防治大豆疫霉根腐病的藥劑篩選*

崔人方，黃 靜，文景芝

（東北農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)院植物保護(hù)系，哈爾濱 150030）

由大豆疫霉菌（Phytophthora sojaeKaufmann＆Gerdemann）侵染引起的大豆疫霉根腐?。≒hytophthoraroot and stem rot）是最具毀滅性的大豆病害之一。該病可發(fā)生在大豆的整個(gè)生育期，病原菌侵染大豆的根、莖、葉和部分豆莢，引起根腐、莖腐、植株矮化、枯萎和死亡。在環(huán)境條件有利于病害發(fā)生的條件下可導(dǎo)致大豆絕產(chǎn)[9]。1948年在美國(guó)東北部的印第安納州首次發(fā)現(xiàn)該病，目前已傳播到世界各大豆產(chǎn)區(qū)[1]。

大豆對(duì)疫霉菌的抗性由顯性單基因控制，防治該病的主要方法就是選用抗病品種，但由于該病菌的遺傳差異極大，在美國(guó)和加拿大已有多個(gè)抗病基因被不斷產(chǎn)生的新生理小種克服[3]。一些研究表明，甲霜靈對(duì)大豆疫霉根腐病具有一定的防治效果，尤其是耐病品種輔以甲霜靈處理防病效果明顯[1]。中國(guó)雖然已經(jīng)培育出一些抗大豆疫霉菌1號(hào)生理小種的品種[4]，但由于各地大豆疫霉菌生理小種結(jié)構(gòu)不明確，而且該病菌變異率高，因此這些品種的實(shí)用性還有待研究。在目前情況下，篩選并應(yīng)用殺菌劑仍是中國(guó)防治大豆疫霉根腐病的有效方法之一。盡管已有研究人員進(jìn)行過大豆疫霉根腐病藥劑篩選試驗(yàn)，但主要是針對(duì)殺菌劑對(duì)菌絲生長(zhǎng)和無性繁殖的影響，未涉及殺菌劑對(duì)越冬結(jié)構(gòu)——卵孢子形成的影響。本試驗(yàn)的目的是對(duì)大豆疫霉菌進(jìn)行藥劑篩選，為大豆疫霉根腐病的化學(xué)防治提供依據(jù)，也為防止甲霜靈抗藥性的產(chǎn)生篩選替代藥劑。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 供試菌株 從吉林省的大豆田土壤中分離純化的大豆疫霉菌J-24。

1.1.2 供試藥劑 97%甲霜靈可濕性粉劑：溫州鹿城農(nóng)藥廠；50%烯酰嗎啉可濕性粉劑：河北威遠(yuǎn)生物有限公司；58%甲霜靈錳鋅可濕性粉劑：深圳市瑞德豐農(nóng)藥有限公司；72%霜脲錳鋅可濕性粉劑：山東曹達(dá)化工有限公司；70%代森錳鋅可濕性粉劑：西安克勝新依達(dá)農(nóng)藥有限公司；64%惡霜錳鋅可濕性粉劑：香港泰達(dá)農(nóng)化發(fā)展公司；72%霜霉威水劑：天津漢邦；70%乙磷鋁錳鋅可濕性粉劑：山東榮邦。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 供試藥劑對(duì)大豆疫霉菌菌絲生長(zhǎng)的影響 供試菌株在普通胡蘿卜瓊脂（CA）[7]平板上25℃黑暗下培養(yǎng)6d，用打孔器從菌落邊緣打取直徑為8mm的菌碟，移至含不同濃度藥劑的CA平板中央，濃度以藥劑活性成分的有效含量計(jì)算，所有藥劑均設(shè)5個(gè)試驗(yàn)濃度，其中50%烯酰嗎啉、97%甲霜靈和58%甲霜靈錳鋅設(shè)0.1μg/mL、0.5μg/mL、1.0μg/mL、5.0μg/mL和10.0μg/mL；72%霜脲錳鋅、70%代森錳鋅和64%惡霜錳鋅設(shè)5.0μg/mL、10.0μg/mL、15.0μg/mL、20.0μg/mL和25.0μg/mL；72%霜霉威和70%乙磷鋁錳鋅設(shè)1.0μg/mL、5.0μg/mL、10.0μg/mL、50.0μg/mL和100.0μg/mL。每皿接種1個(gè)菌碟，以不含藥劑的CA平板為對(duì)照，每處理重復(fù)3次。25℃黑暗條件下培養(yǎng)，6d后測(cè)量菌落直徑。作出不同藥劑的毒力回歸方程，求出EC50值。

1.2.2 供試藥劑對(duì)大豆疫霉菌孢子囊形成和萌發(fā)的影響 自培養(yǎng)6d的菌落邊緣內(nèi)側(cè)打取1塊直徑8mm的菌碟轉(zhuǎn)入滅菌空培養(yǎng)皿內(nèi)，加滅菌水至剛好沒過菌塊表面，每30min換水一次，換4次水后加入10mL不同濃度（濃度設(shè)置同1.2.1）的藥劑，以不含藥劑的滅菌水為對(duì)照，然后置25℃黑暗條件下靜止培養(yǎng)10～12h，可見大量孢子囊形成。在顯微鏡下檢測(cè)孢子囊的數(shù)量，每個(gè)菌碟隨機(jī)觀察5個(gè)視野，各處理均重復(fù)3次，計(jì)算孢子囊形成抑制率。將以上處理置4℃冰箱中10～15min后取出，每個(gè)菌碟在10×10倍鏡下隨機(jī)檢查4個(gè)視野的孢子囊總數(shù)及空殼數(shù)，計(jì)算孢子囊萌發(fā)抑制率。

1.2.3 供試藥劑對(duì)大豆疫霉菌卵孢子形成的影響 參照1.2.1的方法，在含不同濃度藥劑的CA平板上接種大豆疫霉菌，25℃黑暗條件下培養(yǎng)，30d后鏡檢，每個(gè)培養(yǎng)皿隨機(jī)觀察計(jì)測(cè)5個(gè)視野的卵孢子數(shù)量，以不含藥劑的CA平板為對(duì)照，各處理均重復(fù)3次，計(jì)算卵孢子形成抑制率。

1.2.4 供試藥劑對(duì)大豆疫霉根腐病的接種防治效果 將感病大豆品種合豐25播種于溫室的花盆中，待幼苗子葉完全展開后，每盆保留長(zhǎng)勢(shì)一致的5株大豆苗備用。試驗(yàn)設(shè)8個(gè)藥劑處理，以接菌但不施藥為對(duì)照，另設(shè)不施藥也不接菌為空白對(duì)照，每處理重復(fù)3次，每重復(fù)10株苗。試驗(yàn)采用郝中娜等[6]的接種方法接種大豆疫霉菌，8個(gè)處理隨機(jī)分布。接種保濕48h后在各個(gè)處理的大豆苗上噴施相應(yīng)的藥劑（藥劑濃度見表3），然后轉(zhuǎn)入正常管理，參照蘭成忠等[8]的病害分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)在施藥后3d、5d和7d調(diào)查發(fā)病情況，計(jì)算病情指數(shù)及防治效果。

2 結(jié)果與分析

2.1 供試藥劑對(duì)大豆疫霉菌菌絲生長(zhǎng)的影響

供試的8種殺菌劑對(duì)大豆疫霉菌的菌絲生長(zhǎng)均有抑制作用。其中50%烯酰嗎啉、97%甲霜靈和58%甲霜靈錳鋅能明顯抑制菌絲生長(zhǎng)。50%烯酰嗎啉的EC50值為0.1208μg/mL，效果最好，其次為97%甲霜靈和58%甲霜靈錳鋅，EC50值分別為0.1563μg/mL和0.3603μg/mL（見表1）。72%霜霉威在離體條件下抑菌作用很弱，在100.0μg/mL時(shí)對(duì)大豆疫霉菌的抑制率為43.2%，70%乙磷鋁錳鋅在100.0μg/mL時(shí)對(duì)大豆疫霉菌的抑制率為36.5%。

表1 8種殺菌劑對(duì)大豆疫霉菌菌絲生長(zhǎng)的影響

2.2 供試藥劑對(duì)大豆疫霉菌孢子囊形成的影響

8種殺菌劑對(duì)大豆疫霉菌孢子囊的形成均有不同程度的抑制作用（見表2），抑制效果最好的為50%烯酰嗎啉，其次為97%甲霜靈和58%甲霜靈錳鋅，在濃度為10.0μg/mL時(shí)，對(duì)孢子囊形成的抑制率均為100%。其他5種藥劑在濃度為10.0μg/mL時(shí)，抑制率均低于30%。

2.3 供試藥劑對(duì)大豆疫霉菌孢子囊萌發(fā)的影響

8種殺菌劑對(duì)孢子囊萌發(fā)均有不同程度的抑制作用（見表2），抑制效果最好的為50%烯酰嗎啉，其次為97%甲霜靈和58%甲霜靈錳鋅，在濃度為10.0μg/mL時(shí)，對(duì)孢子囊萌發(fā)抑制率均為100%。其余5種藥劑在濃度為10.0μg/mL時(shí)，對(duì)孢子囊萌發(fā)抑制率均低于40%。

2.4 供試藥劑對(duì)大豆疫霉菌卵孢子形成的影響

8種殺菌劑對(duì)大豆疫霉菌卵孢子形成的抑制率由高到低依次為50%烯酰嗎啉、97%甲霜靈、58%甲霜靈錳鋅、72%霜脲錳鋅、70%代森錳鋅、64%惡霜錳鋅、72%霜霉威和70%乙磷鋁錳鋅。在藥劑濃度為10.0μg/mL時(shí)，50%烯酰嗎啉、97%甲霜靈和58%甲霜靈錳鋅對(duì)卵孢子形成的抑制率分別為64.5%、59.5%和55.0%（見表2），差異達(dá)極顯著水平，而其余5種藥劑對(duì)卵孢子形成的抑制率均低于30%。

2.5 供試藥劑對(duì)大豆疫霉根腐病的接種防治效果

盆栽試驗(yàn)結(jié)果顯示，8種殺菌劑對(duì)大豆疫霉根腐病均有一定的防治效果（見表3）。室內(nèi)抑菌效果較好的50%烯酰嗎啉接種防治效果仍然最好，但對(duì)大豆疫霉菌菌絲生長(zhǎng)抑制效果較好的70%代森錳鋅，接種防治效果卻最差。50%烯酰嗎啉、97%甲霜靈和58%甲霜靈錳鋅對(duì)大豆疫霉根腐病的接種防治效果優(yōu)于其他藥劑。經(jīng)方差分析，8種殺菌劑接種防治效果差異顯著。

3 結(jié)論與討論

從供試的8種殺菌劑中篩選出3種防治效果較好的殺菌劑，對(duì)大豆疫霉菌的抑制作用由高到低依次為50%烯酰嗎啉（EC50為0.1208μg/mL）、97%甲霜靈（EC50為0.1563μg/mL）和58%甲霜靈錳鋅（EC50為0.3603μg/mL），在濃度為10.0μg/mL時(shí)，對(duì)孢子囊形成和萌發(fā)的抑制率均為100%，對(duì)卵孢子形成的抑制率分別為64.5%、59.5%和55.0%?？梢钥闯鲆陨?種殺菌劑可以抑制大豆疫霉菌的菌絲生長(zhǎng)、無性繁殖和有性生殖，作用比較全面，接種防治效果均達(dá)到60%以上，可作為防治大豆疫霉根腐病的有效藥劑在生產(chǎn)中使用。

表2 8種殺菌劑對(duì)大豆疫霉菌孢子囊形成、萌發(fā)和卵孢子形成的影響

表3 8種殺菌劑對(duì)大豆疫霉根腐病的接種防治效果

朱振東等（1999）[3]在離體條件下測(cè)定了8種內(nèi)吸性殺菌劑對(duì)大豆疫霉菌菌絲的影響，同時(shí)利用下胚軸傷口接種法測(cè)定了殺菌劑在活體條件下對(duì)大豆疫霉根腐病的防治效果，其中有5種殺菌劑與本文使用的殺菌劑相同，結(jié)果表明25%甲霜靈可濕性粉劑和58%甲霜靈錳鋅可濕性粉劑的效果較好，與本文結(jié)果一致；杜淑梅和李繼文（2001）[5]采用室內(nèi)試驗(yàn)（抑菌圈法、菌絲生長(zhǎng)速度法和藥劑對(duì)孢子囊產(chǎn)生及萌發(fā)的影響）、田間小區(qū)試驗(yàn)（種子處理、葉面噴霧）以及大面積示范對(duì)比試驗(yàn)對(duì)13種藥劑對(duì)大豆疫霉根腐病的防效進(jìn)行了比較，結(jié)果表明58%甲霜靈錳鋅可濕性粉劑的防效最好；蘭成忠等（2007）[8]應(yīng)用室內(nèi)生測(cè)和盆栽接種防治方法評(píng)價(jià)了12種殺菌劑的藥效（其中6種殺菌劑與本文的相同），認(rèn)為50%烯酰嗎啉可濕性粉劑、25%甲霜靈可濕性粉劑和58%甲霜靈錳鋅可濕性粉劑的防效較好。不同研究者的試驗(yàn)結(jié)果均表明，58%甲霜靈錳鋅可濕性粉劑的防效比較好，說明其藥效穩(wěn)定，且沒有產(chǎn)生抗藥性。本文全面評(píng)價(jià)了8種代表性殺菌劑的室內(nèi)抑菌效果，尤其是首次報(bào)道了殺菌劑對(duì)病菌的越冬結(jié)構(gòu)——卵孢子形成的影響，同時(shí)還首次評(píng)價(jià)了乙磷鋁錳鋅對(duì)大豆疫霉菌的殺菌效果。

大豆疫霉根腐病為土傳病害，主要危害根部和莖基部。成株期由于葉片的遮蓋使得藥劑很難直接噴到病部，造成用藥困難，因此應(yīng)選擇一些有傳導(dǎo)作用的內(nèi)吸性殺菌劑，使藥劑可以快速到達(dá)病部，達(dá)到防病治病的效果。本文中防效較好的甲霜靈、甲霜靈錳鋅和烯酰嗎啉都有內(nèi)吸性，可以較快的達(dá)到病部。但甲霜靈具有高抗藥性風(fēng)險(xiǎn)，許多疫霉菌已產(chǎn)生對(duì)甲霜靈的抗藥性[2]。自然條件下大豆疫霉菌便存在對(duì)甲霜靈具有高耐藥性的菌株，應(yīng)用甲霜靈防病可能會(huì)選擇到自然耐藥性菌株，導(dǎo)致抗藥性群體產(chǎn)生[3]。因此，對(duì)于那些大豆疫霉根腐病發(fā)生情況和病菌生理小種尚不明確的地點(diǎn)，可以選擇烯酰嗎啉和甲霜靈錳鋅進(jìn)行病害防治。

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