快速石蠟切片法在免疫組化染色中的應(yīng)用

張 偉 周永梅 陳明城 王 蔚

(廣州軍區(qū)廣州總醫(yī)院病理科,廣東510010)

免疫組化染色在病理診斷中發(fā)揮著重要的作用,較多的應(yīng)用于腫瘤的診斷和鑒別診斷,而制作出良好的組織切片是免疫組化染色的基礎(chǔ)和前提?？焖偈炛破遣±頇z驗的常規(guī)技術(shù)之一,我們將常規(guī)快速石蠟切片應(yīng)用于免疫組化染色,獲得了較好的結(jié)果,現(xiàn)介紹方法如下。

材料和方法

1.組 織來源

收集我院送檢組織標本進行快速石蠟切片處理,涉及的組織部位有肺、胃、腸、乳腺、子宮等組織。

2.儀 器設(shè)備

Leica Pelori快速組織脫水機一臺

3.抗 體性質(zhì)及來源

Ki67、CK、CEA、ER、PR、AE1、AE3 等單克隆抗體,為北京中杉金橋生物有限公司產(chǎn)品,二抗為DA KO公司通用型Envision。

4.方 法

新鮮組織取材后,10%福爾馬林固定15min,55℃;70%乙醇 8min,55℃;80%乙醇 8min,55℃;95%乙醇Ⅰ15min,65℃;95%乙醇Ⅱ15min,65℃;95%乙醇Ⅲ15min,65℃;無水乙醇Ⅰ15min,60℃;無水乙醇 Ⅱ15min,60℃;二甲苯 Ⅰ15min,65℃;二甲苯 Ⅱ15min,65℃;石蠟 Ⅰ15min,70℃;石蠟 Ⅱ15min,70℃;石蠟Ⅲ15min,70℃。取出組織進行石蠟包埋,連續(xù)切片,厚度3-4μm。65℃過夜烤片,將切片脫蠟至水,免疫組化操作步驟:4.1 3%的雙氧水氧化10min,蒸餾水洗;4.2高溫高壓抗原修復(fù)(PH6.0枸櫞酸緩沖液),噴氣后計時2min,自然冷卻20min;4.3 PBS(p H7.2)沖洗,1min×3,除去PBS液,滴加一抗,室溫孵育35min;4.4二抗按試劑盒操作說明書進行,DAB顯色,蘇木素復(fù)染,脫水透明,中性樹膠封片,顯微鏡下觀察結(jié)果。

結(jié) 果

快速石蠟切片進行免疫組化染色后,光鏡下組織結(jié)構(gòu)完整、清晰,細胞質(zhì)與細胞核陽性對比鮮艷,陽性著色定位準確,背景干凈,無非特異性著色(圖1、2)。在免疫組化染色過程中,乳腺癌組織無掉片現(xiàn)象,陽性與陰性對比鮮明(圖3、4)。

討 論

及時、恰當、完好的固定是制作好的組織切片的基礎(chǔ),也是免疫組化染色的最基本前提。組織處理時間過長或溫度過高容易造成抗原流失,我們使用的Leica Pelori快速脫水機設(shè)定的快速石蠟程序,避免了組織(尤其是小組織)處理時間過長、溫度過高對抗原的影響因素,也縮短甲醛對蛋白的交聯(lián)。而且對微小病灶組織及術(shù)中活檢組織進行免疫組化鑒別診斷提供了寶貴的組織來源。其原理是利用磁力攪拌器的先進技術(shù),在合適的溫度和壓力條件下,加速溶液分子運動,促進脫水溶液與組織內(nèi)水分交換及透明時對組織的滲透力,加強組織的處理效果,使組織達到加速固定、脫水、透明浸蠟作用[1],從而將組織制片時間極大地縮短,整個程序只需要3個半小時完成。

免疫組織化學(xué)是用免疫學(xué)的方法,也就是用標記抗體尋找組織細胞中抗原的方法,來檢測組織細胞中化學(xué)成分的科學(xué)技術(shù)[2]。免疫組織化學(xué)技術(shù)具有敏感性高、特異性強等優(yōu)點,已經(jīng)成為病理診斷中不可缺少的輔助工具。我們將快速石蠟切片進行免疫組化染色時,熱修復(fù)對細胞核抗原的修復(fù)更加明顯,高溫高壓抗原修復(fù)噴氣計時2-2.5min效果較好?？乖迯?fù)必須達到規(guī)定溫度,溫度過高容易破壞組織結(jié)構(gòu)和脫片,過弱抗原達不到充分暴露,出現(xiàn)假陰性[3]。將免疫組化應(yīng)用于快速石蠟切片中,大大縮短了制片時間,提高了工作效率,提供了準確的病理診斷依據(jù),對臨床手術(shù)的快速診斷其意義很大。在操作中應(yīng)注意:(1)取材時組織塊最好為1cm×1cm×0.2cm,不要過厚,過厚組織得不到充分及時的固定,從而影響染色結(jié)果和診斷;(2)脫水透明要充分掌握好時間,浸蠟時間、溫度不能過高,過高容易脫片,且對組織中的抗原性破壞最大;(3)嚴格按照免疫組化染色步驟要求操作,PBS緩沖液充分沖洗,對組織抗原進行相應(yīng)的修復(fù),有利于減少背景著色和非特異性著色,提高染色的敏感性。

[1]泮黎明.介紹小組織活檢標本快速石蠟切片方法.診斷病理學(xué)雜志,1998,(5):109

[2]吳秉銓,劉彥仿.免疫組織化學(xué)病理診斷.北京科學(xué)技術(shù)出版社,2007,10(1):3

[3]任家勝,李玉紅.免疫組化染色操作的幾種體會.哈爾濱醫(yī)藥,2004,24(3):28-29

圖 版 說 明

圖1 子宮鱗狀細胞癌AE3陽性表達 Envision法 ×100

圖2 食道鱗狀細胞癌 Ki67陽性表達 Envision×100

圖3 乳腺浸潤性導(dǎo)管癌AE1陽性表達 Envision法 ×100

圖4 乳腺浸潤性導(dǎo)管癌AE3陽性表達 Envision法 ×100

EXPLANATION OF FIGURES

Fig.1 AE3 positively expressed in cell members of squamous cell carcinoma of uterus.Envision×100

Fig.2 Ki-67 positively expressed in cell nuclei of esophageal carcinoma tissue.Envision×100

Fig.3 AE1 positively expressed in cell members of infiltrating ductal carcinoma of mammary gland.Envision×100

Fig.4 AE3 positively expressed in cell members of infitrating

ductal carcinoma of mammary gland.Envision×100