fā)生EMT。而microRNA-21則是通過(guò)過(guò)表達(dá)SMAD依賴的轉(zhuǎn)錄調(diào)控基質(zhì)從而使得乳腺癌MDA-MB-468細(xì)胞系發(fā)生EMT。此外microRNA-21還能被BMP-6調(diào)控抑制，從而降低癌細(xì)胞的侵襲力［16］，最近有研究報(bào)道它還能與microRNA-31共同通過(guò)抑制TIAM1的表達(dá)從而使得結(jié)腸癌細(xì)胞遷移力性顯著增強(qiáng)，從而獲得明顯的侵襲能力［17］。另外，microRNA-21激活TGFβ信號(hào)通路下游的AP1、ZEB1等轉(zhuǎn)錄因子不僅使得癌細(xì)胞發(fā)生EMT，還能通過(guò)調(diào)控細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡相關(guān)基因(例如TGFβR2、PDCD4、Cdc25A及PTEN等)來(lái)影響腫瘤細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移和抗凋亡能力［18-19］。

E-黏附蛋白下調(diào)是EMT的關(guān)鍵步驟和特征。Ma等［20］發(fā)現(xiàn)在癌細(xì)胞系SUM149中，microRNA-9能增加EMT中細(xì)胞間質(zhì)來(lái)源標(biāo)志物的表達(dá)，下調(diào)上皮標(biāo)志物E-黏附蛋白。體內(nèi)試驗(yàn)證實(shí)其通過(guò)增加腫瘤細(xì)胞-基質(zhì)間的相互作用的敏感性等微環(huán)境來(lái)使得腫瘤更具侵襲力。此外，Meng等［21］在肝癌細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)，microRNA-194在肝組織分離出的上皮樣細(xì)胞中表達(dá)較高，而在有高遷移特性的兩種間質(zhì)樣星狀細(xì)胞和Kupffer細(xì)胞中幾乎不表達(dá)。同樣在肝癌的體外實(shí)驗(yàn)中，間質(zhì)樣肝癌細(xì)胞系無(wú)法檢測(cè)到microRNA-194的表達(dá)，用實(shí)驗(yàn)方法將其過(guò)表達(dá)后，癌細(xì)胞的侵襲性明顯降低。

Vetter等［22］報(bào)道在MCF7乳腺癌細(xì)胞系中，microRNA-661能通過(guò)調(diào)控Nectin01和StarD10基因的轉(zhuǎn)錄，直接影響癌細(xì)胞在SNAI1誘導(dǎo)的EMT中體現(xiàn)的惡性程度。

2.2 EMT相關(guān)microRNA與腫瘤耐藥

惡性腫瘤發(fā)生EMT之前主要被認(rèn)為與更強(qiáng)的遷移和侵襲能力有關(guān)。隨著研究不斷深入，人們發(fā)現(xiàn)在腫瘤發(fā)生EMT的過(guò)程中，細(xì)胞表型的變化及有關(guān)信號(hào)通路及轉(zhuǎn)錄因子的改變與腫瘤對(duì)化療藥物的治療反應(yīng)間存在聯(lián)系，使得EMT在惡性腫瘤的治療評(píng)估中開(kāi)始有著越來(lái)越突出的地位。而其中microRNA作為有著轉(zhuǎn)錄后調(diào)控功能的重要小分子，在這一領(lǐng)域發(fā)揮著重要作用。

隨著放療或化療的進(jìn)行，或在缺氧等應(yīng)激情況下，多種腫瘤細(xì)胞能通過(guò)逐漸發(fā)生EMT來(lái)逃避治療所導(dǎo)致的凋亡，進(jìn)而使得細(xì)胞具有更強(qiáng)的轉(zhuǎn)移特性。在對(duì)紫杉醇耐藥的多種人類腫瘤細(xì)胞中，比如鼻咽癌、膀胱癌、卵巢癌和前列腺癌等，EMT中關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子TWIST的上調(diào)是一個(gè)共同現(xiàn)象［23］，并且在對(duì)吉西他濱和紫杉醇同時(shí)耐藥的胰腺癌細(xì)胞中，在上調(diào)TWIST的基礎(chǔ)上可同時(shí)發(fā)現(xiàn)有Snail的表達(dá)增強(qiáng)。Yang等［24］在一項(xiàng)使用奧沙利柏長(zhǎng)期慢性刺激結(jié)腸癌細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)中證實(shí)其出現(xiàn)了耐藥性增強(qiáng)，且有逃避轉(zhuǎn)移現(xiàn)象，EMT現(xiàn)象在分子水平和形態(tài)學(xué)上都有極為明顯的改變，為耐藥性結(jié)腸癌細(xì)胞與EMT之間的關(guān)系提供了證據(jù)。

Shrader等［25］曾在建立的20多種不同表型及惡性程度的尿道癌細(xì)胞系中進(jìn)行了藥物敏感性實(shí)驗(yàn)，即對(duì)抗腫瘤化療藥物吉非替尼所導(dǎo)致的生長(zhǎng)抑制程度的比較，發(fā)現(xiàn)在近一半對(duì)藥敏感的癌細(xì)胞系中表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)水平相對(duì)較低，其重要的EMT標(biāo)志物E-黏附蛋白表達(dá)明顯比耐藥組高。又有研究發(fā)現(xiàn)在膀胱癌細(xì)胞系中對(duì)利妥昔單抗治療敏感的細(xì)胞系多高表達(dá)E-黏附蛋白。通過(guò)RNA干擾技術(shù)使E-黏附蛋白表達(dá)降低從而獲得更強(qiáng)的腫瘤EMT表型后，觀察到腫瘤細(xì)胞對(duì)利妥昔單抗表現(xiàn)出更明顯的耐藥現(xiàn)象［26］。

Adam等［27］發(fā)現(xiàn)在膀胱癌中，microRNA-200c調(diào)控ERRFI-1的表達(dá)，后者是EGFR通路上的抑制因子。由于EGFR在多數(shù)上皮腫瘤中表達(dá)較高，EGFR的抑制很久以來(lái)被當(dāng)作腫瘤治療藥物的一個(gè)靶點(diǎn)，microRNA-200c由此降低EGFR通路下游轉(zhuǎn)錄因子ZEB1、ZEB2的表達(dá)，導(dǎo)致E-黏附蛋白表達(dá)增加從而降低癌細(xì)胞發(fā)生EMT的程度。由此觀察到microRNA-200c增強(qiáng)了膀胱癌細(xì)胞對(duì)基于EGFR抑制原理的普通化療藥物的敏感性。Nam等［28］發(fā)現(xiàn)microRNA-200c的下調(diào)提示卵巢癌患者化療敏感性極低，預(yù)后更差，術(shù)后生存期也相應(yīng)縮短。在對(duì)西妥昔單抗和順鉑耐藥的非小細(xì)胞肺癌的研究中，Ceppi等［29］發(fā)現(xiàn)，該類肺癌細(xì)胞間質(zhì)來(lái)源標(biāo)志蛋白表達(dá)非常高， EMT現(xiàn)象特征十分明顯，還發(fā)現(xiàn)其啟動(dòng)子區(qū)的超甲基化是導(dǎo)致microRNA-200c表達(dá)低下的原因；并通過(guò)將microRNA-200c過(guò)表達(dá)能部分恢復(fù)細(xì)胞對(duì)順鉑治療的敏感性并降低其侵襲能力。最近Tryndyak等［30］發(fā)現(xiàn)在耐多柔比星治療的乳腺癌細(xì)胞中，其表達(dá)的microRNA-200家族除抑制ZEB1轉(zhuǎn)錄因子外，還可能通過(guò)抑制SIRT1表達(dá)間接地使E-黏附蛋白啟動(dòng)子的組蛋白乙酰化，從而使癌細(xì)胞的EMT表型變化，改變其耐藥和侵襲轉(zhuǎn)移能力。

Li等［31］將數(shù)種不同的胰腺癌細(xì)胞歸類成吉西他濱耐藥及敏感兩類，在其之間進(jìn)行microRNA陣列芯片分析及后續(xù)驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)后發(fā)現(xiàn)，microRNA-200家族和let-7家族使得胰腺癌細(xì)胞EMT與耐藥有著密切的關(guān)系。同樣通過(guò)基因芯片技術(shù)還發(fā)現(xiàn)，microRNA-214、microRNA-130a、microRNA-27a和microRNA-451也與卵巢癌的耐化療藥物有關(guān)［32］。通過(guò)對(duì)環(huán)磷酰胺、表柔比星、氟尿嘧啶聯(lián)合或單用化療耐藥并且用藥后出現(xiàn)新轉(zhuǎn)移灶的一批乳腺癌患者的研究發(fā)現(xiàn)，其體內(nèi)腫瘤細(xì)胞較對(duì)照組細(xì)胞呈更典型的EMT表型狀態(tài)，且其microRNA-448表達(dá)明顯下調(diào)。研究認(rèn)為microRNA-448是通過(guò)作用于其靶基因SATB1，增加雙調(diào)蛋白表達(dá)水平，進(jìn)而增加了EGFR受體調(diào)控的EMT關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子——Twist的表達(dá)，并且激活NF-κB通路來(lái)實(shí)現(xiàn)該類腫瘤細(xì)胞的高耐藥性和強(qiáng)侵襲性。在研究治療腫瘤藥物方面，最近Oliveras-Ferraros等［33］發(fā)現(xiàn)曾經(jīng)作為糖尿病治療藥物的二甲雙胍在對(duì)乳腺癌細(xì)胞MCF-7進(jìn)行誘導(dǎo)處理后，能對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生抑制EMT的作用，降低其侵襲轉(zhuǎn)移能力。同時(shí)還發(fā)現(xiàn)EMT相關(guān)microRNA分子Let-7a及microRNA-96明顯上調(diào)。對(duì)處理前后的細(xì)胞樣本進(jìn)行miRNA芯片篩選后發(fā)現(xiàn)，microRNA-181a與TGFβ信號(hào)通路及乳腺癌細(xì)胞對(duì)藥物敏感性有關(guān)，從而引起EMT相關(guān)的腫瘤細(xì)胞自我更新。

3 結(jié)語(yǔ)

越來(lái)越多的研究報(bào)道已經(jīng)提示，EMT與腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移和耐藥有關(guān)。此外，隨著實(shí)驗(yàn)技術(shù)的進(jìn)步，特別是對(duì)microRNA機(jī)制研究的不斷加深，如今對(duì)腫瘤EMT在各領(lǐng)域的認(rèn)識(shí)，將與不斷涌現(xiàn)的新研究概念結(jié)合起來(lái)，從而在診斷和治療上取得突破。隨著Krutzfeldt等［34］發(fā)現(xiàn)能在機(jī)體內(nèi)沉默特異性microRNA的方法，為未來(lái)基于腫瘤EMT相關(guān)的microRNA的治療提供了新希望。目前，提供更明確的臨床證據(jù)以及闡明與各種復(fù)雜通路途徑的交互作用機(jī)制，是了解腫瘤與EMT關(guān)系的難點(diǎn)和重點(diǎn)，仍需要大量研究和深入探討。

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