海洛因依賴(lài)者血清中IL-9、IL-17水平的研究

何 軍 左 麗 （貴陽(yáng)醫(yī)學(xué)院免疫學(xué)教研室,貴陽(yáng) 550004）

·實(shí)用臨床免疫學(xué)·

海洛因依賴(lài)者血清中IL-9、IL-17水平的研究

何 軍 左 麗 （貴陽(yáng)醫(yī)學(xué)院免疫學(xué)教研室,貴陽(yáng) 550004）

目的:通過(guò)檢測(cè)IL-9、IL-17在海洛因依賴(lài)者血清中水平的變化,為進(jìn)一步認(rèn)識(shí)海洛因?qū)C(jī)體免疫功能的影響提供依據(jù)。方法:93例海洛因依賴(lài)者按吸食海洛因時(shí)間長(zhǎng)短分為三組（2年以?xún)?nèi)、5～10年、10年以上）,31例正常人血清作為對(duì)照組,用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）檢測(cè)各組血清IL-9、IL-17水平。結(jié)果:2年以?xún)?nèi)組和5～10年組海洛因依賴(lài)者血清IL-9較正常對(duì)照升高（P＜0.05）、各組IL-17水平較正常對(duì)照組降低（P＜0.05）;從2年以?xún)?nèi)組到 5～10年組到 10年以上組,IL-9水平先升高后降低[（334.92±144.41）pg/ml、（353.47±176.93）pg/m l、（287.38±129.94 pg/ml）],IL-17水平先降低后相對(duì)升高[（53.38±26.08）pg/ml、（45.87±16.81）pg/m l、（68.18±39.26）pg/m l）]。結(jié)論:IL-9、IL-17在海洛因依賴(lài)者血清中水平改變明顯,吸食海洛因可刺激IL-9水平升高而抑制機(jī)體IL-17的水平表達(dá)。

海洛因依賴(lài)者;IL-9;IL-17;免疫功能

阿片類(lèi)物質(zhì)濫用現(xiàn)象已成為一個(gè)全球性健康和社會(huì)問(wèn)題,越來(lái)越引起人們的重視。阿片類(lèi)物質(zhì)影響機(jī)體神經(jīng)、內(nèi)分泌、免疫、循環(huán)、代謝等各個(gè)器官系統(tǒng)的功能狀態(tài),長(zhǎng)期吸食海洛因可導(dǎo)致機(jī)體免疫功能的降低[1,2]。

細(xì)胞因子作為細(xì)胞間信號(hào)傳遞分子,主要參與調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答、免疫細(xì)胞分化發(fā)育、介導(dǎo)炎癥反應(yīng)等。我們根據(jù)本組設(shè)計(jì)方案研究了海洛因依賴(lài)者血清中Th1和Th2細(xì)胞產(chǎn)生主要細(xì)胞因子IFN-γ和IL-4水平,證明海洛因依賴(lài)者存在Th1/Th2功能紊亂,特別是吸食海洛因5～10年間以Th1亢進(jìn)、Th1降低為主[3]。IL-9主要由Th9細(xì)胞分泌,是抗病毒免疫的關(guān)鍵分子,調(diào)節(jié)T細(xì)胞和B細(xì)胞應(yīng)答。IL-17主要由Th17細(xì)胞分泌,是一種促炎癥因子,在適應(yīng)性免疫和固有免疫中有很強(qiáng)的調(diào)節(jié)作用。通過(guò)排除常見(jiàn)血源傳播病原體,根據(jù)吸食海洛因時(shí)間長(zhǎng)短檢測(cè)IL-9、IL-17水平來(lái)了解海洛因?qū)C(jī)體免疫功能的影響報(bào)道較少,本文做了相關(guān)研究,報(bào)道如下:

1 材料與方法

1.1 材料 受檢對(duì)象:海洛因依賴(lài)組:收集2009年1～12月貴州省第二人民醫(yī)院美沙酮維持治療門(mén)診就診的海洛因依賴(lài)者共93例,其中男69例,女24例,年齡20～52歲,平均38.2歲。吸食海洛因時(shí)間平均8.0年,海洛因日均用量0.25～5.20克。全部患者海洛因?yàn)E用史明確,符合DSM-Ⅲ-R關(guān)于阿片類(lèi)藥物依賴(lài)診斷標(biāo)準(zhǔn)。各例均排除HBsAg、HCV、HIV、TP陽(yáng)性,排除肝功能異常（AlT＞40）,腎功能異常（BUN、CRE、UA在參考范圍外）,排除接受過(guò)美沙酮治療及6月內(nèi)使用免疫制劑。對(duì)照組:來(lái)自貴州省第二人民醫(yī)院體檢中心正常健康體檢者31例,其中男22例,女9例,年齡在21～50歲,平均年齡37歲。各例排除內(nèi)容同上。

1.2 主要試劑和儀器 IL-9、IL-17檢測(cè)用ElISA試劑盒為美國(guó)GBD公司原裝試劑,批號(hào)分別為I056-00,I073-00。-40℃低溫冰箱（青島海爾公司）,德國(guó)Eppendorf微量移液器,美國(guó)BIO-TEK ElX800UV酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀,北京普朗DNX-9620A洗板機(jī),恒溫水浴箱（上海醫(yī)療器械七廠600型）。

1.3 研究方法 標(biāo)本收集:提供血樣者均空腹采集靜脈血 4 ml于真空采血管,37℃水浴 30分鐘后3 000 r/min離心15分鐘,取血清1.5 ml于Ep管,-40℃冰箱保存待測(cè)。測(cè)定方法:雙抗體夾心ELISA法檢測(cè)血清IL-9、IL-17水平,按照試劑說(shuō)明書(shū)操作。

2 結(jié)果

海洛因依賴(lài)者血清中IL-9水平,2年以?xún)?nèi)組、5～10年組均高于正常對(duì)照組（P＜0.05）,而10年以上組與正常對(duì)照組間無(wú)統(tǒng)計(jì)差異（P＞0.05）,各時(shí)間組間無(wú)統(tǒng)計(jì)差異（P＞0.05）;IL-17水平,各時(shí)間組均低于正常對(duì)照組（P＜0.05）,且10年以上組較5～10年組相對(duì)升高（P＜0.05）。見(jiàn)表1,圖1、2。

圖1 吸食海洛因2年內(nèi)、5～10年、10年以上和正常對(duì)照IL-9、IL-17水平比較Fig.1 Comparison of concentrations of IL-9 and IL-17 in sera between the groups ofheroin addicts of within 2 years,5-10 years,over 10 years and thenormal group

圖2 各組海洛因依賴(lài)者血清IL-9、IL-17水平與正常對(duì)照組比較Fig.2 The levelof IL-9,IL-17 in sera from the heroin addicts of different periods of time,which were compared with thenormal group

表1 各組海洛因依賴(lài)者血清中IL-9和IL-17水平的比較（±s,pg/m l）Tab.1 Comparisons among the concentrations of IL-9,IL-17 in sera from the heroin addicts of different periods of time（±s,pg/m l）

表1 各組海洛因依賴(lài)者血清中IL-9和IL-17水平的比較（±s,pg/m l）Tab.1 Comparisons among the concentrations of IL-9,IL-17 in sera from the heroin addicts of different periods of time（±s,pg/m l）

Note:1）P＜0.05,vsnormalgroup;2）P＜0.05,vsover 10 yearsgroup.

Cytokines Heroin addictsgroups Within 2 years 5-10 years Over 10 years Normal group IL-9 334.92±144.411）353.47±176.931）287.38±129.94 217.96±41.51 IL-17 53.38±26.081） 45.87±16.8112） 68.18±39.261）92.06±15.73

3 討論

海洛因是阿片類(lèi)衍生物,與阿片受體結(jié)合后發(fā)揮作用,人體內(nèi)包括免疫細(xì)胞在內(nèi)的多種細(xì)胞表面廣泛表達(dá)阿片受體。當(dāng)海洛因作為外源性阿片物質(zhì)進(jìn)入機(jī)體后,影響機(jī)體的神經(jīng)-內(nèi)分泌-免疫調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò),使機(jī)體的免疫系統(tǒng)的固有免疫、細(xì)胞免疫和體液免疫功能?chē)?yán)重受損。Vallejo等[4]認(rèn)為外源性海洛因通過(guò)下丘腦-垂體-腎上腺軸和自主神經(jīng)系統(tǒng)抑制免疫功能,至少部分由中樞、外周神經(jīng)和免疫細(xì)胞的阿片受體介導(dǎo)。Timothy B.Saurer等[5]證實(shí)神經(jīng)系統(tǒng)的神經(jīng)伏核作為海洛因的神經(jīng)基質(zhì)參與誘導(dǎo)機(jī)體免疫系統(tǒng)改變,細(xì)胞因子作為免疫調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)中的關(guān)鍵性介質(zhì),與神經(jīng)-內(nèi)分泌系統(tǒng)聯(lián)系緊密。故研究海洛因依賴(lài)者血清細(xì)胞因子水平對(duì)了解海洛因影響機(jī)體免疫功能有重要意義。

CD4+T細(xì)胞是構(gòu)成機(jī)體適應(yīng)性免疫功能的重要組成部分,可誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生有效的抗病毒免疫應(yīng)答。CD4+T細(xì)胞根據(jù)產(chǎn)生細(xì)胞因子及生物學(xué)功能的不同分為 Th1、Th2、Th9和Th17細(xì)胞等。IL-9由新型的不同于 Th1、Th2、Th17和Treg細(xì)胞的Th9細(xì)胞分泌,是抗病毒免疫的關(guān)鍵分子,調(diào)節(jié)T細(xì)胞和B細(xì)胞應(yīng)答,尤其對(duì)肺部病毒感染疾病有特異效應(yīng),近年也有報(bào)道認(rèn)為IL-9作為T(mén)h17的衍生因子對(duì)炎性疾病有促進(jìn)作用[6,7]。Th17細(xì)胞是近年發(fā)現(xiàn)的一類(lèi)不同于Th1和Th2的CD4+T細(xì)胞亞群,TGF-β和IL-6是初始CD4+T細(xì)胞分化為T(mén)h17的必需因子,IL-23是維持Th17存活的重要因子,缺少I(mǎi)L-23不影響Th17的產(chǎn)生,但Th17不能擴(kuò)增和存活[8],Th17細(xì)胞主要分泌IL-17,可發(fā)揮抗細(xì)菌、抗病毒、抗真菌、抗寄生蟲(chóng)等作用,在抗感染免疫中的作用越來(lái)越受到重視[8-10]。本研究結(jié)果顯示在吸食海洛因2年到5～10年,血清IL-9水平較正常對(duì)照組升高,IL-17相對(duì)較低,提示海洛因可能刺激機(jī)體高表達(dá)IL-9,而抑制IL-17的產(chǎn)生;吸食海洛因10年以上,血清IL-9水平下降,接近正常水平,而IL-17相對(duì)升高,但仍低于正常水平。IL-9和IL-17同是前炎癥因子,二者不同程度表現(xiàn)升高,表明吸食海洛因時(shí)間長(zhǎng)短機(jī)體均可能表現(xiàn)感染狀態(tài),IL-17的相對(duì)升高可能會(huì)加重機(jī)體自身不良狀況。Wassim Elyaman等[11]報(bào)道認(rèn)為IL-9是影響Th17細(xì)胞分化和Treg細(xì)胞功能的關(guān)鍵分子,IL-9主要由Th17細(xì)胞產(chǎn)生,并與TGF-β1協(xié)同作用分化天然CD4+T細(xì)胞為T(mén)h17細(xì)胞,Th17細(xì)胞分泌IL-9受IL-23調(diào)節(jié)。本研究顯示的IL-9升高,IL-17減低,可能在海洛因依賴(lài)者中IL-9無(wú)關(guān)Th17細(xì)胞分化,但此機(jī)制尚需進(jìn)一步驗(yàn)證。

IL-9、IL-17在海洛因依賴(lài)者血清中水平改變明顯,吸食海洛因可刺激機(jī)體IL-9水平表達(dá)升高,而抑制IL-17的產(chǎn)生。

1 Islam SK,Hossain K J,KamalMetal.Serum immunoglobulinsandwhite blood cells statusof drug addicts:influence of illicit drugs and sex habit[J].Addict Biol,2004;9（1）:27-33.

2 Ran D,Goldman.Drug-induced gynecomastia in children and adolescents[J].Can Fam Physician,2010;56:344-345.

3 何 軍,左 麗.海洛因依賴(lài)者血清中Th1和Th2細(xì)胞產(chǎn)生主要細(xì)胞因子水平的研究[J].中國(guó)免疫學(xué)雜志,2010;26（11）:1033-1035.

4 Vallqo R,Benyam in R.Opioid therapy and immunosuppression:a review[J].Am JTher,2004;11（5）:354-365.

5 Timothy B,Saurer,StephanieGetal.Evidence for the nucleusaccumbens asa neuralsubstrate of heroin-induced immune alterations[J].Pharmacol Exp Ther,2009;329:1040-1047.

6 Dodd Jonathan S,Lum EdaC,Goulding Johnetal.IL-9 Regulatespathology duringprimary andmemory responses to respiratory syncytialvirus infection[J].Immunol,2009;183（11）:7006-7013.

7 Nowak E C,Weaver C T,Henrietta Turneretal.IL-9 as amediator of Th17-driven inflammatory disease[J].ExpMed,2009;206:1653-1660.

8 Betteli E,Carrier Y,GaoWetal.Reciprocal developmental pathways for the generation of pathogenic effector Th17 and regμlatory T cells[J].Nature,2006;441（7090）:235-238.

9 張玉俠.效應(yīng)分子IL-17的抗感染作用[J].國(guó)際免疫學(xué)雜志,2009;32（3）:241-244.

10 CurtisM M,Way SS.Interleukin-17 in host defense against bacterial,mycobacterial and fungal pathogens[J].Immunology,2009;126（2）:177-185.

11 Wassim Elyaman,Elizabeth M,Bradshawetal.IL-9 inducesdifferentiation of Th17 cells and enhances function of FoxP3+natural regulatory T cells[J].PNAS,2009;106:12885-12890.

[收稿2010-11-01 修回2011-01-10]

（編輯 張曉舟）

A Study on the levelof IL-9,IL-17 in Sera from Heroin Addicts

HEJun,ZUOLi.DepartmentofImmunology,GuiyangMedicalUniversity,Guiyang550004,China

Objective:By detecting IL-9,IL-17 in serum levels of heroin addicts change for a further exploration of heroin's effects on immune function to provide evidence.Methods:93 cases of heroin addictswere equally divided into3 groups as thosewho employed to detect their sera levels IL-9,IL-17,31 cases of normal human serawere used as controls.Results:Thegroups of heroin addicts thathad taken for less than 2 years and thathad taken for 5 to 10 years had higher levels of IL-9（P＜0.05）but lower levels of IL-17（P＜0.05）,both compared to the controls.The levelsof IL-9 rose at firstbut thenwent downover the range of all groups in theorder of drug-taking durations（334.92±144.41 pg/m l,353.47±176.93 pg/m l,287.38±129.94 pg/m l）;while the levels of IL-17 had theopposite story,falling down firstly butascending afterwards（53.38±26.08 pg/ml,45.87±16.81 pg/ml,68.18±39.26 pg/ml）.Conclusion:The levels of IL-9,IL-17 in the sera from theheroin addicts changed significantly.Heroin abuseswere p roved to stimulate the expression of IL-9 but inhibit that of IL-17 in vivo.

Heroin addicts;IL-9;IL-17;Immunefuction

R996 R34

A

1000-484X（2011）05-0463-03

10.3969/j.issn.1000-484X.2011.05.019

何 軍（1978年-）,男,碩士,主管技師,主要從事臨床免疫學(xué)研究,現(xiàn)工作于貴州省第二人民醫(yī)院,E-mail:gzgyhjjj@163.com;

及指導(dǎo)教師:左 麗（1955年-）,女,教授,博士生導(dǎo)師,主要從事分子免疫學(xué)研究,E-mail:zuoligymc@163.com。