鼻炎通竅噴霧劑的提取工藝研究

蒲志強(qiáng)，周立，盛蓉，張勤修

(1.成都中醫(yī)藥大學(xué)，四川成都610075;2.成都中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，四川成都610072)

鼻炎通竅噴霧劑為我院開發(fā)的新醫(yī)院制劑，該方由薄荷、辛夷、麻黃、黃芩等中藥組成，具有通利鼻竅的功效，臨床用于鼻塞不通、流黃稠涕、急慢性鼻炎、副鼻竇炎。處方中薄荷、辛夷等主要含揮發(fā)性成分，采用水蒸氣蒸餾法［1］提取，以揮發(fā)油提取率為評(píng)價(jià)指標(biāo)，篩選芳香水提取工藝。方中麻黃、黃芩共為君藥，麻黃堿和黃芩苷分別為其主要有效成分，為保證制劑質(zhì)量及臨床療效，本實(shí)驗(yàn)以麻黃堿、黃芩苷含量及干膏率作為評(píng)價(jià)指標(biāo)，采用正交試驗(yàn)優(yōu)選水提工藝條件。

1 儀器與試藥

1.1 儀器HP-1100型高效液相色譜儀(美國(guó)惠普)，四元泵，DAD檢測(cè)器，HP化學(xué)工作站，AS10200超聲波清洗器(220 V，280 W)，電子分析天平BP211D(德國(guó)Sartorius)。

1.2 試藥鹽酸麻黃堿(0714-9903，中國(guó)藥品生物制品檢定所);黃芩苷(110715-200514，中國(guó)藥品生物制品檢定所);重蒸餾水，乙腈、甲醇均為色譜純，其余所有試劑均為分析純。

2 實(shí)驗(yàn)部分

2.1 芳香水提取工藝篩選按處方比例稱取薄荷、辛夷粗粉等，加10倍量水(補(bǔ)加藥材吸水量，吸水率為185%)，水蒸氣蒸餾提取8 h，每小時(shí)收集藥材1倍量芳香水，所得芳香水按照《中國(guó)藥典》2010版一部附錄XD揮發(fā)油測(cè)定法“甲法”測(cè)定其揮發(fā)油量，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 芳香水提取工藝篩選

結(jié)果表明，藥材提取6 h后其揮發(fā)油含量無(wú)明顯變化，揮發(fā)油提取率為89.3%，確定蒸餾提取時(shí)間為6 h;但芳香水量是藥材6倍，芳香水的收集量明顯過(guò)多，需重蒸餾以減少芳香水體積，將上述收集芳香水重蒸餾，每小時(shí)收集藥材1/10倍量芳香水，測(cè)定揮發(fā)油量，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 芳香水重蒸餾提取工藝篩選

結(jié)果表明，重蒸餾至5 h后，其芳香水中揮發(fā)油含量無(wú)明顯變化，考慮制劑總體積要求，確定芳香水收集量為提取藥材的1/2倍量。

根據(jù)上述實(shí)驗(yàn)，確定芳香水提取工藝為:薄荷、辛夷粗粉等水蒸氣蒸餾提取6 h，每小時(shí)收集藥材1倍量芳香水，將收集的芳香水重蒸餾，提取5 h，每小時(shí)收集藥材1/10倍量芳香水，共收集藥材1/2倍量的芳香水。

2.2 水提工藝的篩選

2.2.1 麻黃堿的測(cè)定［2］色譜條件色譜柱:迪馬柱Diamonsil-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm);流動(dòng)相:乙腈-0.1%磷酸(含0.1%的三乙胺)(3∶97);體積流量:1 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)210 nm，柱溫30℃;在選定色譜條件下，理論塔板數(shù)按鹽酸麻黃堿峰計(jì)算不低于3 000，分離度＞1.5，陰性無(wú)干擾。麻黃堿對(duì)照品、陰性、樣品色譜圖見(jiàn)圖1。

線性范圍的考察對(duì)照品溶液的制備:精密稱取鹽酸麻黃堿對(duì)照品3.28 mg，加0.1%的鹽酸甲醇制成每1 mL含鹽酸麻黃堿65.6 μg的溶液，搖勻，即得;精密吸取鹽酸麻黃堿對(duì)照品(0.065 6 mg/mL)溶液1、2、5、10、15 μL分別進(jìn)樣，按前述色譜條件測(cè)定峰面積，以峰面積(A)對(duì)進(jìn)樣量(C)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程A=1 604.9C+10.15，r=0.999 9，結(jié)果表明，進(jìn)樣量在0.065 6～0.984 μg范圍內(nèi)，鹽酸麻黃堿峰面積值與進(jìn)樣量呈良好的線性關(guān)系。

圖1 麻黃堿高效液相色譜圖

樣品測(cè)定供試品溶液的制備:精密量取2.2.5項(xiàng)下正交試驗(yàn)樣品液2 mL，置25 mL量瓶中，用0.1%的鹽酸甲醇稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45 μm)濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得;測(cè)定:分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。

2.2.2 黃芩苷的測(cè)定［3］色譜條件色譜柱:依利特Hypersil ODS2(150 mm×4.6 mm，5 μm);流動(dòng)相:甲醇-0.2%磷酸(42∶58);體積流量1 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)280 nm，柱溫25℃;在選定色譜條件下，理論塔板數(shù)按黃芩苷峰計(jì)算不低于2 500，分離度＞1.5，陰性無(wú)干擾。黃芩苷對(duì)照品、陰性、樣品色譜圖見(jiàn)圖2。

圖2 黃芩苷高效液相色譜圖

線性范圍的考察對(duì)照品溶液的制備:精密稱取黃芩苷對(duì)照品3.41 mg，加甲醇制成每1 mL含136.4 μg的溶液，搖勻，即得;精密吸取黃芩苷對(duì)照品(0.136 4 mg/mL)溶液1、2、5、10、15 μL分別進(jìn)樣，按前述色譜條件測(cè)定峰面積，以峰面積(A)對(duì)進(jìn)樣量(C)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程A=2 417C+10.285，r=0.999 9，結(jié)果表明，進(jìn)樣量在0.136 4～2.046 μg范圍內(nèi)，黃芩苷峰面積值與進(jìn)樣量呈良好的線性關(guān)系。

樣品測(cè)定供試品溶液的制備:精密量取2.2.5項(xiàng)下正交試驗(yàn)樣品液1 mL，置25 mL量瓶中，加70%乙醇稀釋至刻度，搖勻，精密量取1 m L置10 mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45 μm)濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得;測(cè)定:分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。

2.2.3 提取方法的篩選處方中麻黃和黃芩主要含有麻黃堿、黃芩苷，參考相關(guān)文獻(xiàn)［4］，并根據(jù)主要成分的理化性質(zhì)，采用水提法進(jìn)行提取，并采用正交試驗(yàn)對(duì)水提工藝進(jìn)行優(yōu)選。

2.2.4 因素水平的確定影響水提的主要因素有加水量(A)、煎煮次數(shù)(B)及煎煮時(shí)間(C)，根據(jù)預(yù)試確定因素水平范圍，因素水平設(shè)計(jì)見(jiàn)表3。

表3 因素水平表

2.2.5 正交試驗(yàn)正交試驗(yàn)樣品的制備:按處方比例稱取麻黃、黃芩藥材及薄荷、辛夷等藥渣，以黃芩苷、麻黃堿含量及干膏率作為評(píng)價(jià)指標(biāo)，按正交設(shè)計(jì)表L9(34)進(jìn)行正交試驗(yàn)，濾液濃縮并定容至100 mL。

2.2.6 正交試驗(yàn)結(jié)果正交試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表4，方差分析見(jiàn)表5。

表4 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)表及結(jié)果

表5 方差分析表

結(jié)果分析:由直觀分析可知，影響提取效果的因素順序?yàn)?煎煮次數(shù)＞加水量＞煎煮時(shí)間，以煎煮次數(shù)影響最大。經(jīng)方差分析，煎煮次數(shù)對(duì)提取效果有極顯著影響，加水量有顯著性影響，煎煮時(shí)間對(duì)提取無(wú)顯著影響，故確定提取工藝為A3B3C1，即加15倍水，煎煮3次，每次0.5 h。據(jù)此條件，驗(yàn)證3次。

2.2.7 驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表6。

表6 驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果(n=2)

結(jié)果表明，用優(yōu)選的工藝條件提取，測(cè)得的麻黃堿、黃芩苷含量及干膏率均較高，與正交試驗(yàn)結(jié)果相符，說(shuō)明該工藝條件穩(wěn)定可靠。

3 討論

3.1 芳香水提取工藝中，按照《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄XD揮發(fā)油測(cè)定法甲法，分別測(cè)定薄荷、辛夷等單味藥材及混合提取后揮發(fā)油量。結(jié)果單味藥材揮發(fā)油含量均符合藥典標(biāo)準(zhǔn);混合提取揮發(fā)油量為0.93%(mL/g)，并以此對(duì)芳香水提取工藝中揮發(fā)油提取率進(jìn)行評(píng)價(jià)。試驗(yàn)中，辛夷未粉碎揮發(fā)油測(cè)得量為1.0%(mL/g)，粉碎后揮發(fā)油測(cè)得量為2.0%(mL/g);與相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道［5］一致，辛夷粉碎與否對(duì)揮發(fā)油提取量影響很大，故辛夷應(yīng)粉碎成粗粉。

3.2 麻黃堿測(cè)定中，參考藥典及相關(guān)文獻(xiàn)［6-7］，分別對(duì)色譜柱［依利特Hypersil ODS2(150 mm×4.6 mm，5 μm);迪馬Diamonsil-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)］、流動(dòng)相［乙腈-0.1%磷酸(9∶87)，乙腈-0.02 mol/l磷酸二氫鉀(含0.2%三乙胺)(3∶97)，乙腈-0.1%磷酸(0.1%三乙胺)(3∶97)］、柱溫(25℃，30℃)、檢測(cè)波長(zhǎng)(207 nm、210 nm)等進(jìn)行了考察，結(jié)果在本文選定條件下，測(cè)定效果較好，對(duì)照品和樣品可達(dá)到基線分離，陰性無(wú)干擾。

3.3 黃芩苷測(cè)定中，主要對(duì)流動(dòng)相［甲醇-水-磷酸(47∶53∶0.2)、甲醇-水-磷酸(42∶58∶0.2)］進(jìn)行考察。

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