正交試驗法優(yōu)選棗仁安神膠囊提取工藝

禹琦

（婁底市中心醫(yī)院藥劑科，湖南婁底 417000）

正交試驗法優(yōu)選棗仁安神膠囊提取工藝

禹琦

（婁底市中心醫(yī)院藥劑科，湖南婁底 417000）

目的：優(yōu)選棗仁安神膠囊提取的最佳工藝條件。方法：以浸膏中酸棗仁皂苷A和B的含量為指標，用高效液相色譜測定，采用L9（34）正交試驗優(yōu)選提取工藝。結(jié)果：最佳工藝條件為8倍量水，煎煮3次，每次1.5 h。結(jié)論：優(yōu)選的棗仁安神膠囊提取工藝穩(wěn)定、可行，提取率高。

正交試驗；棗仁安神膠囊；酸棗仁皂苷A；酸棗仁皂苷B

酸棗仁膠囊是由酸棗仁、丹參、五味子（醋炙）組成，具有養(yǎng)心安神、鎮(zhèn)靜催眠之功效，用于失眠、頭昏、健忘等的治療。酸棗仁為方中君藥，其中酸棗仁皂苷A和酸棗仁皂苷B為酸棗仁鎮(zhèn)靜催眠的主要成分[1]。筆者參照文獻[2-7]，以出膏率、酸棗仁皂苷A、酸棗仁皂苷B為指標，采用正交試驗法對酸棗仁等藥材的煎煮工藝進行優(yōu)選，以期獲得最佳工藝條件。

1 儀器與試藥

島津LC-10A高效液相色譜儀和Alltech 2000蒸發(fā)光散射檢測器；甲醇為色譜純，其他試劑均為分析純；酸棗仁皂苷A和B對照品 （中國藥品生物制品檢定所，批號：110734-200509、110814-200607，供含量測定用）。

2 方法與結(jié)果

2.1 水煎煮組正交試驗設(shè)計

采用正交試驗法對酸棗仁、丹參和五味子水提工藝進行優(yōu)選。以提取次數(shù)（A）、提取時間（B）、加水量（C）為試驗因素，各3個水平，以出膏率和酸棗仁皂苷A和B含量作為考察指標進行試驗。因素水平見表1。

表1 提取因素水平表Tab.1 Factors and levels tablet of extraction

2.2 出膏率的計算

分別按處方量稱取藥材適量，用水浸泡0.5 h，大火煮沸后，分別按照正交試驗表中的時間以文火煎煮，過濾，合并水煎液，濃縮，置干燥恒重的蒸發(fā)皿中，并置于50℃干燥箱內(nèi)至完全干燥，取出，置于干燥器內(nèi)放冷并稱重，計算出膏率。

2.3 浸膏中酸棗仁皂苷A和B含量測定

2.3.1 色譜條件 Agilent zorbax C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）色譜柱；柱溫：25℃；流動相：甲醇-水-冰醋酸（70∶28∶2），流速：1.0 ml/min，飄移管溫度：105℃，氣體流速：1.2 L/min，進樣量：10 μl。

2.3.2 對照品溶液制備 分別精密稱取酸棗仁皂苷A和B對照品適量，加甲醇溶液分別配制成濃度為2.10 mg/ml的酸棗仁皂苷A溶液和濃度為2.24 mg/ml的酸棗仁皂苷B溶液，作為對照品溶液。

2.3.3 供試品溶液制備 取本品內(nèi)容物5 g，精密稱定，加甲醇回流提取2次，每次加甲醇25 ml，回流1 h，濾過，合并濾液，蒸干，殘渣加水30 ml溶劑，轉(zhuǎn)入分液漏斗中，加水飽和的正丁醇溶液振搖提取3次，每次30 ml，合并正丁醇溶液，用正丁醇飽和的水洗滌2次，每次50 ml，分取正丁醇溶液，蒸干，殘渣加甲醇溶液使溶解，轉(zhuǎn)入10 ml量瓶中，加甲醇溶液至刻度，搖勻，濾過，棄去初濾液，取續(xù)濾液，即得。

2.3.4 線性關(guān)系考察 精密吸取酸棗仁皂苷A和B對照品溶液（酸棗仁皂苷A濃度為6.14 mg/ml、酸棗仁皂苷B濃度為6.56 mg/ml）0.3、0.5、1.0、2.0、3.0 ml，分別置5 ml量瓶中，加甲醇溶液稀釋至刻度，按上述色譜條件進行分析，測定其色譜峰面積，以色譜峰面積A為縱坐標，含量C（μg/ml）為橫坐標繪制標準曲線，計算得回歸方程為酸棗仁皂苷A：Y= 21 851.2X-415.2（r=0.999 7），酸棗仁皂苷B：Y=19 251.2X-145.2（r=0.999 8），結(jié)果表明酸棗仁皂苷A濃度在0.368～ 3.680 mg/ml、酸棗仁皂苷B在0.394～3.936 mg/ml范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.3.5 含量測定 分別精密吸取對照品、供試品溶液各10 μl，注入液相色譜儀，按“2.3.1”項下色譜條件測定，計算含量。

2.4 水煎煮組最佳工藝確定

對正交試驗結(jié)果進行極差和方差分析，結(jié)果見表2、3。

表2 L9（34）正交試驗結(jié)果Tab.2 Result of L9(34)orthogonal test

綜合評分=（出膏率/最大出膏率）×100×0.2+（酸棗仁皂苷A含量/酸棗仁皂苷A最高含量）×100×0.4+（酸棗仁皂苷B含量/酸棗仁皂苷B最高含量）×100×0.4。

表3 正交試驗方差分析Tab.3 Variance analysis of orthogonal test

由表2可知，3個因素的極差大小順序為A＞B＞C，提取次數(shù)對提取工藝的影響最大，其次為提取時間，加水量影響最小。

由表3可知，因素A對本方的提取有顯著性影響，因素B、C無顯著性影響，故確定最佳提取工藝為A3B1C1，即用8倍量水，提取3次，每次1.5 h。

2.5 驗證實驗

按優(yōu)選的最佳工藝提取3批樣品，進行驗證實驗，得3批樣品出膏率分別為24.14%、23.09%、24.47%，酸棗仁皂苷A含量分別為241.56、244.15、234.12 μg/g，酸棗仁皂苷B含量分別為210.45、214.58、208.66 μg/g，驗證結(jié)果表明工藝基本穩(wěn)定可行。

3 討論

酸棗仁為方中君藥，其中酸棗仁皂苷A、B為酸棗仁鎮(zhèn)靜催眠的主要成分，且易溶于水。水煎煮法能提取出較多的成分，且符合中醫(yī)傳統(tǒng)用藥習(xí)慣，溶劑價廉、易得，結(jié)合實際生產(chǎn)中能耗、成本、安全性等因素考慮，確定水為提取溶劑。

正交試驗結(jié)果所得的最佳工藝條件為A3B1C3，但其生產(chǎn)成本較高、生產(chǎn)周期較長，不符合生產(chǎn)實際，所以此工藝缺乏合理性。故選取了較符合生產(chǎn)實際的A3B1C1組合，并進行了工藝驗證實驗。結(jié)果表明，A3B1C1組合的浸膏得率和酸棗仁皂苷A、B提取率較高、穩(wěn)定性較好，故選擇A3B1C1，在提高提取率、保證療效的同時達到了節(jié)約成本、縮短生產(chǎn)周期、經(jīng)濟效益的目的。

[1]王浴生,鄧文龍.中藥藥理與應(yīng)用 [M].2版.北京:人民衛(wèi)生出版社,2000: 1208.

[2]王瑞,畢開順.正交試驗法優(yōu)選解毒宣透湯提取工藝[J].沈陽藥科大學(xué)學(xué)報,2002,19(4):284-286.

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[4]張淑玲,沙玫,陸軍,等.正交試驗法優(yōu)選和丹舒膠囊提取工藝[J].廣東藥學(xué)院學(xué)報,2010,26(1):41-44.

[5]姚椹婷,張麗,李媛,等.正交試驗優(yōu)選復(fù)方JTL膠囊的煎煮提取工藝[J].中國實用醫(yī)藥,2010,5(4):23-24.

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Study on optimizing the decocting extraction for Zaoren Anshen Capsules by orthogonal design method

YU Qi
(Department of Pharmacy,the Central Hospital of Loudi City,Hu'nan Province,Loudi417000,China)

Objective:To study on optimizing decocting extraction for Zaoren Anshen Capsules by orthogonal design method.Methods:Optimized the decocting extraction with L9(34)orthogonal test,the yields of extracts,the content of the Jujubaside A and Jujubaside B were used as evaluating criteria.They was determined by HPLC.Results:The optimal condition was 8 folds amount of water,3 times,1.5 hours each time.Conclusion:The optimized extractive technology is stable and efficient with high yields.

Orthogonal test;Zaoren Anshen Capsules;Jujubaside A;Jujubaside B

R284.2

A

1673-7210（2011）02（b）-047-02

2010-11-12）