濁度法測(cè)定氯霉素注射液的效價(jià)

陸 娟 錢 梅

（湖北省襄陽(yáng)市食品藥品檢驗(yàn)所，湖北 襄陽(yáng) 441021）

氯霉素是由委內(nèi)瑞拉鏈絲菌產(chǎn)生的抗生素，屬?gòu)V譜抑菌劑。在執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)[1]中，試驗(yàn)人員常采用管碟法測(cè)定其效價(jià)，管碟法的特點(diǎn)是結(jié)果比較穩(wěn)定，適用于各種抗生素效價(jià)的測(cè)定，但操作繁瑣、影響因素多、耗時(shí)長(zhǎng)；采用濁度法可克服上述不足。筆者參考其它文獻(xiàn)[2]，對(duì)濁度法測(cè)定氯霉素注射液效價(jià)的方法與管碟法進(jìn)行了比較，結(jié)果基本一致，表明濁度法用于本品的效價(jià)測(cè)定快速準(zhǔn)確，切實(shí)可行。

1 儀器與試藥

WBS - 100微生物比濁法測(cè)定儀（北京先驅(qū)威鋒技術(shù)開發(fā)公司） ;ZY - 300Ⅳ多功能微生物自動(dòng)測(cè)量分析儀（北京先驅(qū)威鋒技術(shù)開司）；MettlerAL-204電子天平；金黃色葡萄球菌 [CMCC（B） 26003]、大腸埃希菌[CMCC（B）44103]；藤黃微球菌[CMCC（B）28001]和氯霉素標(biāo)準(zhǔn)品（批號(hào)：0303-9613，每毫克相當(dāng)于994單位）均由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供。營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基（批號(hào): 101105，北京三藥）與抗生素檢定培養(yǎng)基Ⅲ（批號(hào): 1008232，北京三藥）。0.9%滅菌氯化鈉溶液和磷酸鹽緩沖溶液（pH7.0）均按文獻(xiàn)[3,4]的方法配制。氯霉素注射液（規(guī)格: 2mL：0.25g ；批號(hào)：101101，濮陽(yáng)市匯元藥業(yè)有限公司；批號(hào)：100911，安徽城市藥業(yè)有限責(zé)任公司；批號(hào)：11042812，上?，F(xiàn)代哈森（商丘）藥業(yè)有限公司）。

2 方法與結(jié)果

2.1 標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備

精密稱取氯霉素標(biāo)準(zhǔn)品適量，少量乙醇溶解后，用滅菌水制成1000U/mL的溶液，備用。

2.2 供試品溶液的制備

精密量取氯霉素注射液5mL，用滅菌水制成1000U/mL的溶液，備用。

2.3 培養(yǎng)基的制備

取金黃色葡萄球菌，接種于營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面上，置35℃培養(yǎng)約20h，用0.9%滅菌氯化鈉溶液將菌苔洗下并稀釋，使其在580nm波長(zhǎng)處的吸光度約為1.0。取菌液 0.6mL，加至100mL抗生素培養(yǎng)基中，搖勻，為含菌培養(yǎng)基。

2.4 方法學(xué)考察

2.4.1 線性試驗(yàn)

精密量取標(biāo)準(zhǔn)品溶液適量，用磷酸鹽緩沖液（ pH7.0）按劑距比1∶1.25進(jìn)一步稀釋成5.0、6.2、7.8、9.8、12.2、15.3U/mL的溶液，分別量取1.0mL置石英杯中，再加入含菌培養(yǎng)基9.0mL，石英杯按拉丁方陣排列，置微生物比濁法測(cè)定儀內(nèi)，于37℃培養(yǎng)4h。另取兩支石英杯，一支加入1.0mL緩沖液和9.0mL含菌培養(yǎng)基，作為陽(yáng)性對(duì)照；另一支加入1.0mL緩沖液和9.0mL空白培養(yǎng)基，作為空白對(duì)照。儀器在線于530nm處測(cè)定不同培養(yǎng)時(shí)間下的吸光度（A）。培養(yǎng)4h時(shí)，以A對(duì)濃度（C）的對(duì)數(shù)進(jìn)行回歸計(jì)算，線性方程：A= -0.1979lgC +0.4448，r=0.9980，表明濃度在5.0～15.3U/mL范圍內(nèi)，A與IgC呈良好的線性關(guān)系，故選定濃度8.0、12.0U/mL為試驗(yàn)濃度。

2.4.2 回收率試驗(yàn)

以等比例量取氯霉素標(biāo)準(zhǔn)品和氯霉素注射液適量，用滅菌水配置成80%、100%、120% 濃度的溶液，每個(gè)濃度各用3批樣品平行制備3份溶液，測(cè)定效價(jià)平均加樣回收率為99.2%，RSD=1.8%，表明該方法回收率良好。

2.4.3 精密度試驗(yàn)

取供試品（批號(hào): 101101）6份，按樣品效價(jià)測(cè)定項(xiàng)下的方法測(cè)定，可信限率為1.8%～2.2%，效價(jià)平均測(cè)定值為96.3%，RSD=1.5%，結(jié)果表明，該方法精密度良好。

2.4.4 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取已知含量（批號(hào): 101101）（ 96.3% ）的供試品溶液，室溫放置24h 后測(cè)定。結(jié)果：效價(jià)為95.6%，可信限率為2.1%，結(jié)果顯示，供試品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.5 樣品效價(jià)測(cè)定

取氯霉素注射液3批，分別用濁度法和管碟法測(cè)定效價(jià)，比濁法測(cè)得結(jié)果分別為96.7%，95.5% ，96.4%；管碟法測(cè)得結(jié)果分別為96.3%，95.9%，96.0%。經(jīng)顯著性檢驗(yàn)，3組數(shù)據(jù)無(wú)顯著性差異（P＞0.05） 。

3 討 論

3.1 金黃色葡萄球菌對(duì)不同濃度的氯霉素，培養(yǎng)后菌液吸光度值差值較合適，吸收度在0.3～0.7之間，符合濁度法測(cè)定要求，故選擇金黃色葡萄球菌為試驗(yàn)菌。

3.2 往石英杯中加入溶液時(shí)，應(yīng)在某一記號(hào)處沿管壁加入，分裝培養(yǎng)基時(shí)，在該標(biāo)記稍上方沿管壁流入，保證試驗(yàn)平行操作。

3.3 采用管碟法測(cè)定本品時(shí)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果容易出現(xiàn)抑菌圈邊緣模糊、雙圈等現(xiàn)象，從而影響測(cè)定，使結(jié)果準(zhǔn)確度下降；濁度法具有操作方便、快速，結(jié)果準(zhǔn)確、精密度好等優(yōu)點(diǎn)，值得推廣應(yīng)用。

[1] 中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn).抗生素藥品(第一冊(cè))[S].1989:60.

[2] 張文婷,劉緒平,王慶全.濁度法測(cè)定硫酸小諾霉素片的效價(jià)[J].藥物分析雜志,2010,30 (2): 346-348.

[3] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(二部)[S].北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2010:附錄Ⅺ A 93-98.

[4] 中國(guó)藥品生物制品檢定所,中國(guó)藥品檢驗(yàn)總所.中國(guó)藥品檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)范[S].北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2010:295-299.