艾葉用于動物實驗室空氣消毒的效果觀察及吸入刺激實驗

韓志剛，韋 莉，吳登虎，楊俊卿，潘永全

（1.重慶醫(yī)科大學實驗動物中心，重慶 400016；2.重慶動物園，重慶 400050； 3.重慶醫(yī)科大學藥理學教研室，重慶 400016）

動物實驗室常用的空氣消毒方法包括甲醛熏蒸、過氧乙酸噴霧、紫外線照射等。近年來，國內(nèi)外許多學者開始嘗試使用艾葉進行室內(nèi)空氣消毒并取得了一定效果。本實驗觀察艾葉用于動物實驗室空氣消毒的效果及其對實驗動物的吸入刺激性，希望能為其應用于動物實驗室空氣消毒提供依據(jù)。

1 實驗材料

1.1 藥品及試劑

艾葉由重慶醫(yī)科大學中醫(yī)學院附屬醫(yī)院提供并鑒定；血液瓊脂培養(yǎng)基由重慶龐通醫(yī)療器械有限公司提供。

1.2 實驗動物

SD大鼠20只，體重（200±10）g，由重慶醫(yī)科大學實驗動物中心提供（生產(chǎn)許可證號：SCXK（渝） 2007-0001）。

1.3 主要儀器設備

303AS-2型電熱培養(yǎng)箱，上海浦東躍欣科學儀器廠；PY4型大、小鼠隔離器，蘇州新區(qū)楓橋實驗動物籠具廠。

2 實驗方法

2.1 艾葉熏蒸動物實驗室空氣消毒的效果觀察

2.1.1 消毒方法：分別用艾葉1 g/m3、2 g/m3、4 g/ m3的劑量對大小相同（25 m2）的三間空動物實驗室進行熏蒸消毒。將艾葉放在金屬網(wǎng)上置于房間中央地上，點燃艾葉，但不需燃成火苗，只需不斷產(chǎn)生煙霧狀氣體擴散到室內(nèi)空間，立即離開，密閉房間，讓其自然燃燒怠盡，采樣后開窗通風。

2.1.2 采樣方法：消毒前及消毒后12 h各采樣1次。按照國標14925-2001實驗動物環(huán)境空氣落下菌數(shù)檢測方法，每5～10 m2設置1個測定點的標準，將4個血液瓊脂培養(yǎng)皿放于房間地面上，均勻分布。平皿打開后放置30 min，加蓋，放于37℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)48 h后計CFU［（colony form ing units，CFU），個/皿］。

按照以上方法分別對三間動物實驗室進行空氣消毒及采樣，每周1次，連續(xù)10周。

2.1.3 判斷標準及計算、統(tǒng)計方法：按照國標14925-2001動物實驗環(huán)境落下菌數(shù)指標標準：普通環(huán)境CFU≤30個/皿為合格。4個測定點CFU的平均值作為該組該次采樣的CFU，以此數(shù)據(jù)判斷該次檢測CFU是否合格，消毒10次后計算各組消毒合格率（％）。實驗數(shù)據(jù)用±s表示，運用SPSS11.5統(tǒng)計軟件進行單因素方差分析，組間兩兩比較用LSD法，以P＜0.05為差異有顯著性。

2.2 艾葉熏蒸消毒對實驗動物的吸入刺激實驗

將40只SD大鼠分為對照組和艾葉低、中、高劑量組，每組10只，分別放在空間為1.5 m3的4個隔離器內(nèi)。分別用艾葉1 g/m3、2 g/m3、4 g/m3的劑量對低、中、高劑量組隔離器進行熏蒸消毒，方法同上。消毒12 h后將各組大鼠脫頸椎處死并解剖，取肺組織，用4％甲醛溶液固定，常規(guī)石蠟包埋切片，HE染色，光鏡下觀察肺組織形態(tài)學的變化。

3 結果

3.1 艾葉熏蒸動物實驗室空氣消毒的效果觀察

三個劑量艾葉消毒結果顯示（表1）：消毒前，低、中、高劑量組CFU均不合格，且組間差異無顯著性。消毒后12 h，各組CFU均合格，低劑量組與中、高劑量組差異顯著（P＜0.05），中、高劑量組組間差異不顯著；消毒10次，低劑量組合格率為80％，中、高劑量組均為100％。

表1 不同劑量艾葉消毒前后CFU（±s）及合格率Tab.1 CFU（±s）before and after air disinfection with Folium Artemisiae argyi and the eligible rate in different dose groups

表1 不同劑量艾葉消毒前后CFU（±s）及合格率Tab.1 CFU（±s）before and after air disinfection with Folium Artemisiae argyi and the eligible rate in different dose groups

*分別與中、高劑量組比較，P＜0.05Note：vs.midd le-dose group and high-dose group，P＜0.05

分組Groups n消毒前菌落數(shù)CFU before disinfection消毒后菌落數(shù)CFU after disinfection合格次數(shù)Eligible times合格率（％） Eligible rate低劑量組Low dose group 10 61.8±22.7 28.2±2.3*8 80中劑量組Middle dose group 10 65.2±14.9 14.8±3.0 10 100高劑量組High dose group 10 52.4±8.3 13.4±5.0 10 100

3.2 艾葉熏蒸消毒對實驗動物的吸入刺激實驗

光鏡下觀察，對照組大鼠肺內(nèi)小支氣管上皮無倒狀，管壁無炎癥細胞浸潤，管腔內(nèi)無分泌物；肺泡管及肺泡無擴張、萎陷；肺泡腔內(nèi)無出血和水腫液，肺泡上皮無損傷；肺泡壁無增厚和炎癥細胞浸潤，肺毛細血管無擴張、充血（圖1A-B）。與對照組比較，低、中、高劑量組大鼠肺組織均出現(xiàn)不同程度的病理變化，表現(xiàn)為肺內(nèi)小支氣管腔內(nèi)分泌物增多；肺毛細血管充血；肺泡壁增寬，肺泡壁內(nèi)見中性粒細胞浸潤；肺泡上皮腫脹，個別肺泡腔內(nèi)見出血（圖1C-H）（圖1見彩插5）。

4 討論

對動物實驗室進行日常空氣消毒是預防疾病、防止交叉感染的重要措施，也是控制動物實驗室環(huán)境質量的重要內(nèi)容之一。傳統(tǒng)的空氣消毒法包括甲醛熏蒸、過氧乙酸噴霧、紫外線照射等［1］，但都存在一定局限性，如甲醛、過氧乙酸對人體、動物的刺激性和毒性［2-6］，紫外線的毒性及消毒效果的受限性等［7］。

中藥艾葉（Folium Artemisiae argyi）是中醫(yī)常用藥之一，為菊科植物艾的干燥葉，藥用歷史悠久。艾葉對多種病原微生物有殺滅或抑制作用［8］。近年來，國內(nèi)外許多學者開始嘗試使用艾葉進行室內(nèi)空氣消毒并取得了一定效果［9-13］。筆者查閱大量文獻，未見艾葉用于動物實驗室空氣消毒的實驗研究。

三種劑量艾葉消毒結果顯示，消毒前，三個組CFU均不合格，且組間差異無顯著性，表明消毒前三個房間菌落數(shù)水平相當。消毒后12 h，各組CFU均合格，這表明三種劑量艾葉對動物實驗室空氣均有一定的消毒作用。消毒10次后統(tǒng)計，低劑量組合格率為80％，中、高劑量組合格率均為100％。低劑量組菌落數(shù)與中、高劑量組差異顯著（P＜0.05），中、高劑量組組間差異不顯著。這表明中、高劑量組消毒效果相當且優(yōu)于低劑量組。由此提示，艾葉用于動物實驗室空氣消毒的較佳劑量為中劑量組的2 g/m3。

由于大鼠對空氣污染非常敏感，常被用作空氣污染、有害氣體慢性中毒等方面的研究［14］，故本實驗選用大鼠進行吸入刺激實驗。結果顯示，與對照組比較，低、中、高劑量組大鼠肺組織均出現(xiàn)不同程度的炎性病變，表明艾葉薰蒸消毒對大鼠呼吸系統(tǒng)有刺激性損傷。此結果與張大維等［4］所做過氧乙酸吸入刺激實驗的結果類似。盡管三個劑量的大鼠肺組織均出現(xiàn)不同程度的損傷，但其表現(xiàn)卻并不規(guī)律。同組10只大鼠肺組織的損傷程度并不一致；組間比較，也不能看出損傷程度與艾葉劑量之間的關系。于此，作者正在做進一步的實驗研究，以探索其中的相關性，希望對今后的實際應用作出指導。

綜上所述，艾葉熏蒸對動物實驗室有一定消毒效果，可以作為動物實驗室日常消毒的方法之一，但由于其對實驗動物呼吸系統(tǒng)有刺激性損傷，表明此方法也存在類似傳統(tǒng)消毒方法的局限性，因此使用時須控制好濃度和劑量，且不宜長期使用，應與其它消毒方法交替使用為宜。

［1］劉恩岐，尹海林，顧為望，主編.醫(yī)學實驗動物學［M］.北京：科學出版社，2008：54.

［2］顧為望，黃韌，潘甜美，主編.實驗動物屏障設施建設與管理［M］.西安：陜西科學技術出版社，2002：66-67.

［3］張大維，邴國強，李萍，等.2％含量的過氧乙酸眼刺激實驗［C］.中國實驗動物學會第七屆學術年會論文集.桂林：中國實驗動物學會，2006：278-281.

［4］張大維，邴國強，李萍等.2％含量的過氧乙酸吸入刺激實驗［C］.中國實驗動物學會第七屆學術年會論文集.桂林：中國實驗動物學會，2006：282-284.

［5］張大維，邴國強，李萍，等.0.2％戊二醛、0.2％過氧乙酸、2％過氧乙酸、0.2％次氯酸鈉皮膚毒性實驗［C］.中國實驗動物學會第七屆學術年會論文集.桂林：中國實驗動物學會，2006：285-287.

［6］張大維，邴國強，李萍等.2％過氧乙酸吸入毒性實驗［C］.中國實驗動物學會第七屆學術年會論文集.桂林：中國實驗動物學會，2006：288-290.

［7］梅全喜，高玉橋.中藥艾葉空氣消毒研究近況［J］.中醫(yī)藥學刊，2005，23（9）：1581-1582.

［8］李慧.艾葉的藥理研究進展及開發(fā)應用［J］.基層中藥雜志，2002，16（3）：51-53.

［9］趙俐玲，余素飛.3種空氣消毒法的效果比較［J］.中華現(xiàn)代護理雜志，2001，7（12）：5-6.

［10］姜文全，崔彩萍.艾葉熏蒸用于母嬰同室空氣消毒［J］.西北藥學雜志，2 002，17（2）：80-81.

［11］賴勝芳，梁秀蘭，馮超英，等.蒼術、艾葉熏蒸發(fā)熱門診空氣的消毒效果分析［J］.現(xiàn)代臨床護理，2004，3（2）：17-18.

［12］丁麗，尹蓮蓉.福利機構嬰兒室艾葉熏蒸空氣消毒劑量的探討［J］.中國民康醫(yī)學，2006，18（4）：300-302.

［13］蔡彩萍.母嬰同室病房艾葉消毒效果觀察［J］.溫州醫(yī)學院學報，2006，36（3）：296-297.

［14］孫靖，主編.實驗動物學基礎［M］.北京：北京科學技術出版社，2005：56.