梔子減壓提取工藝實(shí)驗(yàn)研究

韓 麗， 韋 娟， 周子渝， 趙強(qiáng)強(qiáng)， 陳曉東， 楊 明，3

(1.成都中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院中藥材標(biāo)準(zhǔn)化教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，四川 成都611137;2.南京至成制藥設(shè)備有限公司，江蘇 南京210008;3.江西中醫(yī)學(xué)院，江西 南昌330004)

1 前言

提取是中藥生產(chǎn)最關(guān)鍵的工藝之一，中藥提取過(guò)程中多采用水為溶媒，常壓下提取溫度相當(dāng)于溶媒的沸點(diǎn)，水為100℃，不利于含熱敏性有效成分中藥的提取。由于溶媒的沸點(diǎn)是隨外界大氣壓的降低而降低，在減壓操作即負(fù)壓條件下，可在較低的溫度下使溶液處于沸騰狀態(tài)而進(jìn)行動(dòng)態(tài)提取，這樣既可保證藥材中熱敏性成分免遭高溫煎煮破壞，又能減少許多大分子雜質(zhì)如淀粉、鞣酸、黏液質(zhì)等的析出，便于制劑的成型和穩(wěn)定［1，2］。同時(shí)，通過(guò)減壓控制溫度提取，可以找到中藥各類成分最適宜的沸騰狀態(tài)下的提取溫度，對(duì)于改進(jìn)中藥提取工藝現(xiàn)狀具有重要意義。

減壓提取具有提取溫度低、效率高等特點(diǎn)，但目前研究報(bào)道較少，本實(shí)驗(yàn)選取梔子為研究模型，對(duì)梔子進(jìn)行減壓提取工藝初步研究，并與常用的回流提取法進(jìn)行比較，期望為中藥減壓提取工藝的推廣應(yīng)用提供研究數(shù)據(jù)。

2 實(shí)驗(yàn)部分

2.1 材料與試藥 島津LC-10A高效液相色譜儀;SPD-10AVP紫外檢測(cè)器;SCL-6A系統(tǒng)控制器;TC-100恒溫箱;LC2000色譜數(shù)據(jù)工作站;KUUDOS SK250HP型超聲波清洗器;BP211D AG電子天平;SHZ-Ⅲ型循環(huán)水式多用真空泵。梔子苷對(duì)照品，中國(guó)藥品生物制品檢定所(批號(hào):110749-200613);梔子對(duì)照藥材，中國(guó)藥品生物制品檢定所(批號(hào):120986-200605)。乙腈:色譜純;其余試劑均為分析純。

2.2 方法與結(jié)果

2.2.1 樣品制備 實(shí)驗(yàn)裝置自制，通過(guò)真空泵及放氣閥調(diào)節(jié)三頸瓶中的真空度及提取溫度。見圖1。

圖1 減壓提取裝置

報(bào)道［3］，采用水為提取溶劑，依照表1所示條件分別在常壓 100、減壓40、50、60、70、80 ℃進(jìn)行樣品的制備:每份樣品稱取梔子50 g，第1次8倍量水提取1 h，第2次6倍量水提取1 h，合并濾液，定容至1 000 mL。

2.2.2 梔子苷含量測(cè)定(HPLC法) 依照中國(guó)藥典2005年版測(cè)定［4］。色譜條件:色譜柱:十八烷基硅烷鍵合硅膠柱;依利特 ODS(250 mm ×4.6 mm)，5 μm，柱號(hào):13180911908;乙腈-水(15:85)為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)238 nm，流速:1.0 mL/min;柱溫:30℃;梔子苷色譜峰與相鄰峰達(dá)到基線分離，理論板數(shù)按梔子苷峰計(jì)算應(yīng)不低于1 500。

2.2.2.1 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線 精密稱取經(jīng)硅膠干燥器干燥的梔子苷對(duì)照品10.63 mg，置于50 mL量瓶中，以甲醇溶解并稀釋至刻度，作為貯備液;精密吸取3.0 mL置于10 mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，混勻，即得梔子苷對(duì)照品溶液(63.78 μg/mL)。分別精密進(jìn)樣 5、7.5、10、12.5、15 μL，照上述色譜條件測(cè)定峰面積積分值，以峰面積值(A)對(duì)進(jìn)樣量(C)進(jìn)行回歸，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線y=452 744x-57 637、r=0.999 9。結(jié)果表明，梔子苷進(jìn)樣量在0.318 9～0.956 7 μg之間線性關(guān)系良好。

2.2.2.2 精密度實(shí)驗(yàn) 精密吸取對(duì)照品溶液和同一樣品溶液各10 μL，按上述色譜條件，重復(fù)進(jìn)樣6次，其峰面積值的RSD分別為0.9%和1.2%，表明儀器精密度良好。

2.2.2.3 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取對(duì)照品溶液和同一樣品溶液各 10 μL，按照上述色譜條件在 0，2，4，6，8 h 分別進(jìn)樣 10 μL，測(cè)定峰面積，結(jié)果RSD分別為1.3%和1.8%，表明標(biāo)準(zhǔn)品及樣品溶液在8 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.2.2.4 樣品含量測(cè)定 精密量取2.2.1項(xiàng)下各梔子提取液1.0 mL，甲醇定容于25 mL量瓶，取適量溶液于EP管中，10 000 r/min離心30 min，取10 μL注入液相色譜儀測(cè)定峰面積，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中計(jì)算梔子苷含量，結(jié)果如表1所示。

2.2.3 干膏收率測(cè)定 取2.2.1項(xiàng)下制備的樣品溶液25 mL于已干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，水浴濃縮至干，置105℃烘箱中干燥3 h，取出，冷卻至室溫，稱重并計(jì)算干膏收率如表1所示。

表1 梔子常壓回流及減壓提取中梔子苷含量、干膏收率變化情況

2.2.4 薄層鑒別 參照中國(guó)藥典2005年版測(cè)定［4］。取梔子苷對(duì)照品制備為1 mg/mL的對(duì)照品溶液;取梔子對(duì)照藥材1 g，加50%甲醇超聲40 min，濾過(guò)，制成對(duì)照藥材溶液;取各提取樣品1 mL，加入1 mL甲醇，輕搖混勻制備為樣品溶液。以上溶液各點(diǎn)樣10 μL，以乙酸乙酯-丙酮-甲酸-水(5:5:1:1)為展開劑展開，取出晾干后噴10%硫酸乙醇為顯色劑，在相應(yīng)位置有相同的斑點(diǎn)。

3 結(jié)論與討論

3.1 結(jié)論 梔子苷含量方面:在真空度為0.07 MPa，提取溫度為60℃時(shí)梔子苷的提取效率最高，且較常壓回流提取含量相對(duì)提高10.4%。當(dāng)溫度高于60℃時(shí)梔子苷含量逐漸降低;在真空度過(guò)高、提取溫度過(guò)低時(shí)提取效率亦不理想，表明溫度對(duì)梔子苷的提取有一定影響，梔子提取有一最佳提取溫度。

干膏收率方面:減壓提取可不同程度降低干膏收率。在真空度為0.07 MPa，提取溫度為60℃時(shí)干膏收率與常壓回流提取比較，相對(duì)減少6.97%;且隨著真空度的降低及提取溫度的升高干膏收率依次增大。

薄層鑒別結(jié)果初步顯示:與常壓提取相比較，梔子減壓提取成分基本保持一致。

3.2 討論 隨著中藥新劑型不斷朝著精細(xì)小的方向發(fā)展，對(duì)中藥提取物的質(zhì)量要求也越來(lái)越高，但是中藥提取物，尤其是復(fù)方提取物往往存在體積大，黏性強(qiáng)，吸濕性強(qiáng)等特點(diǎn)，這些物理特性往往造成提取物貯存及制劑成型困難，解決以上問(wèn)題的方法在于(1)分離純化精制，即通過(guò)不斷地提純?nèi)コ裏o(wú)效成分，富集有效成分;(2)輔料法，即通過(guò)加入功能性輔料改善其不良性質(zhì)。以上兩種方法各有利弊。本文所述的減壓提取方法在不改變提取溶媒的條件下，較低溫度下可增大熱敏性有效成分的提取效率，降低導(dǎo)致提取物易吸濕、強(qiáng)黏性的大分子物質(zhì)的提取率(表現(xiàn)為干膏收率下降)，并且提取設(shè)備簡(jiǎn)易、操作簡(jiǎn)單方便、費(fèi)用低，特別適用于對(duì)熱不穩(wěn)定有效成分。減壓提取是中藥提取的一種新技術(shù)。

參考文獻(xiàn):

［1］陳曉東.中藥減壓提取法原理及突破點(diǎn)［J］.機(jī)電信息，2008，23:31-34。

［2］陳曉東.用于中藥提取的減壓提取裝置［J］.機(jī)電信息，2005，16:55-57.

［3］謝 靜，冷 靜.中藥梔子水提工藝研究［J］.中國(guó)藥業(yè)，2008，17(21):43.

［4］中國(guó)藥典［S］.一部.2005:173.