不同方法檢測疑似甲流患者標本的結(jié)果分析

李啟欣 李煒煊 陳斌鴻 徐杰偉 戴偉良

禽流感病毒屬正粘病毒科甲型流感病毒屬，該病毒根據(jù)表面糖蛋白血凝素（HA）和神經(jīng)氨酸酶（NA）的抗原性不同可分為16個H亞型（H 1～H 16）和9個N亞型（N1～N9）[1]。H 5N1禽流感病毒不僅對陸禽有高致死性,1997年還在香港首次引發(fā)傳人事件,造成18人感染,6人死亡[2]。2003年底,H 5N1禽流感疫情在東亞和東南亞地區(qū)持續(xù)暴發(fā),2005至今又逐漸蔓延到俄羅斯、歐洲、中東、非洲和南亞地區(qū),給世界各國的農(nóng)業(yè)經(jīng)濟和公共衛(wèi)生帶來嚴重威脅[3]，因此,有關(guān)醫(yī)療機構(gòu)監(jiān)測可疑患者,在第一時間內(nèi)發(fā)現(xiàn)H 5N1病毒并采取相應(yīng)措施控制其擴散傳播,對于H 5N1疫情的控制具有重要意義。H 5N1病毒診斷方法包括病毒培養(yǎng)、PCR檢測、免疫學(xué)檢測和血清學(xué)檢測等[4]。根據(jù)2001～2003年香港H 5N1疫情控制經(jīng)驗,應(yīng)用甲流病毒抗原快速檢測試劑對疫情的早期發(fā)現(xiàn)有幫助,但其缺點是只能測定流感病毒的型別（即甲、乙、丙或A、B、C型）,而不能直接測定病毒的H亞型，導(dǎo)致陽性結(jié)果過多。為了檢驗實驗室所用抗原快速檢測試劑的質(zhì)量，我們設(shè)計了對疑似甲流患者平行各取兩份鼻咽拭子，一份用抗原快速檢測法檢測，另一份用PCR方法檢測，對比兩種方法檢測結(jié)果的差別，為臨床確診甲流提供實驗依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 病毒標本的采集 56名患者均為我院2009年7～8月發(fā)熱門診患者和感染科住院病人，每名患者平行取兩份鼻咽拭子，一份用甲流病毒抗原快速檢測法檢測，另一份先浸入病毒輸送液（Viraltransportmedia,VTM）保藏于4℃條件下,然后集中用PCR方法檢測。

1.2 甲流膠體金法快速檢測

1.2.1 將擦拭后的鼻咽拭子置于塑料試管的專用稀釋液（300m l）中，充分擠壓，使鼻咽分泌物充分溶于稀釋液中，將鼻咽拭子盡量擰干后取出，塑料試管中液體作為待檢測樣品，立即用于檢測。

1.2.2 打開鋁箔包裝，取出檢測試紙卡，置于水平臺面上，用滴管吸取溶有患者鼻咽部分泌物的稀釋液4滴加入檢測試紙卡加樣孔中。

1.2.3 加樣后15m in觀察結(jié)果。

表1 不同方法檢測疑似甲流患者標本結(jié)果（例）

1.2.4 陽性：在檢測區(qū)（T）和對照區(qū)（C）各出現(xiàn)一條紅色條帶；陰性：只在對照區(qū)（C）出現(xiàn)一條紅色條帶。無條帶出現(xiàn)或僅在檢測線位置出現(xiàn)一條紅帶，均為無效檢測，應(yīng)更換新批號試劑重新檢測。

2 結(jié)果

對我院發(fā)熱門診和感染科住院疑似病例共56份鼻咽拭子標本，用抗原快速檢測試劑進行檢測,其中陽性2例,弱陽性7例,其余47例為陰性.用PCR方法檢測,除抗原快速檢測法1例弱陽性結(jié)果為陰性外，其余陽性和弱陽性的8例結(jié)果均為陽性，陰性48例。兩種方法經(jīng)卡方檢驗（x2=1.0），無顯著性差異（P＞0.05）。結(jié)果見表1。

3 討論

3.1 在甲流流行其間，我院作為佛山市定點收治醫(yī)院，每天有較大量疑似甲流病人就診，為此我們選用質(zhì)量穩(wěn)定、敏感性高的甲流快速篩查試劑,以幫助臨床盡快篩查出甲流患者。

3.2 實驗結(jié)果顯示,甲流抗原快速檢測法陽性率為16%,PCR方法陽性率為14%,兩種方法的陽性符合率較高，與其他文獻報道有差異,可能跟我們選擇的病例種類有關(guān)，56例病例中,20例是發(fā)熱門診患者，36例是感染科疑似甲流住院患者。也可能與我們檢測標本數(shù)少、取材時間、取材部位以及是否治療過有關(guān)。有一例患者標本，抗原快速檢測法結(jié)果弱陽性而PCR法結(jié)果陰性,可能是快速膠體金法發(fā)生了非特異性反應(yīng)，導(dǎo)致實驗結(jié)果出現(xiàn)假陽性。

3.3 抗原快速檢測法9例弱陽性以上結(jié)果的病例中，有3例是感染科疑似甲流待確診的住院患者，余下6例是看發(fā)熱門診的住校學(xué)生，這部分過群居生活的學(xué)生,一旦出現(xiàn)感冒癥狀,病毒容易在群體中互相感染,造成大流行。學(xué)校應(yīng)配合衛(wèi)生部門及時控制疫情，對孩子進行必要的健康教育，加強體育鍛煉，培養(yǎng)良好的衛(wèi)生習(xí)慣。

本研究結(jié)果表明：甲型流感病毒抗原快速檢測試劑,雖然不能檢測H 5等亞型甲流，但無需任何專用設(shè)備即可在20m in內(nèi)得出檢測結(jié)果，可以滿足現(xiàn)場標本初步診斷的需要,尤其適合缺乏儀器設(shè)施和高素質(zhì)專業(yè)技術(shù)人員的基層單位，對禽流感疫情防控的需要。有助于提高防控第一線對H 5N1禽流感疫情的檢測效率和快速應(yīng)對能力，但疫情的確診應(yīng)結(jié)合流行病學(xué),臨床癥狀以及傳統(tǒng)的PCR方法和病毒分離方法。

[1]陳毅歆,羅海峰,徐飛海,等.H5N1禽流感病毒血凝素抗原快速檢測試劑對不同現(xiàn)場標本的檢測比較[J].病毒學(xué)報,2007,23（2）：91-92.

[2]于康震,陳化蘭,唐秀英,等.97香港禽流感[J].中國畜禽傳染病,1998,20（3）：187.

[3]http://www.cdc.gov./flu/avian/outbreaks/asia.htm.

[4]趙翠燕,崔恒敏.禽流感檢測方法研究進展[J].養(yǎng)禽與禽病防治，2003（05）：4-7.