二氫槲皮素固體分散體片的制備及體外溶出度的研究

王秋紅，匡海學(xué)，吳倫，王知斌

(黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)北藥基礎(chǔ)與應(yīng)用研究省部共建重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，黑龍江省中藥及天然藥物藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，黑龍江哈爾濱150040)

二氫槲皮素(taxifolin)主要來源于松科落葉松屬落葉松Sibirica Ledeb.、金縷梅科蚊母樹Distylium racemosum等植物，屬黃酮類化合物。它具有超強(qiáng)的抗氧化能力，在維持人的循環(huán)系統(tǒng)正常功能方面起著特殊的作用，可以使人體免受心腦血管疾病的困擾［1］。以往由于生產(chǎn)技術(shù)的原因，二氫槲皮素的純度極低，進(jìn)而限制了它的廣泛使用?，F(xiàn)今，采用一種低溫提取技術(shù)，低成本地從落葉松中提取出二氫槲皮素，其純度可達(dá)到95%以上，從而使二氫槲皮素被開發(fā)制備成藥品并在臨床廣泛應(yīng)用成為可能。

固體分散體(solid dispersions)可將難溶性藥物以分子、膠體、無定形或微晶化狀態(tài)分散于水溶性載體中，可以增加藥物的溶解速度，提高藥物生物利用度。固體分散體中藥物的釋放、吸收與所選擇的載體以及載體的用量有很大的關(guān)系。載體的性質(zhì)和制備工藝在很大程度上決定了固體分散體的溶出速度和穩(wěn)定性［2］。

本實(shí)驗(yàn)采用固體分散技術(shù)制備了二氫槲皮素固體分散體。結(jié)果表明固體分散體可顯著提高二氫槲皮素在水中的溶出度，解決了二氫槲皮素在水中溶解度差，口服后生物利用度低的技術(shù)性難題。

1 材料

1.1 儀器LC-2010A高效液相色譜儀(日本島津公司);A-204電子分析天平(上海精密科學(xué)儀器有限公司);壓片機(jī)(上海友躍機(jī)械制造廠);RC-8DS溶出度測定儀(天津市光學(xué)儀器廠)

1.2 試藥二氫槲皮素(阿梅季斯有限責(zé)任公司);二氫槲皮素對照品(自制，經(jīng)HPLC測定，面積歸一化法計(jì)算純度達(dá)99.0%);聚乙烯吡咯烷酮(PVP-K30)(德國BASF公司);聚乙二醇(PEG-4000)、聚乙二醇(PEG-6000)(天津天泰精細(xì)化學(xué)品有限公司);無水乙醇(分析純)、羧甲基淀粉鈉、微晶纖維素、硬脂酸鎂(天津市恒興化學(xué)試劑制品有限公司)

2 方法與結(jié)果

2.1 二氫槲皮素溶出度測定方法的建立

2.1.1 最大吸收波長的確定用流動相配制二氫槲皮素溶液，用紫外分光光度計(jì)在200～400 nm的波長范圍內(nèi)進(jìn)行掃描，測定最大吸收波長。結(jié)果最大吸收波長為289 nm，且輔料沒干擾，故選擇289 nm為檢測波長。

2.1.2 色譜條件色譜柱:Dikma Technologies Diamonsil?(鉆石)C18(5 μm，250 mm×4.6 mm);流動相:V(甲醇)-(水)=40∶60(1%H3PO4);體積流量:1.0 mL/min;檢測波長:289 nm;柱溫:25℃。

圖1 二氫槲皮素高效液相色譜圖Fig.1 HPLC chromatograms of taxifolin

2.1.3 線性關(guān)系試驗(yàn)取二氫槲皮素對照品約50 mg，精密稱定，加流動相制成每1 mL含二氫槲皮素0.5 mg的溶液，作為對照品溶液。分別精密量取上述對照品溶液1.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0 mL于25 mL量瓶中，分別加入流動相稀釋至刻度。分別進(jìn)樣20 μL，按2.1.2項(xiàng)的色譜條件進(jìn)行測定。以峰面積對濃度進(jìn)行線性回歸，得標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果表明二氫槲皮素在0.020～0.20 μg/μL內(nèi)線性關(guān)系良好，線性回歸方程為:Y=96 919X－120.5，r=0.999 9。

2.1.4 精密度試驗(yàn)取同一份供試品溶液，進(jìn)樣20 μL，連續(xù)進(jìn)樣6次，按2.1.2項(xiàng)的色譜條件進(jìn)行測定，方法的精密度RSD為0.77%，精密度良好。2.1.5穩(wěn)定性試驗(yàn)取供試品溶液，分別于2、4、6、8、10 h分別進(jìn)樣20 μL，按2.1.2項(xiàng)的色譜條件進(jìn)行測定，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，供試品溶液在10 h內(nèi)是穩(wěn)定的。

2.2 固體分散體的制備

2.2.1 溶劑法精密稱取二氫槲皮素0.5 g(100目)，用無水乙醇400 mL溶解，再分別稱取4.5、3.0、1.5 g PVP-K30粉末(100目)，加入上述無水乙醇中，攪拌使之溶解。將此乙醇液置減壓干燥箱中干燥至干，取出，置干燥器中平衡24 h，粉碎過篩(100目)，得到二氫槲皮素PVP-K30(1∶9、1∶6、1∶3)固體分散體，于干燥器中備用［6-10］。

2.2.2 熔融法精密稱取0.5 g二氫槲皮素(100目)與4.5、3.0、1.5 g PEG-4000或PEG-6000共溶于100℃水浴上，攪拌均勻(1 h)，迅速放置于－20℃冰柜中冷卻4 h，取出放置干燥器中平衡24 h，粉碎過篩(100目)，得二氫槲皮素PEG-4000和PEG-6000(1∶9、1∶6、1∶3)固體分散體，于干燥器中備用［11］。

2.3 固體分散體溶出度實(shí)驗(yàn)以水為溶出介質(zhì)，取各處方固體分散體適量(相當(dāng)于主藥20 mg)，照《中華人民共和國藥典》2010年版二部附錄XC第一法，以250 mL水為溶出介質(zhì)，在37℃、100 r/min條件下，分別于10、20、30、40、50、60 min取樣2 mL(同時補(bǔ)充同溫等量介質(zhì))，經(jīng)0.45 μm濾膜過濾，取溶液1 mL，用純化水定容于10 mL的量瓶中，進(jìn)行HPLC測定［12-13］。測定結(jié)果代入標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算質(zhì)量濃度，并換算成累積溶出率。

2.3.1 PVP-K30、PEG-4000、PEG-6000為載體的溶出度以3種載體的固體分散體［m(二氫槲皮素)∶m(載體)=1∶3、1∶6、1∶9］溶出情況如圖2～4所示:二氫槲皮素從固體分散體中的溶出速率和程度明顯隨著載體比例增大，溶出速度加快。當(dāng)m(二氫槲皮素)∶m(載體)=1∶9時，1 h內(nèi)二氫槲皮素在介質(zhì)中的累積溶出量達(dá)到70%以上，其中以PVP-K30為載體的固體分散體累計(jì)溶出量能達(dá)到90%以上。

圖2 PVP-K30為載體的固體分散體累積溶出度曲線Fig.2 The accumulated dissolution curve of solid dispersion carried with PVP-K30

圖3 PEG-4000為載體的固體分散體累積溶出度曲線Fig.3 The accumulated dissolution curve of solid dispersion carried with PEG-4000

圖4 PEG-6000為載體的固體分散體累積溶出度曲線Fig.4 The accumulated dissolution curve of solid dispersion carried with PEG-6000

2.3.2 PVP-K30為載體的溶出度比較以二氫槲皮素及PVP-K30為載體的物理混合物［m(二氫槲皮素)∶m(PVP)=1∶6］、固體分散體［m(二氫槲皮素)∶m(PVP)=1∶6］和二氫槲皮素原料的溶出情況如圖5所示:二氫槲皮素從固體分散體中的溶出速率和程度明顯大于其物理混合物和二氫槲皮素原料。可以看出固體分散體的溶出效果較好，物理混合物次之，二氫槲皮素原料的溶出效果較差，這說明固體分散體起到了提高二氫槲皮素體外溶出度的作用。

圖5 二氫槲皮素、物理混合物和固體分散體累積溶出度曲線Fig.5 The accumulated dissolution curve of taxifolin physical mixtures and solid dispersions

2.4 片劑的制備精密稱取二氫槲皮素20 g，用無水乙醇溶解，再分別稱聚乙烯吡咯烷酮(PVP-K30)120 g粉末，加入上述無水乙醇中，攪拌使之溶解。將此乙醇液置減壓干燥箱中干燥至干，取出，置干燥器中平衡24 h，粉碎過篩(100目)，得到二氫槲皮素PVP-K30(1∶6)固體分散體，于干燥器中備用。取二氫槲皮素固體分散體140 g、微晶纖維素50 g、羧甲基淀粉鈉8 g，硬脂酸鎂2 g等輔料分別過100目篩，將二氫槲皮素固體分散體、微晶纖維素、羧甲基淀粉鈉混勻，加硬脂酸鎂適量，采用粉末直接壓片法壓制1 000片，片質(zhì)量0.2 g，每片含二氫槲皮素20 mg。

2.5 二氫槲皮素固體分散片溶出度測定按照中國藥典2010版溶出度測定第一法-轉(zhuǎn)籃法。溶出介質(zhì)為水250 mL，溫度為(37±0.5)℃，轉(zhuǎn)速(100±1)r/min。取二氫槲皮素固體分散片6片分別投放于溶出杯中，于45 min取樣2 mL，過濾，取續(xù)濾液1 mL，用純水定容于10 mL的量瓶中，采用高效液相色譜法測定峰面積，外標(biāo)法計(jì)算［3］。結(jié)果見表1。結(jié)果表明:二氫槲皮素固體分散體片45 min時的溶出度的平均值為86.8%。

表1 二氫槲皮素固體分散體片溶出度Tab.1 The dissolution of solid dispersion tablets of taxifolin

4 討論

4.1 處方前研究表明，二氫槲皮素水溶性差，大鼠口服吸收效果不好，但在水中穩(wěn)定性較好。所以采用固體分散體技術(shù)增加其溶解度及溶出速度，以達(dá)到提高二氫槲皮素口服生物利用度的目的［4］。本試驗(yàn)將藥物先制成固體分散體，再壓制成片，增加了二氫槲皮素固體分散體片的體外溶出度。

4.2 PVP-K30為載體的固體分散體的作用機(jī)制討論:PVP-K30的熔點(diǎn)較高，能溶于水及多種有機(jī)溶劑，故宜用溶劑法制備固體分散體，而不用熔融法制備［5］。PVP-K30在溶液中呈網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，在與藥物共蒸發(fā)溶劑時，由于氫鍵作用(藥物分子沿著PVP-鏈，以氫鍵形式與PVP-相結(jié)合)或絡(luò)合作用及黏度不斷增大從而抑制藥物晶核的形成及成長，使藥物形成具有較高能量的非結(jié)晶型無定性物，增加了藥物在溶出介質(zhì)中的釋放速率。

4.3 我們制3批固體分散體溶出度重現(xiàn)性良好，說明該制備工藝穩(wěn)定可靠。

4.4 本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用固體分散技術(shù)解決了二氫槲皮素在水中溶解度差，生物利用度低的技術(shù)性難題，針對今后溶解性差的天然藥物成分開發(fā)成新藥具有一定的理論和實(shí)踐指導(dǎo)意義。

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