蘭索拉唑在胃潰瘍患者及健康人體內(nèi)的藥動學(xué)研究Δ

潘桂玲，韓 強，張永文

（徐州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院藥劑科，徐州市 221002）

蘭索拉唑在胃潰瘍患者及健康人體內(nèi)的藥動學(xué)研究Δ

潘桂玲＊，韓 強#，張永文

（徐州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院藥劑科，徐州市 221002）

目的：比較蘭索拉唑在胃潰瘍患者及健康人體內(nèi)藥動學(xué)行為的差異。方法：12名男性受試者（健康者和胃潰瘍患者各6名），靜脈滴注300mg·L－1蘭索拉唑注射液250mL后于不同時間點取血并分離血漿，采用高效液相色譜-二極管陣列檢測器（HPLC-DAD）法檢測血漿中蘭索拉唑的濃度，以DAS2.0軟件計算藥動學(xué)參數(shù)。結(jié)果：健康者與胃潰瘍患者靜脈給予蘭索拉唑后，人體內(nèi)藥動學(xué)參數(shù)分別為：t1/2（2.369±1.51）、（2.835±0.99）h，tmax（0.332±0.09）、（0.277±0.05）h，CL（19.882±8.19）、（14.460±7.79）L·h－1，cmax（1092.09±169.69）、（910.76±69.91）ng·mL－1，AUC0～6.5（1475.98±590.23）、（2278.73±567.92）ng·h·mL－1，MRT0～6.5（1.633±0.44）、（1.833±0.42）h。結(jié)論：蘭索拉唑在胃潰瘍患者體內(nèi)的藥動學(xué)過程較健康者發(fā)生了顯著變化。

蘭索拉唑；胃潰瘍；體內(nèi)；藥動學(xué)

蘭索拉唑（Lansoprazole）系繼奧美拉唑（Omeprazole）之后由武田公司開發(fā)的全球第2個質(zhì)子泵抑制劑類抗?jié)兯嶽1]，對基礎(chǔ)胃酸和所有刺激物所致的胃酸分泌均有明顯的抑制作用，其抑制作用明顯優(yōu)于H2受體阻滯藥[2]。單用蘭索拉唑?qū)τ拈T螺桿菌雖無根除作用，但與抗生素聯(lián)合應(yīng)用可明顯提高幽門螺桿菌的根除率[3～5]。雖有報道蘭索拉唑高效液相色譜（HPLC）測定方法及其在健康人體內(nèi)藥動學(xué)的研究[6～8]，但尚未見在胃潰瘍患者體內(nèi)的研究。本試驗對蘭索拉唑在胃潰瘍患者及健康人體內(nèi)藥動學(xué)進行研究，并采用HPLC法測定蘭索拉唑在人體內(nèi)的血藥濃度，采用DAS軟件擬合了蘭索拉唑在胃潰瘍和正常人體內(nèi)的藥動學(xué)參數(shù)，為蘭索拉唑在臨床上正確使用提供了依據(jù)。

1 材料

1.1 儀器

Shimadzu LC-10A高效液相色譜儀，包括SCL-10Avp系統(tǒng)控制器、SPD-M20A二極管陣列檢測器、LC-10ADvp兩元泵、SIL-20A自動進樣器、FCV-10Alvp四元低壓梯度洗脫系統(tǒng)、DGU-20As在線脫氣機、Lcsolution色譜數(shù)據(jù)工作站（日本島津公司）；AE240電子天平（十萬分之一，瑞士Mettler Toledo公司）；5417R臺式高速冷凍離心機（德國Eppendorf公司）；Di-rect-QTMS超純水機（美國Millipore公司）。

1.2 試藥

注射用蘭索拉唑（江蘇奧賽康藥業(yè)有限公司，批號：090510，規(guī)格：30mg）；蘭索拉唑?qū)φ掌罚〒P州市三藥制藥有限公司，批號：20080605，純度：99.5%）；內(nèi)標(biāo)：奧美拉唑?qū)φ掌罚ńK奧賽康藥業(yè)有限公司，批號：YE0908005，純度：99.5%）；甲醇為色譜純，乙腈、無水碳酸鈉（Na2CO3）均為分析純，水為三次蒸餾水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Kromasil C18（150mm×4.6mm，5μm）；流動相：甲醇-水（54∶46）；流速：1.0mL·min－1；柱溫：35℃；檢測波長：284nm。

2.2 受試者選擇

12名男性受試者（6名健康者、6名胃潰瘍患者），體重55～70kg，年齡23～35歲。經(jīng)體檢證明肝腎功能正常，心電圖正常。試驗前2周及試驗期間未服用其他任何藥物。所有受試者均簽署知情同意書，且本試驗方案經(jīng)本院醫(yī)學(xué)倫理委員會審批通過。

2.3 試驗方案

將胃潰瘍組及健康組男性，靜脈滴注300mg·L－1蘭索拉唑注射液250mL，于給藥后0、0.083、0.17、0.25、0.33、0.5（滴注結(jié)束）、0.75、1、1.25、1.5、2、2.5、3.5、4.5、6.6h時各采集血2mL于肝素化試管中，置低速離心機內(nèi)，在3000r·min－1、15min條件下分離出血漿，－20℃冷凍保存待測。

2.4 試驗溶液的制備

2.4.1 蘭索拉唑注射液。取0.9%氯化鈉注射液250mL，加入注射用拉索拉唑75mg，配置成濃度為300mg·L－1的蘭索拉唑注射液。

2.4.2 蘭索拉唑?qū)φ掌啡芤?。?zhǔn)確稱取蘭索拉唑?qū)φ掌?mg，用甲醇溶解并定容至5mL，臨用前用甲醇稀釋成為50、100、200、500、1000、1600、2000ng·mL－1的系列對照品溶液，置4℃避光保存。

2.4.3 內(nèi)標(biāo)溶液。準(zhǔn)確稱取奧美拉唑?qū)φ掌?mg，用甲醇溶解并定容至100mL，即得濃度為10000ng·mL－1的奧美拉唑內(nèi)標(biāo)溶液，置4℃避光保存。

2.4.4 NaCO3溶液：稱取無水NaCO3固體約1g，置于100mL容量瓶內(nèi)，加入超純水至刻度，搖勻，即得濃度約為0.1mol·L－1的NaCO3溶液。

2.5 血漿樣品處理

取血漿0.5mL，加入內(nèi)標(biāo)溶液（10000ng·mL－1奧美拉唑）50μL，渦旋35s混勻。加入NaCO3溶液200μL，渦旋30s，再加入乙腈2mL，渦旋2min，于3000r·min－1離心15min，棄去蛋白沉淀層，取上清液，45℃水浴N2流吹干。殘渣用流動相200μL溶解，渦旋2min，于14000r·min－1離心10min，取上清液20μL進樣分析。

2.6 數(shù)據(jù)處理

藥動學(xué)參數(shù)的估算按中國藥理學(xué)會推薦的藥動學(xué)程序“DAS2.0”對藥-時數(shù)據(jù)進行自動擬合，根據(jù)赤池信息準(zhǔn)則（AIC）進行房室模型判別，參數(shù)AUC0～t、AUC0～∞，t1/2，MRT0～t、MRT0～∞、tmax、CL、V、cmax等分別作方差分析及雙側(cè)t檢驗。

2.7 方法學(xué)考察

2.7.1 線性關(guān)系考察及定量下限。精密量取不同濃度的蘭索拉唑?qū)φ掌啡芤?0μL，加入空白血漿0.45mL，制備成50、100、200、500、1000、2000ng·mL－1的系統(tǒng)標(biāo)準(zhǔn)血漿及100、500、1600ng·mL－1的質(zhì)控血漿。按“2.5”項下自“加入內(nèi)標(biāo)溶液（10000ng·mL－1奧美拉唑）50μL”起操作，每種濃度做3份樣品，記錄色譜圖及蘭索拉唑峰面積（As）及內(nèi)標(biāo)奧美拉唑峰面積（Ar）。以蘭索拉唑?qū)W美拉唑峰面積比值（As/Ar，Y）的平均值對蘭索拉唑血藥濃度（c）作線性回歸，得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程：Y＝0.0016c+0.0181。結(jié)果表明，蘭索拉唑血藥濃度在50～2000ng·mL－1范圍內(nèi)，其峰面積與內(nèi)標(biāo)奧美拉唑峰面積的比值和蘭索拉唑濃度之間呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系（r＝0.9994）。定量下限為50ng·mL－1（n＝5，RSD＝3.35%，RE＝4.26%）。

2.7.2 專屬性考察。在本試驗所采用的色譜條件下，蘭索拉唑出峰時間在7.0min左右，奧美拉唑出峰時間在9.5min左右。蘭索拉唑峰形良好，無雜峰干擾測定，基線平穩(wěn)。表明本方法具有較高的專屬性，能準(zhǔn)確測定血漿中的蘭索拉唑的濃度，靈敏度較高。色譜圖見圖1。

圖1 高效液相色譜圖A.空白血漿；B.空白血漿+5000ng·mL－1蘭索拉唑；C.空白血漿+1000ng·mL－1蘭索拉唑+內(nèi)標(biāo)（10000ng·mL－1奧美拉唑）溶液；D.某健康受試者靜脈滴注蘭索拉唑30mg 0.33h后的血漿樣品+內(nèi)標(biāo)溶液；1.蘭索拉唑；2.奧美拉唑Fig1 HPLC chromatogramsA.blank plasma；B.blank plasma+5000ng·mL－1lansoprazole；C.blank plasma+1000ng·mL－1lansoprazole+internal standard（10000ng·mL－1omeprazole solution）；D.plasma sample in healthy volunteer A 0.33h after intravenous injection of lansoprazole 30mg+internal standard；1.lansoprazole；2.omeprazole

2.7.3 回收率試驗。精密量取不同濃度的蘭索拉唑?qū)φ掌啡芤?0μL，加入內(nèi)標(biāo)溶液50μL，再加入流動相100μL，渦旋混勻，配成含蘭索拉唑濃度分別為50、100、1600ng·mL－1的溶液，每種濃度各做2份樣品，精密吸取20μL上清液進樣分析。記錄色譜圖，測定蘭索拉唑與內(nèi)標(biāo)奧美拉唑的色譜峰面積（As與Ar）。精密量取不同濃度的蘭索拉唑?qū)φ掌啡芤?0μL，加入空白血漿0.45mL，配成含蘭索拉唑濃度分別為50、100、1600ng·mL－1的血漿對照品溶液，每種濃度各做2份樣品，每份按“2.5”項下自“加入內(nèi)標(biāo)溶液（10000ng·mL－1奧美拉唑）50μL”起操作，記錄色譜圖，測定蘭索拉唑與內(nèi)標(biāo)奧美拉唑的色譜峰面積（As1與Ar1）。對上述As1、Ar1與As、Ar按As1/As×100%計算，即為蘭索拉唑的絕對回收率，結(jié)果蘭索拉唑高、中、低濃度回收率均≥70%。另將“絕對回收率試驗”中得到的As1、Ar1代入標(biāo)準(zhǔn)曲線方程，按測得濃度/標(biāo)示濃度×100%計算濃度，即得各濃度血漿樣品測定方法的相對回收率，結(jié)果蘭索拉唑高、中、低濃度相對回收率均≥80%?；厥章试囼灲Y(jié)果見表1。

2.7.4 精密度試驗。精密量取不同濃度的蘭索拉唑?qū)φ掌啡芤?0μL，加入空白血漿0.45mL，制備成含蘭索拉唑50、100、1600ng·mL－1的血漿樣品。按“2.5”項下自“加入內(nèi)標(biāo)溶液（10000ng·mL－1奧美拉唑）50μL”起操作，在日內(nèi)和日間（連續(xù)3d）對每種濃度各做5份樣品并測定，記錄色譜圖，得蘭索拉唑峰面積（As）對奧美拉唑峰面積（Ar），用標(biāo)準(zhǔn)曲線計算蘭索拉唑的濃度。求得日內(nèi)和日間RSD，結(jié)果見表1。

表1 回收率及精密度試驗結(jié)果（±s/ng·mL－1）Tab1 Results of recovery and precision test（s±s/ng·mL－1）

表1 回收率及精密度試驗結(jié)果（±s/ng·mL－1）Tab1 Results of recovery and precision test（s±s/ng·mL－1）

2.7.5 穩(wěn)定性考察。（1）血漿樣品處理后室溫放置穩(wěn)定性：精密量取蘭索拉唑?qū)φ掌啡芤?0μL，加入空白血漿0.45mL，制備成100、500、1600ng·mL－1的血漿各2份，按“2.5”項下自“加入內(nèi)標(biāo)溶液（10000ng·mL－1奧美拉唑）50μL”起至“于14000r·min－1離心10min”止操作后，每2份一組在室溫下分別放置0、12、24h。取上清液20μL進樣分析。結(jié)果表明，按試驗方法處理后蘭索拉唑血漿樣品在室溫下是穩(wěn)定的。（2）血漿樣品凍存穩(wěn)定性：精密量取蘭索拉唑?qū)φ杖芤?0μL，加入空白血漿0.45mL，制備成100、500、1600ng·mL－1的血漿各6份，每2份一組在－20℃下分別放置0、15、30d后按“2.5”項下“加入內(nèi)標(biāo)溶液（10000ng·mL－1奧美拉唑）50μL”起操作。結(jié)果表明，血漿中蘭索拉唑在－20℃下凍存30d是穩(wěn)定的。（3）血漿樣品凍融穩(wěn)定性：精密量取蘭索拉唑?qū)φ杖芤?0μL，加入空白血漿0.45mL，制備成100、500、1600ng·mL－1的血漿各6份，每2份一組在－20℃下反復(fù)凍融，3d內(nèi)測定3次，按“2.5”項下“加入內(nèi)標(biāo)溶液（10000ng·mL－1奧美拉唑）50μL”起操作。結(jié)果表明，血漿中蘭索拉唑在－20℃下反復(fù)凍融是穩(wěn)定的。血漿中蘭索拉唑的穩(wěn)定性考察結(jié)果見表2。

表2 血漿中蘭索拉唑的穩(wěn)定性考察結(jié)果（n＝2）Tab2 Results of stability test of lansoprazole in plasma（n＝2）

2.8 蘭索拉唑在胃潰瘍患者及健康人體內(nèi)的藥動學(xué)研究

將蘭索拉唑注射液（300mg·L－1）250mL經(jīng)靜脈滴注于胃潰瘍患者及健康人體內(nèi)，按“2.3”項下采血方案進行試驗，血漿樣本處理方法按“2.5”項下進行，血藥濃度按照“2.7.1”項下標(biāo)準(zhǔn)曲線進行計算，結(jié)果見表3；蘭索拉唑平均藥-時曲線見圖2。根據(jù)AIC進行房室模型判別，結(jié)果表明蘭索拉唑在胃潰瘍患者及健康人體內(nèi)藥動學(xué)行為均符合二房室模型，故采用DAS2.0軟件按二房室模型進行擬合，求得胃潰瘍患者及健康人靜脈滴注蘭索拉唑后的主要藥動學(xué)參數(shù)，結(jié)果見表4。

由表4可見，分析時間內(nèi)蘭索拉唑在胃潰瘍患者體內(nèi)AUC明顯升高（P＜0.05），蘭索拉唑在胃潰瘍患者體內(nèi)平均滯留時間延長、代謝速度減慢、血漿清除減慢（MRT0～t、t1/2、tmax、CL及cmax和健康組比較P均＜0.05），提示胃潰瘍病理狀態(tài)影響蘭索拉唑的藥動學(xué)行為。

3 討論

本試驗發(fā)現(xiàn)，蘭索拉唑在胃潰瘍患者體內(nèi)過程發(fā)生了顯著變化，其體內(nèi)AUC0～6.5明顯增加、體內(nèi)平均滯留時間顯著延長、達峰時間提前、血漿消除半衰期顯著增大、血漿清除率顯著減小，推測可能是在胃潰瘍病理狀態(tài)下體內(nèi)肝藥酶體系發(fā)生了改變，導(dǎo)致蘭索拉唑代謝減慢，需進一步研究闡述。

本試驗使用HPLC法測定蘭索拉唑人體血漿藥物濃度，分析方法的靈敏度、選擇性、精密度和定量分析線性關(guān)系均良好，符合生物樣品分析測定要求。應(yīng)用本試驗所使用的分離、檢測方法測定胃潰瘍患者和健康人靜脈滴注蘭索拉唑后的血藥濃度，計算其主要藥動學(xué)參數(shù)，闡明了蘭索拉唑在體內(nèi)的經(jīng)時過程，進行了蘭索拉唑在胃潰瘍患者和健康人體內(nèi)藥動學(xué)研究，為臨床藥物濃度監(jiān)測和藥物正確使用提供了試驗依據(jù)，從而提高了用藥安全性。

表3 胃潰瘍患者及健康人靜脈滴注蘭索拉唑后不同時間點血漿中的藥物濃度（n＝6）Tab3 Plasma concentration at different time of lansoprazole in gastric ulcer patients and healthy volunteers with intravenous administration（n＝6）

圖2 胃潰瘍患者及健康人靜脈滴注蘭索拉唑后平均藥-時曲線Fig2 Mean plasma concentration-time curves of lansoprazole in gastric ulcer patients and healthy volunteers with intravenous administration

表4 胃潰瘍患者及健康人靜脈滴注蘭索拉唑后藥動學(xué)參數(shù)（±s ，n＝6）Tab4 Pharmacokinetic parameters of lansoprazole in gastric ulcer patients and healthy volunteers with intravenous administratio（n±s ，n＝6）

表4 胃潰瘍患者及健康人靜脈滴注蘭索拉唑后藥動學(xué)參數(shù)（±s ，n＝6）Tab4 Pharmacokinetic parameters of lansoprazole in gastric ulcer patients and healthy volunteers with intravenous administratio（n±s ，n＝6）

參數(shù)t1/2/h tmax/h CL/L·h-1 V/L cmax/ng·mL-1 AUC0～6.5/ng·h·mL-1 AUC0～∞/ng·h·mL-1 MRT0～6.5/h MRT0～∞/h健康人2.369±1.510.332±0.0919.882±8.1937.339±7.711092.09±169.691475.98±590.231733.24±768.011.633±0.442.383±1.35胃潰瘍患者2.835±0.990.277±0.0514.460±7.7943.339±7.71910.76±69.912278.73±567.922781.03±687.801.833±0.422.843±1.67

[1]Dugger HA，Carlson JD，Henderson W，et al.Quamruzaman.Bioequivalence evaluation of lansoprazole 30-mg capsules in healthy volunteers[J].Eur J Pharm Biopharm，2001，51（2）：153.

[2] Baietto L，D'Avolio A，De Rosa FG，et al.Development and validation of a simultaneous extraction procedure for HPLC-MS quantification of daptomycin，amikacin，gentamicin，and rifampicin in human plasma[J].Anal Bioanal Chem，2010，396（2）：791.

[3] Miura M，Tada H，Suzuki T.Simultaneous determination of lansoprazole enantiomers and their metabolites in plasma by liquid chromatography with solid-phase extraction[J].J Chromatogr B，2004，804（5）：389.

[4] 趙 旭，霍艷雙，畢開順，等.蘭索拉唑片的人體藥動學(xué)和生物等效性研究[J].中國現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)雜志，2009，26（9）：742.

[5] Mainz D，Borner K，Koeppe P，et al.Pharmacokinetics of lansoprazole，amoxicillin and clarithromycin after simultaneous and single administration[J].J Antimicrob Chemother，2002，50（5）：699.

[6] Bharathi DV，Hotha KK，Jagadeesh B，et al.Simultaneous estimation of four proton pump inhibitors-lansoprazole，omeprazole，pantoprazole and rabeprazole：development of a novel generic HPLC-UV method and its application to clinical pharmacokinetic study[J].Biomed Chromatogr，2009，23（9）：732.

[7] 浦錫娟，何 峰.HPLC法測定注射用蘭索拉唑中主藥及有關(guān)物質(zhì)的含量[J].中國藥房，2007，18（13）：1013.

[8] 鄭志昌，徐春麗.反相高效液相色譜法同時測定血漿中奧美拉唑和蘭索拉唑[J].貴陽醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2007，32（3）：261.

Pharmacokinetic Study of Lansoprazole in Gastric Ulcer Patients and Healthy Volunteers

PAN Gui-ling，HAN Qiang，ZHANG Yong-wen
（Dept.of Pharmacy，The Affiliated Hospital of Xuzhou Medical College，Xuzhou 221002，China）

OBJECTIVE：To compare the differences of pharmacokinetic profiles of lansoprazole between gastric ulcer patients and healthy volunteers in vivo.METHODS：12male subjects（6gastric ulcer patients and 6healthy volunteers）were given Lansoprazole injection 250mL via intravenous drip，and then the blood samples were collected at different time points.The concentration of lansoprazole was determined by HPLC-DAD.The pharmacokinetic parameters were analyzed using DAS2.0software.RESULTS：The pharmacokinetic parameters of lansoprazole in healthy volunteers vs.gastric ulcer patients after intravenous administration were as follows：t1/2（2.369±1.51）h vs.（2.835±0.99）h，tmax（0.332±0.09）h vs.（0.277±0.05）h，CL（19.882±8.19）L·h－1vs.（14.460±7.79）L·h－1，cmax（1092.09±169.69）μg·L－1vs.（910.76±69.91）ng·mL－1，AUC0～6.5（1475.98±590.23）ng·h·mL－1vs.（2278.73±567.92）ng·h·mL－1，MRT0～6.5（1.633±0.44）h vs.（1.833±0.42）h.CONCLUSION：The pharmacokinetic profiles of lansoprazole in gastric ulcer patients have changed compared with healthy volunteers.

Lansoprazole；Gastric ulcer；In vivo；Pharmacokinetic

R978.1+3；R969.2

A

1001-0408（2011）18-1665-04

Δ江蘇省臨床藥學(xué)研究奧賽康基金（P200806）

＊副主任藥師。研究方向：醫(yī)院藥學(xué)。電話：0516-85802060

#通訊作者：副主任藥師。研究方向：臨床藥學(xué)。電話：0516-85802195。E-mail：hanqiang1144@163.com

2010-06-11

2010-11-29）