HPLC測定白芷藥材中歐前胡素與異歐前胡素的含量

王云龍，楊立志，姜雪敏，許世偉，邵禮梅

雞西市藥品檢驗所，黑龍江雞西 158100

白芷收載于《中國藥典》2010年版一部，來源為傘形科植物白芷Angelica dahurica (Fisch.ex Hoffm.)Benth.et Hook.f.或杭白芷Angelica dahurica(Fisch.ex Hoffm.)Benth.et Hook.f.var.formosana(Boiss.)Shan et Yuan的干燥根。性溫味辛，歸胃、大腸、肺經(jīng)。具有散風除濕、通竅止痛、消腫排膿的功效。用于治療感冒頭痛、眉棱骨痛、鼻塞、鼻淵、牙痛、白帶、瘡瘍腫痛?！吨袊幍洹?010年版一部[1]僅對白芷中歐前胡素進行了含量測定，文獻報道[2-3]的方法雖對兩種成分同時進行含量測定，但前處理方法繁瑣。本文采用高效液相色譜法同時測定白芷藥材中歐前胡素與異歐前胡素的含量，方法簡便、快速、專屬性強、分離度高，可作為白芷藥材的質(zhì)量控制方法。

1 儀器與試藥

HP1100高效液相色譜儀，配置四元泵、紫外檢測器、自動進樣器、柱溫箱、HP Chemstation色譜工作站；AG285電子分析天平、歐前胡素與異歐前胡素為中國藥品生物制品檢定所提供，水為重蒸餾水，甲醇為色譜純。白芷藥材購于藥店。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：Agilent ZORBAX SB-C18（5 μm，4.6 mm×250 mm），檢測波長：280 nm，流動相：甲醇-水（70∶30），流速：1 ml/min，柱溫：35℃，進樣量 20 μl。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液的制備 分別精密稱取歐前胡素與異歐前胡素9.48 mg、15.00 mg，置100 ml量瓶中，加甲醇適量使溶解并稀釋至刻度，搖勻即得。

2.2.2 供試品溶液的制備 取樣品1粉末（過三號篩）約1.0 g，精密稱定，置50 ml量瓶中，加甲醇45 ml，超聲處理（功率300 W，頻率50 Hz）30 min，放冷，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，經(jīng)0.45 μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.3 線性關系考察

精密吸取歐前胡素和異歐前胡素的對照品混合溶液0.5、1.5、2.5、3.5、4.5 ml， 置 10 ml量瓶中， 用甲醇稀釋至刻度，按上述色譜條件，注入液相色譜儀，記錄峰面積，以濃度為橫坐標X（μg/ml），相應成分峰面積為縱坐標Y，進行線性回歸，歐前胡素0.094 8～0.853 2 μg/ml內(nèi)具有良好的線性關系，回歸方程為 Y=4.003×103X+16.5，r=0.999 6；異歐前胡素在0.150 0～1.350 0 μg/ml內(nèi)具有良好的線性關系，回歸方程為 Y=4.242×103X+16.917，r=0.999 8。

2.4 精密度試驗

按上述色譜條件，以對照品混合溶液連續(xù)進樣5次，以峰面積計算，歐前胡素的RSD=0.3%，異歐前胡素的RSD=0.5%。

2.5 穩(wěn)定性試驗

取供試品溶液，在室溫下放置，按上述色譜條件，分別在0、2、4、6、8 h 測定，以峰面積計算，歐前胡素的 RSD=0.4%，異歐前胡素的RSD=0.8%，表明供試品溶液在8 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.6 重復性試驗

同一批白芷，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液5份，在上述色譜條件下測定，測得歐前胡素的RSD=1.8%，異歐前胡素的RSD=1.7%。

2.7 回收率試驗

取已知含量的供試品5份，每份0.5 g，精密稱定，置5個25 ml量瓶中，分別精密加入上述對照品溶液5 ml，加甲醇稀釋至刻度，在上述色譜條件下測定，計算回收率，歐前胡素的平均回收率為98.0%，RSD=1.0%；異歐前胡素的平均回收率為99.0%，RSD=0.5%，結果見表1。

表1 歐前胡素與異歐前胡素的加樣回收試驗結果（n=5）

2.8 樣品的測定

取5批供試品，按“2.2.2”制備供試品溶液，在上述色譜條件下測定，結果見表2，典型色譜圖如圖1所示。

表2 白芷中歐前胡素與異歐前胡素的含量測定結果

3 討論

3.1 提取方法的選擇

本研究比較了超聲提取法與回流提取法對歐前胡素與異歐前胡素提取率的影響，回流提取與超聲提取無明顯差異，因超聲法簡便，故采用超聲提取法。

3.2 色譜條件的選擇

對流動相甲醇-水的比例進行的考察結果表明，甲醇-水（80∶20）時，歐前胡素、異歐前胡素與其他組分分離效果不好；甲醇-水（50∶50）時，洗脫時間較長。 故選擇甲醇-水（70∶30）作為流動相，分離度良好，保留時間適宜。柱溫分別考察了25℃、30℃、35℃，結果表明35℃時柱壓較小，分離效果好。

[1]國家藥典委員會.中國藥典[S].一部.北京：中國醫(yī)藥科技出版社,2010：97-98.

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