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    血清胱抑素C在腎損傷中研究及與血肌酐尿素氮關(guān)系的分析

    2011-02-07 09:11:40張立軍
    當代醫(yī)學 2011年2期
    關(guān)鍵詞:胱氨酸尿素氮肌酐

    張立軍

    腎損傷疾病是臨床上一種常見的疾病,主要表現(xiàn)雙腎排泄過濾機體廢物能力的極大降低。早診斷、早治療,可逆轉(zhuǎn)損傷的腎功能,阻止腎臟疾病惡化。目前血清胱抑素C(cystatin C)檢測是近幾年發(fā)展起來的腎臟疾病早期診斷的新檢測項目,它是一種低分子量蛋白質(zhì),由體內(nèi)有核細胞產(chǎn)生,來源恒定。作為一種血漿內(nèi)源性成分對此我們采用顆粒透射比濁法測定血清cystatin C的濃度,探討其在腎病中的變化情況,并同血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)進行比較。

    1 材料與方法

    1.1 研究對象 2010年1~6月6338例患者血清標本來自我院門診及住院患者共同檢測cy statin、血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN),其中血清胱抑素C(cy statin C)≥1.55(m g/L)共560例,男性328例,女性232例。年齡94~60歲368例,30~59歲163例,15~29歲23例,0~14歲6例。cy statin C正常參考范圍0.50~1.55mg/L,血清肌酐(Scr)正常參考范圍44~133μmol/L、尿素氮(BUN)正常參考范圍2.4~7.5m ol/L。各項正常參考范圍是依據(jù)《全國臨床檢驗操作規(guī)程》,結(jié)合本院實際情況做適當修改得出。

    1.2 儀器 cystatin C、Scr、BUN濃度測定采用貝克曼公司生產(chǎn)的LX 20全自動生化分析儀。

    1.3 試劑和方法cystatin C濃度測定試劑是由利德曼公司提供,采用顆粒增強透射比濁法測定?;颊咴诓裳?h內(nèi)分離血清并進行測定。Scr和BUN采用Jaffe速率法和尿素酶法進行常規(guī)測定,試劑由貝克曼公司公司提供。6338例cystatin C、Scr、BUN的測定數(shù)據(jù)均來自我院2009.06.01~2010.01.01門診及住院患者。

    2 結(jié)果

    560例cystatin C(cysc)≥1.55m g/L的患者cystatin C、BUN、Scr性別年齡構(gòu)成比比較。cystatin C的值在≥1.55m g/L時為異常,BU N的值在≥7.5m o l/L為異常,Sc r的值在≥133μmol/L時為異常,各組的異常檢出率見表1。

    560例cy statin C(cy sc)≥1.55m g/L的患者各年齡階段cystatin C、Scr、BUN均值結(jié)果比較。cystatin C的值在≥1.55 m g/L時為異常,BUN的值在≥7.5m o l/L為異常,Scr的值在≥133μmol/L時為異常,各年齡段均值見表2。

    從560例標本中選出cystatin C(cysc)、Scr、BUN數(shù)值最高30、60、90、120、150、180例患者,并計算cystatin C、BUN、Scr均值與BUN、Scr對應(yīng)cystatin C(cysc)均值,分析cystatin C、Scr、BUN的相互關(guān)系,見表3。

    3 討論

    在1981年檢測了人胱氨酸蛋白酶抑制劑C(cy statinC)的氨基酸系列,它沒有顯示與已知任何超家族蛋白系列的同源性。直到兩年后研究者檢測了雞胱氨酸蛋白酶抑制劑的結(jié)構(gòu),并發(fā)現(xiàn)兩種蛋白44%的氨基系列相同,才確定胱氨酸蛋白酶抑制劑C的功能—半胱氨酸蛋白酶的抑制劑。又經(jīng)過二十多年的研究,人胱氨酸蛋白酶抑制劑家族目前已有明確11種蛋白組成。它們是胱氨酸蛋白酶抑制劑家族1中的胱氨酸蛋白酶抑制劑A和B,是惟一的細胞內(nèi)蛋白。胱氨酸蛋白酶抑制劑家族2中的胱氨酸蛋白酶抑制劑C、D、E、F、S、SA和SN組成,它們是細胞外蛋白和細胞間蛋白。胱氨酸蛋白酶抑制劑家族3由高和低分子量的激肽原(K in inogen)組成,它們主要是血管內(nèi)蛋白。1983年A nastasi等首次從雞蛋清中分離純化得到高純度的半胱氨酸蛋白酶抑制劑(cysteine p roteinase inh ibitor,CPI),是這一類蛋白質(zhì)超大家族的成員之一,有半胱氨酸蛋白酶抑制劑C、胱抑素C、γ-痕跡蛋白(γ-trace protein)、后γ球蛋白(post-γ-globu lin)之稱,目前中文多稱之為胱抑素C。它由122個氨基酸組成,帶正電荷,等電點為9.3,是一種堿性非糖化的低分子蛋白質(zhì),相對分子質(zhì)量為13 300[1]。

    為比較血清胱抑素C在醫(yī)院常規(guī)檢測中相對血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)的優(yōu)勢,筆者從6338份醫(yī)院患者標本中統(tǒng)計出血清胱抑素C異常標本560例,在560例血清胱抑素C異常標本中,血清肌酐(Scr)異常355例,尿素氮(BUN)異常422例。各項正常參考范圍的來源是依據(jù)《全國臨床檢驗操作規(guī)程》,結(jié)合我院實際情況做適當修改得出。從橫向比較得出的這個數(shù)據(jù)中可以看出血清胱抑素C在檢測中相對血清肌酐、尿素氮的優(yōu)勢。因此可以說胱抑素C(Cystatin C)因其分子量小,能自由通過腎小球濾過膜,幾乎完全被腎小管重吸收且不被分泌,能很好地替代血肌酐而成為一種新的反映腎小球濾過率(GFR)的理想標志物[4-5]。在縱向比較時,4個不同的年齡段中除最低年齡段(0~14歲),檢測中的血清胱抑素C和血清肌酐、尿素氮無論是在異常檢出率和均值上都無很大區(qū)別,血清胱抑素C在低年齡段(0~14歲)檢測中具有很好優(yōu)勢,而血清肌酐與尿素氮由于小兒體重和代謝原因,不能真實反映早期腎損傷。

    國內(nèi)外對血清胱抑素C的參考值從出生到101歲之間年齡范圍的個體以及各種體液進行了研究,正常人血清胱抑素C為(0.96±0.20)m g/L,臍帶血為(2.08±0.33)m g/L,嬰兒(<1個月)為(0.18±0.04)m g/L,<12個月為(0.39±0.09)m g/L,>12個月為(0.72±0.29)m g/L。腦脊液為(5.371±0.36)m g/L,唾液為(1.22±0.67)m g/L,關(guān)節(jié)液為(1.27±0.41)m g/L,尿液為(0.11±0.125)m g/L。羊水中的濃度與血漿中的濃度接近,腦脊液濃度為血漿的5~6倍,精漿中濃度最高,平均為51m g/L[6]。

    血清胱抑素C應(yīng)用中的不足,相對血清肌酐與尿素氮低廉的價格,血清胱抑素C的價格是昂貴的,增加患者負擔。從表2我們可以看到血清胱抑素C最大測定值大多小于10m g/L,在中至重度腎損傷的患者的檢測結(jié)果中對患者腎損傷程度上的反映不如血清肌酐與尿素氮明顯。從方法學上顆粒增強透射免疫比濁法測血清胱抑

    表1 560例cystatin C(cysc)≥1.55m g/L的患者cysc、BUN、Scr性別年齡構(gòu)成比

    表2 560例cystatin C(cysc)≥1.55的患者各年齡階段cysc scr BUN均值

    表3 560例標本中數(shù)值最高30~180例cysc、BUN、Scr均值與BUN、Scr對應(yīng)cysc均值

    Cystatin C是一種半胱氨酸蛋白酶抑制劑,也被稱為γ-微量蛋白或γ-后球蛋白,廣泛存在于各種組織的有核細胞和體液中,是一種低分子量、堿性非糖化蛋白質(zhì),分子量為13300M r,由122個氨基酸殘基組成,由機體有核細胞產(chǎn)生,產(chǎn)生率恒定,不受炎性反應(yīng)、膽紅素、溶血、血脂等影響,且與性別、年齡、體重、飲食無關(guān)。Cystatin C相對分子質(zhì)量低、等電點高,能自由地通過腎小球濾過膜并在近曲小管上皮細胞重吸收和降解。由于cy statin C的生成速度和血濃度穩(wěn)定,不受其他病理變化影響,腎臟是其惟一的濾過和代謝器官,因此其可作為反映腎小球過率的一種理想的內(nèi)源性標志物,當腎小球出現(xiàn)輕微損傷時血中cystatin C濃度即可出現(xiàn)升高,并隨著病情的加重而逐漸升高,所以cystatin C被公認為是反映早期腎損害的敏感標志物之一[2-3]。

    在早期的研究中,胱氨酸蛋白酶抑制劑C濃度的測定只能通過放射免疫擴散方法,此方法非常耗時,需要至少10~20h,并且CV值相當高(大約10%)。10年后發(fā)展了全自動的微粒子增強透射免疫比濁法和夾心酶免疫法,不僅快速而且精密度高,所以明顯促進胱氨酸蛋白酶抑制劑C再臨床常規(guī)實驗的發(fā)展。透射免疫比濁法可在自動生化分析儀上進行,有準確、簡便、快速的優(yōu)點。顆粒增強透射免疫比濁法是以多克隆抗體為基礎(chǔ)的改良免疫比濁分析法,利用碳二亞胺反應(yīng)將抗胱抑素C IgG共價結(jié)合到Intex顆粒上,與抗原結(jié)合形成的免疫復(fù)合物被聚乙二醇-6000沉淀,在340nm處比濁,與同樣處理的標準液比較,計算標本中胱抑素C的含量。整個分析過程只需幾分鐘,可利用生化分析儀進行比濁測定,批內(nèi)和批間CV分別為0.9%和2.2%,回收率為98%,黃疸、溶血和脂血標本均不受影響。使cystain C在臨床的廣泛應(yīng)用成為可能。素的線性與血清肌酐的 Jaffe速率法與尿素氮尿素酶法也是不可比的??梢娧咫滓炙谻應(yīng)用的優(yōu)勢在反映早期腎損傷。

    [1]孫曉慧.血清胱抑素C測定在疾病監(jiān)測中的應(yīng)用[J].醫(yī)學綜述,2006,12(7):443-445.

    [2]李曉娟.胱氨酸蛋白酶抑制劑c的臨床應(yīng)用[J].國外醫(yī)學:臨床生物化學與檢驗學分冊,2004,25(2):92-93.

    [3]Jovanovic D,Krstivojevic P,Obradovic I,et al.Serum cystatin C and beta2-microglobulin as markers of glomerular filtrationrate[J].Ren Fail,2003,25(1):123-125.

    [4]Stabuc B,Vrhovec L,Stabuc-Silih M,et al.Improved prediction of decreased creatinine clearance by serum cystatin C:use in cancer patients before and during chemotherapy[J].Clin Chem,2000,46(2):193-197.

    [5]陳菁,朱東芳.Cystatin C的檢測及臨床應(yīng)用[J].紹興文理學院學報,2004,24(7):106-108,112.

    [6]Woitas RP,Stoffel-Wagner B,Flommersfeld S,et al.Correlation of serum concentrations of cystatin C and creatinine to inulin clearance in liver cirrhosis[J].Clin Chem,2000,46(5):712-715.

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